本文選題：lncRNA + DB327252�。� 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景與目的：肺癌是世界上發(fā)病率和死亡率最高,增長(zhǎng)最快的惡性腫瘤之一,嚴(yán)重威脅著人類的健康和生命。2016年1月25日,全球癌癥領(lǐng)域頂級(jí)雜志--《CA：臨床醫(yī)師癌癥雜志》(CA Cancer J Clin)在線發(fā)表了國(guó)家癌癥中心公布的2015年癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示：2015年中國(guó)癌癥總發(fā)病429.16萬(wàn)例,總死亡281.42萬(wàn)例,其中肺癌的發(fā)病率最高,并且肺癌的死亡率也排在各種不同類型腫瘤之首。據(jù)統(tǒng)計(jì),2015年全國(guó)肺癌發(fā)病73.33萬(wàn),死亡61.02萬(wàn)。雖然在肺癌的診斷和治療上取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步,然而肺癌的5年生存率仍然低于15%。究其原因,一方面限于目前對(duì)肺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等機(jī)制還不是非常明確,同時(shí)缺乏有效、敏感的早期診斷、監(jiān)測(cè)等指標(biāo),患者就診時(shí)往往已經(jīng)是腫瘤晚期,這是導(dǎo)致患者預(yù)后不良的主要因素；另一方面,目前肺癌的治療手段除了手術(shù)以外,常規(guī)的放／化療有效率不高,雖然靶向藥物的臨床應(yīng)用使得肺癌的治療取的比較矚目的進(jìn)展,但是如何提高藥物治療的有效率,解決化療及靶向藥物治療過(guò)程中出現(xiàn)的耐藥問(wèn)題,仍然是當(dāng)前肺癌治療過(guò)程中亟需解決的一個(gè)問(wèn)題。已有的研究表明,基因表達(dá)和基因調(diào)控異�？赡苁菒盒阅[瘤發(fā)生、發(fā)展的內(nèi)因和基礎(chǔ),通過(guò)對(duì)肺癌發(fā)生機(jī)制進(jìn)行深入探討,尋找可能存在的與肺癌生物學(xué)活性相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記物,探討其作用于肺癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制,從而做到對(duì)肺癌治療的有的放矢。在早期的腫瘤研究中,人們的注意力主要集中在蛋白編碼基因在肺癌發(fā)病機(jī)制上的研究。上世紀(jì)末進(jìn)行的人類全基因組研究發(fā)現(xiàn),在人類基因組的轉(zhuǎn)錄本當(dāng)中,大約只有2%的基因具有編碼蛋白能力,與此同時(shí),90%以上的基因并不具備編碼蛋白的能力,他們往往被轉(zhuǎn)錄成非編碼RNA (non-coding RNA, ncRNA),這些ncRNAs發(fā)揮的基因調(diào)控作用在肺癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。依據(jù)核苷酸的長(zhǎng)度,我們把ncRNA又分為兩大類：分別為核苷酸長(zhǎng)度少于200nt的短鏈非編碼RNA和核苷酸長(zhǎng)度大于200nt的長(zhǎng)鏈非編碼RNA (lncRNA)。在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間里,人們一度對(duì)短鏈ncRNA的研究比較多,研究結(jié)果也提示了短鏈非編碼RNA與宿主基因之間的相互調(diào)控作用在腫瘤演變的過(guò)程中扮演著重要的角色。隨著近幾年對(duì)lncRNA的研究不斷深入,越來(lái)越多的研究提示lncRNA與短鏈RNA在腫瘤的演變過(guò)程中,發(fā)揮著類似的調(diào)控基因功能的作用。lncRNA一度曾被認(rèn)為僅僅是RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄時(shí)的副產(chǎn)物,是基因轉(zhuǎn)錄時(shí)的“噪音”和“垃圾”,并不具有特定的生物學(xué)功能,是一個(gè)“暗物質(zhì)”。然而,隨著這些年的研究發(fā)現(xiàn),lncRNA在多種類型腫瘤細(xì)胞(包括乳腺癌、肝癌、前列腺癌、肺癌、黑色素瘤等)的增殖、克隆、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移以及藥物耐藥等方面均發(fā)揮著重要的過(guò)程,至此,lncRNA的面紗才逐步揭開(kāi)。隨著研究的逐步深入,越來(lái)越多的lncRNA在基因調(diào)節(jié)等方面的功能被揭示出來(lái)。在已完成的一些關(guān)于1ncRNA與肺癌關(guān)系的研究中,提示lncRNA通過(guò)干擾蛋白編碼基因表達(dá)、介導(dǎo)染色質(zhì)重構(gòu)和蛋白修飾、干擾nRNA的剪切、調(diào)控基因表達(dá)水平、調(diào)節(jié)響應(yīng)單白活性、改變蛋白的胞質(zhì)定位等機(jī)制參與肺癌細(xì)胞的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移、凋亡以及細(xì)胞耐藥等一系列過(guò)程。但總體來(lái)說(shuō),lncRNA的調(diào)控作用概括起來(lái)主要在三個(gè)層面實(shí)現(xiàn),分別為：轉(zhuǎn)錄調(diào)控、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控和表觀遺傳學(xué)調(diào)控。