發(fā)布時(shí)間：2018-06-29 01:02

  本文選題：乳腺癌轉(zhuǎn)移 + GPR116��； 參考：《華東師范大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：乳腺癌轉(zhuǎn)移是其致死的最主要原因。在乳腺癌轉(zhuǎn)移過程中,乳腺癌細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)能力對(duì)腫瘤浸潤以及進(jìn)入轉(zhuǎn)移靶器官有著重要作用。G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)是最大的跨膜受體家族,其中粘附G蛋白偶聯(lián)受體(aGPCRs)因胞外端含有大量粘附蛋白中的結(jié)構(gòu)域而被廣泛認(rèn)為和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞識(shí)別等相關(guān),也據(jù)此推測(cè)其在腫瘤的轉(zhuǎn)移可能具有重要功能。基于此,本文探究了粘附G蛋白偶聯(lián)受體對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移的影響。首先,我們通過檢測(cè)粘附G蛋白偶聯(lián)受體在高遷移乳腺癌細(xì)胞中的基因表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)了14個(gè)高表達(dá)的候選基因；隨后,利用干擾RNA抑制備選基因表達(dá),通過細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)的篩選,發(fā)現(xiàn)了粘附G蛋白偶聯(lián)受體GPR116強(qiáng)烈的促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的遷移。接著,我們構(gòu)建了穩(wěn)定干擾GPR116以及過表達(dá)GPR116的細(xì)胞株,通過體外細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了上述篩選結(jié)果。進(jìn)一步地,我們通過兩個(gè)獨(dú)立的乳腺癌轉(zhuǎn)移小鼠模型(乳腺癌肺轉(zhuǎn)移模型和骨轉(zhuǎn)移模型)在體內(nèi)證明GPR116促進(jìn)乳腺癌的轉(zhuǎn)移。在機(jī)制上,首先我們發(fā)現(xiàn)干擾GPR116后乳腺癌細(xì)胞的stress fiber和lamelliapodia形成顯著減少,細(xì)胞形態(tài)由扇狀轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)長形,細(xì)胞的極性減弱。進(jìn)一步,通過pull-down實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小G蛋白R(shí)hoA和Racl的活性在干擾GPR116后顯著下調(diào)。隨后,通過回復(fù)實(shí)驗(yàn)證明RhoA和Rac1活性下調(diào)是造成GPR116干擾后細(xì)胞遷移能力減弱的主要原因。我們通過對(duì)G蛋白的篩選發(fā)現(xiàn)GPR116偶聯(lián)Gαq激活RhoA和RAcl,并且回復(fù)持續(xù)激活的Gαq能夠回復(fù)干擾GRP116后導(dǎo)致的RhoA、Racl活性下調(diào)以及細(xì)胞的遷移能力。進(jìn)一步地,我們發(fā)現(xiàn)GPR116通過Gαq激活p63RhoGEF,后者促進(jìn)RhoA和Racl的活化,調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)遷移中骨架F-actin的變化,最終調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移。最后,通過分析臨床乳腺癌病人數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),GPR116的表達(dá)隨著乳腺癌惡性程度增加而升高,特別是在轉(zhuǎn)移乳腺癌中的表達(dá)尤為顯著。高表達(dá)GPR116的乳腺癌病人的復(fù)發(fā)生存率和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)生存率顯著降低。因此GPR116有可能成為潛在的治療乳腺癌轉(zhuǎn)移靶點(diǎn)。
[Abstract]:Metastasis of breast cancer is the leading cause of death. In the process of breast cancer metastasis, the migration and movement ability of breast cancer cells plays an important role in tumor infiltration and entry into metastasis target organ. G protein coupled receptor (GPCRs) is the largest transmembrane receptor family. Adhesion G protein-coupled receptors (aGPCRs) are widely considered to be related to cell movement and cell recognition due to the presence of a large number of domains in the extracellular adhesion proteins. It is also speculated that aGPCRs may play an important role in tumor metastasis. Based on this, we investigated the effect of adhesion G-protein coupled receptor on metastasis of breast cancer. First, we detected the gene expression level of Adhesion G protein-coupled receptor in high migration breast cancer cells, and we found 14 candidate genes with high expression, and then we used interference RNA to inhibit the expression of alternative genes. Through the screening of cell migration assay, it was found that adhesion G protein coupled receptor GPR116 strongly promoted the migration of breast cancer cells. Then we constructed stable interfering GPR116 cell lines and overexpressed GPR116 cells. The results were verified by cell migration experiments in vitro. Furthermore, we demonstrated in vivo that GPR116 promotes breast cancer metastasis through two independent mouse models of breast cancer metastasis (breast cancer lung metastasis model and bone metastasis model). In mechanism, we first found that the stress fiber and lamelliapodia formation of breast cancer cells decreased significantly after GPR116 interference, cell morphology changed from fan-shaped to slender, and cell polarity decreased. Furthermore, the activity of small G protein RhoA and Racl decreased significantly after interfering with GPR116 by pull-down assay. After that, the down-regulation of RhoA and Rac1 activity was demonstrated to be the main reason for the decrease of cell migration ability after GPR116 interference. We found that GPR116 coupled G 偽 Q activated RhoA and RAcl. and that G 偽 Q which returned to continuously activated G 偽 Q could reverse the down-regulation of RhoAn Racl activity induced by GRP116 and the migration ability of GPR116 cells. Furthermore, we found that GPR116 activated p63 RhoGEF through G 偽 Q, which promoted RhoA and Racl activation, regulated the changes of F-actin in breast cancer cells, and finally regulated the migration and metastasis of breast cancer cells. Finally, by analyzing the clinical data of breast cancer patients, we found that the expression of GPR116 increased with the increase of malignant degree of breast cancer, especially in metastatic breast cancer. The recurrence survival rate and distal metastasis survival rate of breast cancer patients with high expression of GPR116 decreased significantly. Therefore, GPR116 may be a potential target for the treatment of breast cancer metastasis.
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2080135