本文選題：非小細(xì)胞肺癌 + 黃芪甲甙　； 參考：《成都中醫(yī)藥大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景與目的：肺癌是世界上發(fā)病率最高的惡性腫瘤,化療是治療肺癌的主要手段之一,但過去25年其5年生存率仍未見顯著提高,約為15%。而多藥耐藥(MDR)是肺癌化療失敗的主要原因之一。在肺癌化療中,順鉑(DDP)是有效并廣泛應(yīng)用的一線藥物,是一種細(xì)胞周期非特異性的細(xì)胞毒藥物。目前認(rèn)為抗癌細(xì)胞凋亡、損傷修復(fù)過程中DNA剪切物的增加、與調(diào)控信號(hào)通路相關(guān)的調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)的改變、藥物攝取減少導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)CDDP濃度降低等均可能與順鉑的耐藥有關(guān),然而肺癌細(xì)胞對(duì)其耐藥的機(jī)制尚未完全闡明。Ras基因位于PI3K/AKT通路的上游,而PI3K/AKT通路是最主要的抗凋亡通路。研究發(fā)現(xiàn)AKT1的過表達(dá)和基因擴(kuò)增與肺癌細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥密切相關(guān),抑制AKT1的表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)順鉑的耐藥。研究發(fā)現(xiàn)B7-H3在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá),因而受到越來越多的關(guān)注,研究發(fā)現(xiàn)B7-H3是通過某些機(jī)制參與調(diào)節(jié)了腫瘤促凋亡或抗凋亡的基因,認(rèn)為有可能成為某些腫瘤的新診斷標(biāo)志物和潛在治療靶點(diǎn)。黃芪甲甙(Astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)是黃芪的主要成分之一。研究表明,AS-IV可以通過調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞以及PKC-α-ERK1/2-NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)途徑抑制肺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。研究目的是(1)通過比較黃芪口服液輔助化療和常規(guī)化療治療老年肺癌患者的療效及對(duì)免疫功能的影響,以期為黃芪口服液輔助化療治療老年肺癌提供一定的臨床依據(jù)；(2)研究通過檢測(cè)B7-H3在肺癌細(xì)胞系中的表達(dá),分析B7-H3對(duì)肺癌細(xì)胞系的影響；(3)CCK-8評(píng)估不同濃度黃芪甲甙聯(lián)合順鉑作用于A549/DDP細(xì)胞, 觀察A549/DDP細(xì)胞增殖影響；(4)CCK-8法檢測(cè)siRNAB7-H3后,黃芪甲甙聯(lián)合順鉑對(duì)細(xì)胞增殖的影響；(5)探討在耐藥的肺癌細(xì)胞中B7-H3與Ras/AKT信號(hào)通路之間相互作用。研究方法：1、通過比較黃芪口服液輔助化療和常規(guī)化療治療老年肺癌患者RR、DCR和生產(chǎn)率的比較,及外周血中CD3+、CD4+、CD8+及NK淋巴細(xì)胞變化；2、利用免疫組化法檢測(cè)NSCLC腫瘤組織、癌旁組織及良性病變組織中B7-H3的表達(dá)量,并收集患者臨床資料,分析B7-H3與臨床參數(shù)的關(guān)系；qRT-PCR和蛋白印跡法測(cè)定不同肺癌細(xì)胞系中B7-H3的變化；3、CCK-8法評(píng)估AS-Ⅳ對(duì)A549、A549/DDP增殖抑制情況；評(píng)估順鉑耐藥倍數(shù)及毒性劑量；以及AS-Ⅳ與順鉑的最佳聯(lián)合劑量；4.siRNAB7-H3后,AS-IV、順鉑及聯(lián)合干預(yù)A549/DDP細(xì)胞后增殖抑制情況；5、藥物干預(yù)不同細(xì)胞組后,蛋白印跡法B7-H3、Ras、pAKT1蛋白的變化。研究結(jié)果：1、結(jié)果顯示,兩組患者的RR、DCR相比,均無顯著性差異(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組患者6個(gè)月、12個(gè)月及18個(gè)月的生存率均明顯高于對(duì)照組,具有顯著性差異(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組CD3+、CD4+、CD8+、及NK細(xì)胞的活性比對(duì)照組明顯增高,具有顯著性差異(P0.05)。2、研究發(fā)現(xiàn)B7-H3在A549及SPAC-1中表達(dá)較低,在H466、H1299及H460中表達(dá)較高。免疫組化檢測(cè)NSCLC患者組織發(fā)現(xiàn),B7-H3表達(dá)于細(xì)胞膜或胞漿內(nèi)或兩者內(nèi)均有表達(dá)。