為了更好的了解lncRNA在非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)化過(guò)程中的作用,我們收集了廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院胸外科2014年1月到2014年6月臨床上符合本研究的83例原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌的標(biāo)本及其癌旁組織(5cm),通過(guò)基因芯片進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)一些在肺癌組織與癌旁組織中表達(dá)有差異的LncRNA,并在其中挑選出表達(dá)差異比較大的lncRNA DB327252作為本課題的研究對(duì)象,通過(guò)與所收集的標(biāo)本的臨床病理資料進(jìn)行比較,探討lncRNA DB327252的表達(dá)與臨床特征之間的關(guān)系。進(jìn)一步的研究是通過(guò)選擇lncRNA DB327252表達(dá)水平比較高的肺癌A54916HBE-T細(xì)胞作為研究對(duì)象,構(gòu)建干擾序列siRNA,通過(guò)轉(zhuǎn)染沉默A549及16HBE-T細(xì)胞株中的DB327252的表達(dá),觀察目的基因沉默后在細(xì)胞周期、凋亡、侵襲能力、遷移能力等方面發(fā)生的變化,進(jìn)一步構(gòu)建shRNA質(zhì)粒穩(wěn)定表達(dá)載體,通過(guò)體外軟瓊脂集落實(shí)驗(yàn)及裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn),觀察lnc DB327252表達(dá)與腫瘤生長(zhǎng)之間的關(guān)系。方法1.肺癌組織樣本采集收集2014年1月至2014年6月期間,中國(guó)人民解放軍廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院胸外科進(jìn)行的肺癌根治手術(shù)或肺癌姑息性切除手術(shù)患者的肺癌原發(fā)病灶的腫瘤組織及癌旁組織標(biāo)本(要求癌旁組織距癌中心組織距離5cm),選取符合本研究要求的83例原發(fā)性肺非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本進(jìn)行研究,標(biāo)本要求在術(shù)前未進(jìn)行過(guò)放化療及免疫、靶向治療,同時(shí)收集腫瘤樣本患者的一般臨床信息和詳細(xì)的病理資料,建立隨訪數(shù)據(jù)庫(kù)。生物標(biāo)本的收集符合無(wú)菌的原則,并征得患者本人同意及廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。2.細(xì)胞系及培養(yǎng)方法通過(guò)購(gòu)買或受贈(zèng)獲得正常人類支氣管上皮細(xì)胞株BEAS-2B、16HBE-N;肺癌細(xì)胞株A549、H1299、H446、H460以及通過(guò)惡性誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化成的16HBE-T細(xì)胞株,使用含有10%的胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)和1%青鏈霉素混合液(100IU/ml青霉素,100ug/ ml鏈霉素)的MEM培養(yǎng)基(Modified Eagle's Medium,美國(guó)HyClone公司)或RPMI-1640培養(yǎng)基(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)進(jìn)行培養(yǎng),置于37℃,5 %(v/v) CO2,飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱中。3.總RNA提取及qRT-PCR分析應(yīng)用Trizol法提取組織細(xì)胞總RNA,應(yīng)用熒光染料法(SYBR Green II)進(jìn)行基因芯片實(shí)驗(yàn),檢測(cè)1ncRNA的表達(dá)含量,并通過(guò)實(shí)時(shí)定量(qRT-PCR)檢測(cè)各細(xì)胞株中的lncRNA DB327252的表達(dá)水平,并篩選出表達(dá)比較高的細(xì)胞株作為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究的對(duì)象。4. SiRNA干擾序列的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 制備lncRNA DB327252 siRNA/ Lipofectamine-2000復(fù)合物,依照轉(zhuǎn)染說(shuō)明書(shū)中的步驟對(duì)A549、16HBE-T細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,用qRT-PCR對(duì)干擾的效果進(jìn)行定量分析,分別在4Onmol/L濃度下和轉(zhuǎn)染48h后進(jìn)行觀察,篩選出干擾效率最高的siRNA (70%)進(jìn)行下一步研究。5.細(xì)胞增殖能力檢測(cè)將適量細(xì)胞接種于96孔板上,分別于轉(zhuǎn)染后6 h、12h、24h、48h和72h進(jìn)行檢測(cè),用CCK-8 (Cell Counting Kit-8)試劑盒檢測(cè)A549/siRNA、16HBE-T/siRNA細(xì)胞增殖能力。全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)各組樣品吸光值,根據(jù)細(xì)胞增殖率計(jì)算公式,計(jì)算出細(xì)胞活力。6.平板克隆情況檢測(cè)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,接種于6孔板,接種14天后觀察,當(dāng)肉眼可見(jiàn)細(xì)胞克隆時(shí)終止實(shí)驗(yàn),用0.1%結(jié)晶紫染色,計(jì)算克隆形成率。7.細(xì)胞周期情況檢測(cè)6孔板接種細(xì)胞后無(wú)菌抗菌素培養(yǎng)基37℃, 5％CO2培養(yǎng)24h后轉(zhuǎn)染siRNA,48h后收集細(xì)胞并用70%乙醇固定,-20℃過(guò)夜,再用PI染色,通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各細(xì)胞周期細(xì)胞的分布情況。