【摘要】：目的:觀察比較核酸內(nèi)切酶結(jié)構(gòu)域內(nèi)含蛋白1(endonuclease domain containing1,ENDOD1)在良性前列腺增生和前列腺癌組織中的表達(dá)差異;篩選存在ENDOD1特異性低表達(dá)的前列腺癌細(xì)胞系,繼而通過(guò)調(diào)控該細(xì)胞ENDOD1蛋白表達(dá),研究其在前列腺癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能,初步探索ENDOD1基因與前列腺癌發(fā)生、進(jìn)展的聯(lián)系。方法:利用免疫組化SP法檢測(cè)20例良性前列腺增生和21例前列腺癌術(shù)后標(biāo)本組織中ENDOD1表達(dá)情況;利用RT-qPCR和Western blot方法觀察ENDOD1的mRNA和蛋白在前列腺正常上皮細(xì)胞和不同類型前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)差異,篩選出特異性低表達(dá)細(xì)胞系;構(gòu)建pCMV-N-Flag-ENDOD1重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞株,過(guò)表達(dá)ENDOD1蛋白,通過(guò)MTT法測(cè)定調(diào)控前后前列腺癌細(xì)胞活力的變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡,Transwell實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力的改變。結(jié)果:免疫組化評(píng)分的方差分析結(jié)果顯示ENDOD1表達(dá)與前列腺癌Gleason評(píng)分呈負(fù)性關(guān)聯(lián);RT-qPCR和Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ENDOD1在雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞系PC3和DU145中存在著特異性低表達(dá)(P0.05)。同時(shí),MTT實(shí)驗(yàn)顯示,在DU145細(xì)胞中,過(guò)表達(dá)ENDOD1腫瘤細(xì)胞活力顯著下降(P0.05);而流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明過(guò)表達(dá)ENDOD1能夠使DU145細(xì)胞周期停滯在G_0/G_1期,但細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯差異。此外,在Transwell實(shí)驗(yàn)中,過(guò)表達(dá)ENDOD1的DU145細(xì)胞遷移和侵襲能力明顯下降(P0.05)。結(jié)論:ENDOD1在Gleason評(píng)分越高的前列腺癌中表達(dá)越低,同時(shí)在雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞系存在著特異性低表達(dá);而過(guò)表達(dá)ENDOD1能明顯抑制雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移和侵襲能力。
[Abstract]:Objective: to investigate the difference of expression of endonuclease domain containing protein 1 (endonuclease domain containing 1 EndoD1 in benign prostatic hyperplasia (BPH) and prostate cancer tissues, and to screen prostate cancer cell lines with low ENDOD1 specific expression. By regulating the expression of ENDOD1 protein, the biological function of ENDOD1 protein in prostate cancer cells was studied, and the relationship between ENDOD1 gene and carcinogenesis and progression of prostate cancer was preliminarily explored. Methods: immunohistochemical SP method was used to detect the expression of ENDOD1 in 20 cases of benign prostatic hyperplasia and 21 cases of prostate cancer after operation. The expression of ENDOD1 mRNA and protein in normal prostate epithelial cells and different types of prostate cancer cells were observed by RT-qPCR and Western blot, and the specific low expression cell lines were screened out, and pCMV-N-Flag-ENDOD1 recombinant plasmid was constructed and transfected into prostate cancer cell lines. Overexpression of ENDOD1 protein was used to detect the changes of prostate cancer cell viability before and after regulation by MTT assay. Flow cytometry was used to detect cell cycle and apoptosis transwell assay was used to evaluate the changes of tumor cell migration and invasion ability. Results: the results of ANOVA showed that the expression of ENDOD1 was negatively correlated with Gleason score of prostate cancer. The results of RT-qPCR and Western blot showed that ENDOD1 was specifically low expressed in androgen independent prostate cancer cell lines PC3 and DU145 (P0.05). At the same time, MTT assay showed that overexpression of ENDOD1 decreased significantly in DU145 cells (P0.05), and flow cytometry showed that overexpression of ENDOD1 could make the cell cycle of DU145 cells stagnate at G0 / GS1 phase, but there was no significant difference in apoptosis rate. In addition, the migration and invasion ability of DU145 cells overexpression of ENDOD1 decreased significantly in Transwell experiment (P0.05). Conclusion the higher the Gleason score, the lower the expression of 1: ENDOD1 in prostate cancer, and the lower specific expression in androgen independent prostate cancer cell line, while the overexpression of ENDOD1 can inhibit the growth of androgen independent prostate cancer cells. Migration and invasion ability.
【作者單位】： 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院泌尿外科;中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院急診科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81402111) 廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.2015A030313031) 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金資助項(xiàng)目(No.A2016435)
【分類號(hào)】：R737.25

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本文編號(hào)：2128762