B7-H3陽性表達(dá)率在肺癌組織中高于良性病變組織和癌旁組織,良性病變組織較癌旁組織表達(dá)量高。B7-H3的表達(dá)強(qiáng)度與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),可能與非小細(xì)胞肺癌進(jìn)展相關(guān)；3、本實(shí)驗(yàn)人肺腺癌A549經(jīng)不同濃度AS-Ⅳ干預(yù)48h后,細(xì)胞增殖抑制率隨著AS-Ⅳ濃度的增高,A549細(xì)胞的增殖抑制率升高；A549/DDP經(jīng)不同濃度AS-Ⅳ干預(yù)48h后,細(xì)胞增殖抑制率隨著AS-Ⅳ濃度的增高,12ng/ml、24ng/ml與對(duì)照組比較,統(tǒng)計(jì)有意義,P0.01；DDP耐藥倍數(shù)為14.14倍,細(xì)胞高度耐藥；12ng/mlAS-IV聯(lián)合DDPO.625 ug/mL,協(xié)同效果最好；4、B7-H3表達(dá)下調(diào)抑制了A549/DDP細(xì)胞增殖；4、B7-H3表達(dá)下調(diào)聯(lián)合AS-Ⅳ、DDP非常顯著的抑制了A549/DDP細(xì)胞增殖；5、抑制B7-H3聯(lián)合AS-Ⅳ作用后B7-H3、Ras、pAKT1表達(dá)下降最明顯,提示AS-Ⅳ可能抑制B7-H3并通過B7-H3/Ras/pAKT1/,抑制細(xì)胞的抗凋亡,使其產(chǎn)生增敏作用。結(jié)論：研究表明,1、黃芪聯(lián)合化療可以提高臨床療效,可以升高淋巴細(xì)胞數(shù)量；2、B7-H3在NSCLC組織及肺癌細(xì)胞中的表達(dá)上升；3、AS-Ⅳ對(duì)肺癌細(xì)胞有抑制作用,呈現(xiàn)濃度趨勢(shì)；4、AS-Ⅳ聯(lián)合順鉑可增加腫瘤細(xì)胞抑制率；5、抑制B7-H3可以抑制Ras/pAKT1的活化；6、AS-Ⅳ可通過下調(diào)B7-H3,抑制Ras/pAKT1活化,促進(jìn)了順鉑的化療敏感性。
[Abstract]:In the past 25 years , cisplatin ( DDP ) is an effective and widely used first - line drug , which is one of the main causes of lung cancer chemotherapy .
( 2 ) To study the expression of B7 - H3 in lung cancer cell line and to analyze the effect of B7 - H3 on lung cancer cell line .
( 3 ) CCK - 8 was used to evaluate the effect of astragalus administration with cisplatin on A549 / DDP cells and to observe the proliferation of A549 / DDP cells .
( 4 ) CCK - 8 method was used to detect the effect of siRNAB7 - H3 on cell proliferation after siRNAB7 - H3 .
( 5 ) To investigate the interaction between B7 - H3 and Ras / T signaling pathway in drug - resistant lung cancer cells . Methods : 1 . To compare the ratio of RR , DCR and productivity in elderly patients with lung cancer by comparing the adjuvant chemotherapy with conventional chemotherapy and conventional chemotherapy , and the changes of CD3 + , CD4 + , CD8 + and NK lymphocytes in peripheral blood .
2 . The expression of B7 - H3 in NSCLC tumor tissues , adjacent tissues and benign lesions was detected by immunohistochemistry , and the clinical data of patients were collected , and the relationship between B7 - H3 and clinical parameters was analyzed .
Quantitative Analysis of B7 - H3 in Different Lung Cancer Cell Lines by qRT - PCR and Western Blotting
3 銆，

本文編號(hào)：2088385