8.細(xì)胞凋亡檢測(cè)將適量細(xì)胞接種于6孔板,培養(yǎng)基37℃,5%C02培養(yǎng)24h后轉(zhuǎn)染siRNA,48h后收集細(xì)胞,洗滌、固定、透化,按照Annexin V-FTIC/PI試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況。9.體外侵襲實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染24h后,用胰酶消化并制成單個(gè)細(xì)胞懸液,于每孔5×104個(gè)細(xì)胞的密度接種于Tanswell用的24孔板的上室,將500ul含20%FBS的DMEM培養(yǎng)基加入小室下層,培養(yǎng)24h后計(jì)算細(xì)胞侵襲率。10.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染24h后,待細(xì)胞生長(zhǎng)至100%匯合時(shí),用槍頭垂直在平板上劃線。把脫落的細(xì)胞沖洗干凈,37℃培養(yǎng)基培養(yǎng)24h,每6h顯微鏡下檢測(cè)一次,并拍照記錄,計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)覆蓋區(qū)面積比。11.軟瓊脂實(shí)驗(yàn)6孔板每孔先鋪好含2ml 0.6%底層瓊脂,再于每孔加2 ml含細(xì)胞混合液(細(xì)胞濃度1×104個(gè)/ml)的0.3%低熔點(diǎn)瓊脂糖,配置成上層瓊脂,培養(yǎng)箱培養(yǎng)21天后,計(jì)算細(xì)胞克隆數(shù)(50個(gè)細(xì)胞)。12.建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株用500ug/ml的G418篩選培養(yǎng)濃度,Lipofectamine-2000轉(zhuǎn)染shRNA,24h后細(xì)胞傳代,繼續(xù)培養(yǎng),10-14天左右挑選單克隆細(xì)胞,制備成懸液并進(jìn)行計(jì)數(shù)。繼續(xù)培養(yǎng),等待細(xì)胞大量擴(kuò)增以后,提取細(xì)胞總RNA,采用熒光定量檢測(cè)的辦法檢測(cè)目的基因的表達(dá)是否下降。13.裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)用PBS把已用胰酶消化的細(xì)胞洗滌兩遍后重懸,于4周齡的BALB/c裸鼠腹股溝皮下注射分別注射約150μ1含5×106個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液,兩側(cè)腹股溝分別注射siRNA-nc和shRNA細(xì)胞作為對(duì)比。注射后每人觀察裸鼠的精神狀態(tài)、反應(yīng)、飲食、活動(dòng)力、毛色、毛順滑度及腹股溝皮下腫瘤的生長(zhǎng)的情況,記錄成瘤的潛伏時(shí)間。成瘤后隔天應(yīng)用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)徑(a)、短徑(b),28天后將裸鼠處死,解剖取出腫瘤,電子稱稱重。14.統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 20.0軟件對(duì)測(cè)量的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有的試驗(yàn)數(shù)據(jù)均至少重復(fù)3次測(cè)量,數(shù)據(jù)以x±s表示。計(jì)數(shù)資料兩組間的比較用雙側(cè)t檢驗(yàn),3組資料的比較采用單因素的方差分析,取p0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.基因芯片檢測(cè)結(jié)果提取83例非小細(xì)胞肺癌組織及其癌旁組織細(xì)胞的總RNA,應(yīng)用基因芯片進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)lncRNA DB327252的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織,統(tǒng)計(jì)學(xué)有明顯差異(p0.05)。2.LncRNA DB327152表達(dá)與肺癌臨床特征的關(guān)系以中位數(shù)的LncRNADB327152表達(dá)水平(M=4.39)為界點(diǎn),將臨床資料分為高表達(dá)組(4.39)和低表達(dá)組(4.39),通過(guò)比較發(fā)現(xiàn),DB327252的高表達(dá)與患者的性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不相關(guān)(P0.05),與吸煙(p=0.045)、組織學(xué)類型(p=0.023)、腫瘤大小(p=0.037夕以及TNM分期(p=0.002)相關(guān),其中吸煙組人群中DB327152表達(dá)高于非吸煙組人群,腺癌組的表達(dá)水平明顯高于非腺癌組,≥3cm腫瘤組的表達(dá)水平高于3cm腫瘤組,TNM/Ⅱ-Ⅳ期中的表達(dá)明顯高于TNM/I期中的表達(dá)水平。3.LncRNA DB327152在不同細(xì)胞株的表達(dá)水平與正常人類的支氣管上皮細(xì)胞株BEAS.2B細(xì)胞相比較,16HBE-N是BEAS-2B的(1.184±0.137)倍,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；16HBE-T、A549、H1299、H446、H460分別是BEAS-2B的(16.259±1.209)倍、(20.596±1.81)倍、(17.009±0.890)倍、(16.088±2.002)倍、(12.496±0.907)倍,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),提示在惡性腫瘤細(xì)胞中,ncRNA DB327152普遍高表達(dá)。