發(fā)布時間：2018-07-12 14:46

  本文選題：脂多糖 + Yes相關(guān)蛋白　； 參考：《醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報》2017年11期

【摘要】：目的慢性炎癥與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),但具體機制不詳。文章旨在探討脂多糖對肺腺癌A549細(xì)胞增殖的影響,并闡明YAP在其中所發(fā)揮的作用。方法培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞,應(yīng)用CCK-8法檢測不同濃度LPS對A549增殖的影響,用Western blot、免疫熒光技術(shù)檢測LPS處理后A549中YAP定量及定位的變化;實驗設(shè)空白組、NCsiRNA組、YAP siRNA1組、YAP siRNA2組、YAP siRNA3組細(xì)胞,分別提取RNA及蛋白,通過siRNA抑制YAP表達,Western blot、RT-PCR檢測siRNA抑制率;實驗設(shè)對照組、LPS組、YAP siRNA組、YAP siRNA+LPS組,用CCK-8再次檢測抑制YAP表達后LPS對A549細(xì)胞增殖影響。結(jié)果 LPS處理72 h后,與0μg/m L LPS處理后A值比較,0.01、0.1、1μg/m L處理后A值明顯增大(P0.05),0.1μg/m L LPS處理后細(xì)胞增殖能力仍最強。Western blot檢測發(fā)現(xiàn),與0μg/m L濃度比較,其他濃度的LPS處理A549細(xì)胞48 h后,均能上調(diào)YAP總蛋白的表達(P0.05),其中以0.1μg/m L濃度最明顯。RT-PCR檢測結(jié)果顯示,與空白組比較,YAP siRNA1組、YAP siRNA2組、YAP siRNA3組YAP mRNA的表達明顯降低(P0.05);與NC siRNA組比較,YAP siRNA1組、YAP siRNA2組、YAP siRNA3組YAP mRNA的表達明顯降低(P0.05)。Western blot檢測結(jié)果與RT-PCR一致,轉(zhuǎn)染YAP siRNA后能夠顯著抑制A549細(xì)胞中YAP蛋白的表達,其中以YAP siRNA1的抑制率最高(P0.05)。與對照組比較,LPS組24、48、72 h A549細(xì)胞均明顯增殖(1.17±0.08 vs 1.47±0.08、1.95±0.16 vs 2.35±0.07、2.46±0.07 vs 3.01±0.08,P0.05);與LPS組比較,YAP siRNA+LPS組48、72 h A549細(xì)胞增殖能力(1.92±0.15、2.38±0.07)明顯減弱(P0.05)。結(jié)論低濃度的LPS能夠通過上調(diào)核內(nèi)YAP的表達來促進A549細(xì)胞的增殖,這為LPS誘導(dǎo)的肺癌細(xì)胞增殖機制提供了新的理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective chronic inflammation is closely related to the occurrence and development of tumor, but the specific mechanism is unknown. The aim of this study was to investigate the effect of lipopolysaccharide on the proliferation of lung adenocarcinoma cell line A549 and to elucidate the role of YAP in it. Methods Human lung adenocarcinoma A549 cells were cultured. The effects of LPS on the proliferation of A549 cells were detected by CCK-8 method. The quantitative and localization changes of YAP in A549 cells treated with LPS were detected by Western blot and immunofluorescence technique. RNA and protein were extracted from YAP siRNA2 cells, and the inhibition rate of siRNA was detected by Western blotRT-PCR in the control group (LPS group), YAP siRNA group (LPS group) and YAP siRNA group (LPS group). The effect of LPS on the proliferation of A549 cells was detected by CCK-8. Results after lipopolysaccharide (LPS) treatment for 72 h, the A value of A549 cells was significantly higher than that of 0 渭 g / mL LPS treatment (P0.05). Western blot analysis showed that compared with 0 渭 g / mL LPS treatment, the proliferation ability of A549 cells treated with other concentrations of LPS was higher than that of 0 渭 g / mL LPS for 48 h. All of them could up-regulate the expression of YAP total protein (P0.05), and the concentration of 0.1 渭 g / mL was the most obvious. RT-PCR showed that, The expression of YAP mRNA in YAP siRNA1 group was significantly lower than that in control group (P0.05), and the expression of YAP mRNA in YAP siRNA1 group was significantly lower than that in NC siRNA group (P0.05). The results of Western blot detection were consistent with that of RT-PCR, and the expression of YAP mRNA in YAP siRNA1 group was significantly lower than that in NC siRNA group (P0.05), and the expression of YAP mRNA in YAP siRNA2 group was significantly lower than that in NC siRNA group (P0.05). YAP siRNA transfection could significantly inhibit the expression of YAP protein in A549 cells, in which YAP siRNA1 had the highest inhibition rate (P0.05). Compared with the control group, the proliferation of A549 cells in LPS group was significantly increased (1.17 鹵0.08 vs 1.47 鹵0.08 鹵1.95 鹵0.16 vs 2.35 鹵0.07 鹵2.46 鹵0.07 vs 3.01 鹵0.08 P 0.05), and the proliferation ability of A549 cells in LPS group was significantly decreased (1.92 鹵0.152.38 鹵0.07) compared with LPS group. Conclusion low concentration of LPS can promote the proliferation of A549 cells by upregulating the expression of YAP in nucleus, which provides a new theoretical basis for the mechanism of LPS-induced proliferation of lung cancer cells.
【作者單位】： 蘇北人民醫(yī)院/揚州大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院呼吸內(nèi)科;
【基金】：江蘇省自然科學(xué)基金(BK20160451)
【分類號】：R734.2

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本文編號：2117502