本文選題：新型化合物TMZ-POH + 抗腫瘤作用�。� 參考：《濟(jì)南大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)在肺癌中占80%,化療是臨床上常用的治療方法之一,但是嚴(yán)重的毒副作用及化療耐藥的發(fā)生在很大程度上影響了其治療效果。替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)是烷化劑類藥物氮烯唑胺的衍生物,紫蘇醇(Perillyl alcohol,POH)在多種類型的腫瘤中對(duì)TMZ具有治療增敏作用。TMZ-POH是將TMZ和POH以共價(jià)鍵連接形成的新型烷化劑,在三陰性乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、人類鼻咽癌,甚至是TMZ耐藥的神經(jīng)膠質(zhì)瘤中,TMZ-POH比TMZ、POH單獨(dú)用藥或二者聯(lián)合應(yīng)用具有更強(qiáng)的抗腫瘤作用。MGMT是一種進(jìn)化保守的酶,在多種癌癥中的高表達(dá)往往提示預(yù)后較差,且表達(dá)水平受到多重作用機(jī)制的調(diào)控。MGMT能夠移除TMZ的細(xì)胞毒性產(chǎn)物O6-meG,并使其失活,這是MGMT誘導(dǎo)TMZ化療耐藥發(fā)生的決定性因素。在不同腫瘤細(xì)胞中的研究發(fā)現(xiàn),TMZ-POH與TMZ等烷化劑不同,前者即使在MGMT高表達(dá)的細(xì)胞系中同樣能發(fā)揮較強(qiáng)的細(xì)胞毒性作用,這意味著TMZ-POH可能通過(guò)調(diào)控MGMT來(lái)克服在其他烷化劑中發(fā)生的耐藥。目的研究TMZ-POH對(duì)非小細(xì)胞肺癌的抗腫瘤作用,并探索其作用機(jī)制是否與ROS累積相關(guān);研究TMZ-POH對(duì)MGMT的調(diào)控作用以及MGMT對(duì)TMZ-POH細(xì)胞毒性的影響。方法將TMZ和POH以共價(jià)鍵連接形成新型烷化劑TMZ-POH,將其作用于所培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞系,通過(guò)細(xì)胞活性測(cè)定、克隆形成實(shí)驗(yàn)、活性氧ROS測(cè)定、線粒體膜電位定位測(cè)定和蛋白印跡等體外實(shí)驗(yàn)以及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究TMZ-POH的抗腫瘤作用及機(jī)制。結(jié)果TMZ-POH對(duì)NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549、H460和H520均具有細(xì)胞毒性作用,上調(diào)磷酸化的ATM、CHEK1、CHEK2、H2AFX蛋白表達(dá),將細(xì)胞周期阻滯在G2/M期,并且導(dǎo)致細(xì)胞凋亡、線粒體膜電位降低和活性氧累積;TMZ-POH在A549和SPC-A1(NSCLC來(lái)源)、A2780(卵巢癌來(lái)源系)以及CNE2(人鼻咽癌來(lái)源)等多種細(xì)胞系中,均能下調(diào)MGMT蛋白表達(dá),在A549和SPC-A1細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn),該調(diào)控作用不引起Wnt/β-catenin通路上的β-catenin以及GSK-3β表達(dá)水平的差異,用蛋白酶體抑制劑MG132進(jìn)行預(yù)處理之后,TMZ-POH誘導(dǎo)了更高水平的泛素化。結(jié)論新型化合物TMZ-POH在NSCLC中具有抗腫瘤作用,這種抗腫瘤作用是通過(guò)介導(dǎo)ROS累積完成的,能導(dǎo)致線粒體膜電位降低、線粒體凋亡、DNA損傷和細(xì)胞周期阻滯,進(jìn)而抑制腫瘤生長(zhǎng)。TMZ-POH能通過(guò)獨(dú)立的蛋白酶體途徑抑制MGMT的表達(dá),避免耐藥性的發(fā)生,并且在多種癌癥細(xì)胞中(包括TMZ耐藥的細(xì)胞),這種抑制作用在TMZ-POH發(fā)揮細(xì)胞毒性時(shí)是一個(gè)重要的影響因素。
[Abstract]:Background Non-small cell lung cancer (NSCLC) accounts for 80% of lung cancer. Chemotherapy is one of the commonly used treatment methods in clinic. Temozolomide (TMZ) is a derivative of alkylating agent azenazole amine. Perillyl alcohol POH has the effect of sensitizing TMZ to TMZ in many kinds of tumors. TMZ-POH is a new alkant that connects TMZ and POH by covalent bond, and it is a new alkant in tri-negative breast cancer. Among non-small cell lung cancer, human nasopharyngeal carcinoma, and even TMZ resistant gliomas, TMZ-POH has a stronger antitumor effect than TMZ-POH alone or a combination of the two. MGMT is an evolutionarily conserved enzyme. High expression in multiple cancers often suggests poor prognosis, and the level of expression is regulated by multiple mechanisms. MGMT can remove and inactivate the cytotoxic product O6-meGfrom TMZ, which is the decisive factor in inducing TMZ chemoresistance. Studies in different tumor cells showed that TMZ-POH was different from TMZ, and the former could play a strong cytotoxic effect even in a cell line with high expression of MGMT. Objective to study the antitumor effect of TMZ-POH on non-small cell lung cancer and whether its mechanism is related to Ros accumulation, and to study the regulatory effect of TMZ-POH on MGMT and the effect of MGMT on the cytotoxicity of TMZ-POH. Methods TMZ and POH were covalently bonded to form a novel alkylator TMZ-POH, which acted on the cultured tumor cell lines. The antitumor effect and mechanism of TMZ-POH were studied in vitro and in vivo by mitochondrial membrane potential localization and Western blotting. Results TMZ-POH had cytotoxic effects on NSCLC cell lines A549H 460 and H 520, upregulated the expression of phosphorylated ATMN CHEK1CHEK2H2AFX protein, blocked the cell cycle at G 2 / M phase, and led to apoptosis. The expression of MGMT protein was down-regulated in A549, SPC-A1 (NSCLC) -derived cell line and CNE2 (human nasopharyngeal carcinoma) cell line, as well as in A549 and SPC-A1 cell lines. This regulation did not cause the difference of 尾 -catenin and GSK-3 尾 expression in Wnt- 尾 -catenin pathway. After pretreatment with proteasome inhibitor MG132, TMZ-POH induced a higher level of ubiquitin. Conclusion the new compound TMZ-POH has anti-tumor effect in NSCLC, which is mediated by Ros accumulation and can lead to mitochondrial membrane potential decrease, mitochondrial apoptosis and DNA damage and cell cycle arrest. TMZ-POH can inhibit the expression of MGMT through independent proteasome pathway and avoid the occurrence of drug resistance. And this inhibition is an important factor in the cytotoxicity of TMZ-POH in a variety of cancer cells (including those resistant to TMZ).
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2077495