4.篩選siRNA分別用1個(gè)陰性對(duì)照序列(siRNA-nc)和4個(gè)siRNA序列 (siRNA-1.siRNA-2.siRNA-3.siRNA-4)轉(zhuǎn)染,來(lái)下調(diào)目的基因的表達(dá),并檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的干擾效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在A549細(xì)胞株中,siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4的干擾效率分別達(dá)到66%、77%、58%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；在16HBE-T細(xì)胞株中,siRNA-2、siRNA-3的干擾效率分別達(dá)到65%、67%,同樣差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5. lncRNA DB327252對(duì)細(xì)胞增殖的影響A549細(xì)胞株中,與空白組相比,轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照組siRNA-nc的細(xì)胞存活比例為(99.15±2.87)%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),可將siRNA-nc作為標(biāo)準(zhǔn)。將siRNA-2組、siRNA-3組細(xì)胞與siRNA-nc進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)siRNA-2組、siRNA-3組細(xì)胞的存活比例分別降至(36.20±1.88)%、(34.17±2.27)%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);在16HBE-T細(xì)胞株中,與空白組相比,siRNA-nc組細(xì)胞存活比例為(96.21±1.2)%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與siRNA-nc組相比,siRNA-2組、siRNA-3組細(xì)胞的存活比例分別降為(37.32±5.41)%、(39.00±1.72)%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),提示lnc RNA DB327252的表達(dá)下調(diào),A549/siRNA-2、A549/siRNA-3、 16HBE-T/siRNA-2、16HBE-T/siRNA-3細(xì)胞的增殖受到明顯抑制。6.平板克隆檢測(cè) 觀察染色后50個(gè)細(xì)胞的克隆數(shù),經(jīng)過(guò)計(jì)算,得出A549/siRNA-1、siRNA-2克隆形成率與A549/siRNA-nc相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；同樣,16HBE-T/siRNA-1、siRNA-2的克隆形成率與16HBE-T/ siRNA-nc相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),提示lncRNA DB327252的表達(dá)下調(diào),A549/siRNA-2、A549/siRNA-3、6HBE-T/siRNA-2、16HBE-T/siRNA-3細(xì)胞的克隆能力下降。7. lncRNA DB327252對(duì)細(xì)胞周期的影響應(yīng)用流式細(xì)胞儀對(duì)PI染色后的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn),在A549/siRNA細(xì)胞株中,與siRNA-nc組相比,siRNA-2組中G0/G1細(xì)胞的比例上升至80.7%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p 0.05)；siRNA-3組G0/G1細(xì)胞的比例上升至81.3%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。在G2/M期中,siRNA-2組和siRNA-3組的比例分別降至5.61%、7.87%,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在S組中, siRNA-2組和siRNA-3組的比例分別降至13.72%和10.88%,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);16HBE-T/siRNA細(xì)胞株中,與siRNA-nc組相比,siRNA-2組中G0/G1細(xì)胞的比例上升至84.22%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);siRNA-3組G0/G1細(xì)胞的比例上升至83%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。在G2/M期中,siRNA-2組和siRNA-3組的比例分別降至6.85%、7.20%,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);在S組中,siRNA-2組和siRNA-3組的比例分別降至8.93%和9.80%,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。說(shuō)明lncRNA DB327252表達(dá)下調(diào),位于細(xì)胞周期中G0/G1期的比例增高,腫瘤生長(zhǎng)受到抑制。8.lncRNA DB327252對(duì)細(xì)胞凋亡的影響A549/siRNA-1、siRNA-2凋亡率與A549/siRNA-nc相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);16HBE-T/siRNA-1、 siRNA-2凋亡率與16HBE-T/siRNA-nc相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),提示lncRNA DB327252基因在調(diào)節(jié)NSCLC細(xì)胞演變過(guò)程可能與細(xì)胞的凋亡無(wú)關(guān)。