發(fā)布時(shí)間：2018-07-09 16:23

  本文選題：ING4 + MMP-9��； 參考：《錦州醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的本實(shí)驗(yàn)旨在探究乳腺癌中ING4和MMP-9的表達(dá)情況,分析二者之間的相關(guān)性及臨床意義,為判斷乳腺癌的轉(zhuǎn)移潛能、預(yù)后及指導(dǎo)患者臨床個(gè)性化治療等提供一定的理論依據(jù)。方法1.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)83例乳腺癌組織中ING4和MMP-9的表達(dá),分析其與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系及二者之間的相關(guān)性。2.將ING4-siRNA轉(zhuǎn)染到已培養(yǎng)好的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231內(nèi),實(shí)驗(yàn)分三組:轉(zhuǎn)染ING4-siRNA組(實(shí)驗(yàn)組)、Control-siRNA組(對(duì)照組)和未轉(zhuǎn)染的空白組。3.Real-time PCR檢測(cè)ING4基因m RNA情況,Western-blot檢測(cè)蛋白表達(dá)情況,以判斷轉(zhuǎn)染效果并篩選出ING4缺失的細(xì)胞。4.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)和遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ING4沉默后對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的侵襲、遷移的影響。5.Western-blot檢測(cè)三組細(xì)胞中ING4沉默后MMP-9蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果1.83例浸潤(rùn)性乳腺癌組織中ING4和MMP-9的陽性表達(dá)率分別為43.4%(36/83)和73.5%(61/83),二者的表達(dá)與患者的組織學(xué)分級(jí)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤臨床TNM分期有關(guān)(P0.05),ING4的表達(dá)與MMP-9的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。2.Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果表明:三組MDA-MB-231細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染ING4-siRNA組ING4的m RNA表達(dá)量明顯低于其他兩組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);而Control-siRNA組和空白組ING4的m RNA表達(dá)量之間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.Western-blot檢測(cè)三組MDA-MB-231細(xì)胞的結(jié)果:轉(zhuǎn)染ING4-siRNA組ING4蛋白表達(dá)量明顯低于另外兩組,差異具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);而Control-siRNA組和空白組的ING4蛋白表達(dá)量之間無顯著性差異(P0.1)。4.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組和空白組穿過基質(zhì)膠和濾膜的細(xì)胞數(shù)分別為(215.35±8.12)、(118.50±5.03)和(119.72±6.20)個(gè),三組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),三組相比,實(shí)驗(yàn)組分別比對(duì)照組和空白組的穿膜細(xì)胞數(shù)多。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組和空白組的穿膜細(xì)胞數(shù)分別為(348.14±10.56)、(238.32±5.12)和(251.23±7.02),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),實(shí)驗(yàn)組穿膜細(xì)胞數(shù)明顯高于另外兩組。而對(duì)照組和空白組之間無明顯差異(P0.1)。5.Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染ING4-siRNA組經(jīng)ING4沉默后MMP-9蛋白表達(dá)量明顯上調(diào),差異有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論1.ING4和MMP-9的表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),二者可存在相互協(xié)同作用,臨床上將兩者聯(lián)合檢測(cè)可能為乳腺癌早期診斷和臨床個(gè)性化治療及預(yù)后提供一定的參考。2.ING4表達(dá)降低或缺失不僅能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移,而且還能上調(diào)MMP-9蛋白的表達(dá)。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of ING4 and MMP-9 in breast cancer and to analyze their correlation and clinical significance in order to provide a theoretical basis for judging the metastatic potential of breast cancer, prognosis and guiding individualized treatment. Method 1. Immunohistochemical method was used to detect the expression of ING4 and MMP-9 in 83 cases of breast cancer. ING4-siRNA was transfected into the cultured breast cancer cell line MDA-MB-231. It was divided into three groups: transfected ING4-siRNA group (experimental group) and control group (control group) and untransfected blank group. 3. Real-time PCR was used to detect the expression of ING4 gene mRNA by Western-blot. In order to judge the transfection effect and screen out the ING4 missing cells. 4. Transwell invasion assay and migration assay were used to detect the invasion of MDA-MB-231 cells after ING4 silencing and the effect of migration. 5. Western-blot was used to detect the expression of MMP-9 protein after ING4 silencing in MDA-MB-231 cells. Results 1.The positive expression rates of ING4 and MMP-9 in 83 cases of invasive breast cancer were 43.4% (36 / 83) and 73.5% (61 / 83), respectively. The expression of ING4 was negatively correlated with the expression of MMP-9 in MDA-MB-231 cells. 2. Real-time PCR analysis showed that the mRNA expression of ING4 in the transfected ING4-siRNA group was significantly lower than that in the other two groups. There was no significant difference in mRNA expression of ING4 between Control-siRNA group and blank group (P0.05). 3. Western-blot analysis of MDA-MB-231 cells in three groups: the expression of ING4 protein in transfected ING4-siRNA group was significantly lower than that in other two groups. There was no significant difference in the expression of ING4 protein between Control-siRNA group and blank group (P0.1) .4.Transwell invasion experiment showed that the number of cells passing through matrix glue and filter membrane in experimental group, control group and blank group were (215.35 鹵8.12), (118.50 鹵5.03) and (119.72 鹵6.20), respectively. There were significant differences among the three groups (P0.01). Compared with the control group and the blank group, the number of perforating cells in the experimental group was more than that in the control group and the blank group. The results of Transwell migration experiment showed that: experimental group, The number of perforating cells in the control group and the blank group were (348.14 鹵10.56), (238.32 鹵5.12) and (251.23 鹵7.02), respectively. The number of perforating cells in the experimental group was significantly higher than that in the other two groups (P0.01). There was no significant difference between control group and blank group (P0.1). 5. Western-blot analysis showed that the expression of MMP-9 in ING4-siRNA transfected group was up-regulated after ING4 silencing, and the difference was statistically significant (P0.01). Conclusion 1. The expression of ING4 and MMP-9 is closely related to the occurrence and development of breast cancer. The combined detection may provide some reference for early diagnosis, individualized treatment and prognosis of breast cancer. 2. The decrease or absence of ING4 expression can not only promote the invasion and metastasis of breast cancer cells, but also up-regulate the expression of MMP-9 protein.
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：2109936