本文選題：微小RNA + miR-193b��； 參考：《河南大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：微小RNA(microRNA,miRNA)是一類在動(dòng)植物中均有表達(dá)的長(zhǎng)度約21-25nt的非編碼RNA,通常與靶基因的mRNAs的3’端非編碼區(qū)(3’-untranslated region,3’-UTR)互補(bǔ)結(jié)合,參與許多編碼基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控;通過形成沉默復(fù)合物,而參與RNA沉默。迄今為止,在人類基因組中已發(fā)現(xiàn)了數(shù)以千計(jì)的miRNAs,大約50%的蛋白質(zhì)編碼基因受其調(diào)控,形成了一個(gè)轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。MiRNAs在很多重要的生物學(xué)過程中起著調(diào)節(jié)作用,如細(xì)胞增殖、凋亡、分化及遷移等。MiRNAs的表達(dá)和代謝異常,通常會(huì)引發(fā)多種疾病,比如腫瘤,一些miRNAs的異常表達(dá)(過表達(dá),低表達(dá))可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,即其可作為癌基因或抑癌基因而發(fā)揮作用。研究表明在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中miRNAs發(fā)揮了至關(guān)重要的調(diào)節(jié)作用。為了進(jìn)一步研究miRNAs在胃癌發(fā)生發(fā)展中的功能與機(jī)制,通過對(duì)胃癌組織和癌旁正常組織中差異表達(dá)的miRNAs進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)miR-193b的表達(dá)具有顯著差異。Cyclin D1(CCND1)屬于高度保守的細(xì)胞周期家族成員。該家族的蛋白豐度在整個(gè)細(xì)胞周期中具有周期性變化。該基因出現(xiàn)異常表達(dá)或突變都會(huì)影響細(xì)胞周期的進(jìn)程,這可能是它影響多種腫瘤發(fā)生發(fā)展的最主要的機(jī)制。研究表明miR-193b在腫瘤中可通過靶向CCND1而發(fā)揮抑癌基因的作用。目的:研究miR-193b在胃癌發(fā)生發(fā)展中的功能和機(jī)制。材料方法:我們用Real-time PCR的方法對(duì)50對(duì)胃癌組織(C)和癌旁正常組織(N)中的miR-193b的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)C/N的值進(jìn)行統(tǒng)計(jì),取cutoff=1.5。用細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法在兩種胃癌細(xì)胞系HGC-27和MGC-803中轉(zhuǎn)入miR-193b過表達(dá)載體,并用Real-time PCR驗(yàn)證其表達(dá)上調(diào)情況:在此基礎(chǔ)之上,我們用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-193b對(duì)胃癌細(xì)胞增殖能力的影響;劃痕實(shí)驗(yàn)及侵襲實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)miR-193b對(duì)胃癌細(xì)胞遷移能力的影響。并用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)miR-193b對(duì)細(xì)胞中CCND1蛋白表達(dá)的影響。在miR-193b的機(jī)制研究中,我們用RNAi的方法對(duì)HGC-27和MGC-803細(xì)胞中的CCND1蛋白表達(dá)進(jìn)行干預(yù),并用Western blot驗(yàn)證siCCND1對(duì)CCND1的敲低效率,并用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CCND1對(duì)HGC-27和MGC-803細(xì)胞增殖能力的影響。結(jié)果:miR-193b在胃癌組織中的表達(dá)比癌旁正常組織中的表達(dá)低。而且miR-193b低表達(dá)與pTNM分期(stageI/II vs III/IV)相關(guān)。我們的進(jìn)一步研究表明miR-193b可以抑制HGC-27和MGC-803細(xì)胞的增殖,遷移和侵襲,對(duì)細(xì)胞周期也有一定的影響。而且miR-193b可直接作用于CCND1,即miR-193b可抑制CCND1的表達(dá),并且在HGC-27和MGC-803細(xì)胞用siCCND1將CCND1表達(dá)降低后,兩種胃癌細(xì)胞系的細(xì)胞增殖能力的下降。以上結(jié)果提示miR-193b在胃癌中的抗癌作用可能是通過靶向CCND1實(shí)現(xiàn)的。結(jié)論:miR-193b通過靶向作用于cyclin D1而抑制胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移能力。
[Abstract]:MicroRNAs (microRNAs) are a class of non-coding RNAs with a length of about 21-25nt expressed in animals and plants, which are usually complementary to the 3'-untranslated region 3'-UTR of the target gene, and participate in the post-transcriptional regulation of the expression of many coding genes. Participate in RNA silencing by forming silencing complex. So far, thousands of miRNAss have been found in the human genome, and about 50% of the protein-coding genes are regulated by them, forming a post-transcriptional regulatory network. MiRNAs play a regulatory role in many important biological processes. The abnormal expression and metabolism of MiRNAs, such as cell proliferation, apoptosis, differentiation and migration, usually lead to many diseases, such as tumor. Abnormal expression (overexpression, low expression) of some miRNAs may lead to the occurrence and development of tumor. That is, it can act as oncogene or tumor suppressor gene. It has been shown that miRNAs play an important role in the development of gastric cancer. In order to further study the function and mechanism of miRNAs in carcinogenesis and development of gastric cancer, the differentially expressed miRNAs were screened in gastric cancer tissues and adjacent normal tissues. It was found that the expression of miR-193b was significantly different. Cyclin D1 (CCND1) belonged to a highly conserved cell cycle family. The protein abundance of the family changes periodically throughout the cell cycle. Abnormal expression or mutation of the gene may affect the progress of cell cycle, which may be the most important mechanism that affects the occurrence and development of many kinds of tumors. It has been shown that miR-193b can act as a tumor suppressor gene by targeting CCND1 in tumors. Objective: to study the function and mechanism of miR-193b in carcinogenesis and development of gastric cancer. Materials: Real-time PCR was used to detect the expression of miR-19b in 50 pairs of gastric cancer tissues (C) and adjacent normal tissues (N). Two gastric cancer cell lines HGC-27 and MGC-803 were transfected into miR-193b overexpression vector by cell transfection, and the upregulation of miR-193b expression was verified by Real-time PCR. On this basis, the effect of miR-193b on the proliferation of gastric cancer cells was detected by cell proliferation assay. The effect of miR-193b on the migration ability of gastric cancer cells was detected by scratch test and invasion assay. The effect of overexpression of miR-19b on the expression of CCND1 protein was detected by Western blot assay. In the study of the mechanism of miR-193b, we used RNAi to interfere with the expression of CCND1 protein in HGC-27 and MGC-803 cells. Western blot was used to verify the knock down efficiency of siCCND1 on CCND1, and the effect of CCND1 on the proliferation of HGC-27 and MGC-803 cells was detected by cell proliferation assay. Results the expression of miR-19b in gastric cancer was lower than that in adjacent normal tissues. And the low expression of miR-193b was associated with pTNM staging (stageI / II vs III / IV). Our further study showed that miR-193b could inhibit the proliferation, migration and invasion of HGC-27 and MGC-803 cells, and had a certain effect on cell cycle. MiR-193b could directly inhibit the expression of CCND1 in CCND1 cells, and the proliferation ability of the two gastric cancer cell lines was decreased after the expression of CCND1 was reduced by siCCND1 in HGC-27 and MGC-803 cells. These results suggest that the anticancer effect of miR-193b in gastric cancer may be mediated by targeting CCND1. Conclusion the ability of proliferation, invasion and metastasis of gastric cancer cells was inhibited by targeting cyclin D1.
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：2073181