9. IncRNA DB327252對(duì)細(xì)胞侵襲能力的影響 轉(zhuǎn)染處理24h后,A549/siRNA-1、siRNA-2組細(xì)胞的侵襲能力降低,但與A549/siRNA-nc相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05); 16HBE-T/siRNA-1、siRNA-2組細(xì)胞的侵襲能力也降低,與16HBE-T/siRNA-nc相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。10. IncRNA DB327252對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響A549/siRNA-1、siRNA-2組劃痕間距與原間距之間的比值與A549/siRNA-nc相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);16HBE-T/siRNA-1、siRNA-2組劃痕間距與原間距之間的比值與16HBE-T/siRNA-nc相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。11.軟瓊脂集落實(shí)驗(yàn)在A549細(xì)胞株中,與shRNA-nc組集落的形成率(64.93±5.10)%相比,shRNA轉(zhuǎn)染沉默組的軟瓊脂集落形成率顯著降低至(23.60±5.05)%,差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);16HBE-T細(xì)胞株中,與shRNA-nc組集落的形成率(67.73±6.56)%相比,shRNA轉(zhuǎn)染沉默組的軟瓊脂集落形成率顯著降低至(34.80±6.06)%,差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。12.裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)將shRNA和shRNA-NC轉(zhuǎn)染的A549和16HBE-T細(xì)胞分別注射到裸鼠腹股溝兩側(cè)的皮下,通過(guò)觀察,A549/shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)組的腫瘤生長(zhǎng)速度要慢于shRNA-NC組,P0.05；同樣,16HBE-T/shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)組的腫瘤生長(zhǎng)速度慢于shRNA-NC組,P0.05差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A549/shRN A組的腫瘤體積明顯低于A549/shRNA-nc組(667.32±41.35 mm3 vs 1691.45±44.70 mm3),差異有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。重量A549/shRNA對(duì)比A549/shRNA-nc組(233.2±86.37mg vs 448.2±120.8mg),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); 16HBE-T/shRNA組腫瘤體積也低于16HBE-T/shRNA-nc組(633.18±46.75 mm3 vs 1448.20±85.69 mm3),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),重量16HBE-T/shRNA 對(duì)比 16HBE-T/shRNA-nc組(267.3±74.86mg vs 391.4±86.61mg),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。提示：DB327252基因表達(dá)下調(diào)后,體內(nèi)試驗(yàn)中腫瘤的成瘤速度及成瘤體積及重量均出現(xiàn)了下降,說(shuō)明了腫瘤的生長(zhǎng)減慢。結(jié)論1. LncRNA DB327252在非小細(xì)胞肺癌組織中呈高表達(dá)狀態(tài),具有類癌基因的功能,與非小細(xì)胞肺癌惡性程度增加相關(guān)。2. LncRNA DB327252的表達(dá)水平在性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),在吸煙、病理組織學(xué)類型、腫瘤大小、TNM分期上的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在吸煙組、腺癌組、腫瘤≥3cm組、TNM分期Ⅱ-Ⅳ期組中呈現(xiàn)高表達(dá)。3. LncRNA DB327252 ± A549、H1299、H446、H460及16HBE-T細(xì)胞株中均呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài),具有惡性的生物學(xué)活性；4. LncRNA DB327252主要通過(guò)調(diào)控A54、16HBE-T細(xì)胞增殖和影響腫瘤細(xì)胞周期來(lái)促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)化過(guò)程;5.體外細(xì)胞軟瓊脂實(shí)驗(yàn)及裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)證實(shí)LncRNADB327252在促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)方面發(fā)揮著重要的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2083859