發(fā)布時(shí)間：2018-07-09 23:05

  本文選題：肺腺癌 + miR--p��； 參考：《中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)》2017年04期

【摘要】：先前研究表明,miR-186-5p在人類許多惡性腫瘤中扮演抑癌基因的作用,但其在肺腺癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用并不明確。本研究旨在證明,miR-186-5p可通過靶向調(diào)控PTTG1抑制肺腺癌細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。我們首先分析了miR-186-5p在人肺癌細(xì)胞中的表達(dá)。熒光定量PCR(QRT-PCR)結(jié)果顯示,與人正常肺上皮細(xì)胞BEAS-2B相比,肺腺癌細(xì)胞SPC-A1、A549中的miR-186-5p表達(dá)量明顯降低。為研究miR-186-5p在肺腺癌細(xì)胞中的功能,利用GV369-miR-186-5p表達(dá)載體,實(shí)現(xiàn)了在A549細(xì)胞中的過表達(dá)�；蜣D(zhuǎn)染結(jié)合Transwell侵襲結(jié)果顯示,與對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞相比,過表達(dá)miR-186-5p的A549細(xì)胞的體外侵襲能力明顯下降。Western印跡檢測(cè)細(xì)胞中EMT相關(guān)標(biāo)志物揭示,GV369-miR-186-5p轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞中的上皮-鈣黏著蛋白(E-cadherin)表達(dá)明顯上調(diào),而神經(jīng)-鈣黏著蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表達(dá)明顯下調(diào)。同時(shí),GV369-miR-186-5p轉(zhuǎn)染引起其靶基因——垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因1(pituitary tumor-transforming gene 1,PTTG1)編碼蛋白在A549細(xì)胞中明顯降低。重要的是,過表達(dá)miR-186-5p與敲減PTTG1均可導(dǎo)致上皮-鈣黏著蛋白表達(dá)上調(diào),而神經(jīng)-鈣黏著蛋白和波形蛋白下調(diào);而miR-186-5p和PTTG1表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染后,3種EMT相關(guān)標(biāo)志物在A549的表達(dá)與對(duì)照細(xì)胞的表達(dá)無明顯差異,提示過表達(dá)PTTG1可抵消miR-186-5p對(duì)EMT相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)的影響。綜上所述,miR-186-5p可通過靶向調(diào)控PTTG1抑制EMT的發(fā)生,進(jìn)而抑制肺腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:Previous studies have shown that miR-186-5p plays a role as a tumor suppressor gene in many human malignancies, but its role in epithelial-mesenchymal transition is not clear. The aim of this study was to demonstrate that miR-186-5p can inhibit the epithelial-interstitial transformation of lung adenocarcinoma cells by targeting PTTG1. We first analyzed the expression of miR-186-5p in human lung cancer cells. The results of fluorescence quantitative PCR (QRT-PCR) showed that the expression of miR-186-5p in human lung adenocarcinoma cell line SPC-A1 / A549 was significantly lower than that in normal human lung epithelial cell line BEAS-2B. In order to study the function of miR-186-5p in lung adenocarcinoma cells, overexpression of miR-186-5p in A549 cells was achieved by using GV369-miR-186-5p expression vector. The results of gene transfection combined with Transwell invasion showed that compared with A549 cells transfected with control plasmid, The invasion ability of A549 cells overexpressed by miR-186-5p was significantly decreased. Western blot analysis revealed that the expression of E-cadherin in A549 cells transfected with GV369-miR-186-5p was up-regulated, and the expression of E-cadherin was up-regulated by Western blotting. The expression of N-cadherin and vimentin (vimentin) was down-regulated. At the same time, GV369-miR-186-5p transfection resulted in the decrease of pituitary tumor transforming gene 1 (pituitary tumor-transforming gene 1 / PTTG1) coding protein in A549 cells. Importantly, overexpression of miR-186-5p and knockdown of PTTG1 could result in up-regulation of epithelial-cadherin expression, but down-regulation of neuron-cadherin and vimentin. However, after co-transfection of miR-186-5p and PTTG1, the expression of three EMT related markers in A549 cells was not significantly different from that in control cells, suggesting that over-expression of PTTG1 could counteract the effect of miR-186-5p on the expression of EMT related markers. In conclusion, miR-186-5p can inhibit the development of EMT by targeting PTTG1, and then inhibit the invasion and metastasis of lung adenocarcinoma cells.
【作者單位】： 山東省濰坊醫(yī)學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;山東省濰坊醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室;山東省濰坊醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)研究實(shí)驗(yàn)中心;山東省濰坊醫(yī)學(xué)院護(hù)理學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目(No.81402389,No.81641111) 山東省自然科學(xué)基金(No.ZR2015HL065) 山東省高等學(xué)�？萍加�(jì)劃(No.J12LK03,J13LK03) 濰坊醫(yī)學(xué)院大學(xué)生科技創(chuàng)新基金項(xiàng)目(No.KX2016016,KX2016022)資助~~
【分類號(hào)】：R734.2

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