本文選題：膠質(zhì)瘤 + 預(yù)后��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：膠質(zhì)瘤是人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的一類原發(fā)惡性腫瘤,約占顱內(nèi)原發(fā)腫瘤的40%~60%,至今仍然是中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中預(yù)后最差的一類腫瘤。目前,膠質(zhì)瘤的治療通常是手術(shù)治療聯(lián)合放射治療和化學(xué)治療等綜合治療。近些年來(lái),雖然在神經(jīng)影像技術(shù)、神經(jīng)顯微外科技術(shù)以及放射治療和化學(xué)治療等方面取得了突飛猛進(jìn)的發(fā)展,但是對(duì)于膠質(zhì)瘤患者而言,其手術(shù)以后的復(fù)發(fā)率仍然接近100%,中位生存時(shí)間不足1年。研究表明,低級(jí)別膠質(zhì)瘤的平均存活時(shí)間是3~5年,而高級(jí)別膠質(zhì)瘤的平均存活時(shí)間是1~2年。雖然世界衛(wèi)生組織對(duì)膠質(zhì)瘤的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)至今仍然是評(píng)價(jià)膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的金標(biāo)準(zhǔn),但是對(duì)于個(gè)體膠質(zhì)瘤患者生存時(shí)間的判斷而言,這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)仍然有限。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn),一些腫瘤的分子標(biāo)志物的表達(dá)水平,例如PTEN基因,可以作為一項(xiàng)獨(dú)立的因子來(lái)影響膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后生存時(shí)間,但是像這樣能夠獨(dú)立影響膠質(zhì)瘤患者預(yù)后生存時(shí)間的分子標(biāo)志物還比較少,因此需要發(fā)現(xiàn)更多的影響膠質(zhì)瘤患者預(yù)后生存時(shí)間的分子標(biāo)志物。Transmembrane-4-L-six-family-1(TM4SF1),也被稱為腫瘤相關(guān)抗原L6(TAL6),是四次跨膜蛋白家族成員之一,在培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞中高度表達(dá)。目前將其歸入L6家族,其家族成員還包括TM4SF4、TM4SF5、TM4SF18、TM4SF19、TM4SF20等。TM4SF1是在進(jìn)行肺癌的免疫治療時(shí)作為一種抗原被首次發(fā)現(xiàn)的,在隨后的研究中發(fā)現(xiàn)其在許多上皮來(lái)源的腫瘤中高表達(dá),如結(jié)腸癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、腎癌、前列腺癌等,并與這些腫瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)。同時(shí)TM4SF1可促進(jìn)胰腺癌、卵巢癌等多種腫瘤的遷移與侵襲,但具體相關(guān)機(jī)制尚未明確。TM4SF1在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)以及TM4SF1的表達(dá)程度與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的相關(guān)研究目前尚未見報(bào)道。因此,我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)、蛋白免疫印跡以及實(shí)時(shí)定量q RT-PCR的方法,檢測(cè)了TM4SF1在對(duì)照腦組織和不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本中的蛋白及m RNA的表達(dá)水平。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量q RT-PCR以及蛋白免疫印跡的方法確認(rèn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株TM4SF1的表達(dá);并分析膠質(zhì)瘤患者的相關(guān)臨床因素,通過(guò)單因素以及多因素生存分析,探討這些臨床因素及TM4SF1的表達(dá)水平對(duì)患者預(yù)后生存時(shí)間的影響。第一部分TM4SF1在人腦膠質(zhì)瘤組織的表達(dá)及其與病理分級(jí)的相關(guān)性目的:確定TM4SF1在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá),并分析TM4SF1的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤分級(jí)之間的相關(guān)性。方法：1組織標(biāo)本的收集:收集近期在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)外科住院并行手術(shù)切除的72例人腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本及8例對(duì)照腦組織標(biāo)本。膠質(zhì)瘤標(biāo)本均由河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)病理醫(yī)師確診,并依據(jù)2007年WHO分級(jí)對(duì)所有樣本進(jìn)行病理分級(jí),作為對(duì)照組的8例腦組織取自腦出血或腦外傷需行內(nèi)減壓術(shù)的患者。每例組織分兩部分留取,一部分置于10%福爾馬林液中固定,另一部分保存于2ml無(wú)菌凍存管并立即投至液氮中速凍。2應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)72例人腦膠質(zhì)瘤組織及8例對(duì)照腦組織中TM4SF1的表達(dá),并分析其與病理分級(jí)的相關(guān)性。3應(yīng)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法測(cè)定72例人腦膠質(zhì)瘤組織及8例對(duì)照腦組織中TM4SF1 m RNA的相對(duì)表達(dá)水平,并比較其表達(dá)差異。4應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)方法檢測(cè)72例人腦膠質(zhì)瘤組織及8例對(duì)照腦組織中TM4SF1蛋白的表達(dá),并比較其表達(dá)差異。結(jié)果：1免疫組織化學(xué)結(jié)果:TM4SF1在膠質(zhì)瘤組織中的陽(yáng)性高表達(dá)率為52.78%(38/72),TM4SF1在8例對(duì)照腦組織中均無(wú)陽(yáng)性表達(dá),在各級(jí)別的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中均可見到TM4SF1蛋白表達(dá),與對(duì)照腦組織具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);低級(jí)別(I、II級(jí))和高級(jí)別(III、IV級(jí))膠質(zhì)瘤組織陽(yáng)性表達(dá)率分別為70.83%(17/24)和95.83%(46/48),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。隨著膠質(zhì)瘤級(jí)別的升高,TM4SF1蛋白表達(dá)逐漸增強(qiáng),TM4SF1表達(dá)與膠質(zhì)瘤惡性程度存在正相關(guān)(rs=0.95,P0.05)。測(cè)量各級(jí)別的人腦膠質(zhì)瘤組織與對(duì)照腦組織的平均光密度值(AOD),統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),對(duì)照組、低級(jí)別膠質(zhì)瘤組和高級(jí)別膠質(zhì)瘤組之間存在顯著的差異性(P0.05),且高級(jí)別膠質(zhì)瘤組與低級(jí)別膠質(zhì)瘤組的平均光密度值(AOD)均明顯高于對(duì)照組(P0.05),高級(jí)別膠質(zhì)瘤組的平均光密度值(AOD)也明顯高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤組(P0.05)。對(duì)膠質(zhì)瘤組織的細(xì)胞密度進(jìn)行的分析表明,高級(jí)別膠質(zhì)瘤組與低級(jí)別膠質(zhì)瘤組之間不存在顯著性差異。2 q RT-PCR結(jié)果:TM4SF1 m RNA在對(duì)照腦組織、低級(jí)別膠質(zhì)瘤及高級(jí)別膠質(zhì)瘤中的相對(duì)表達(dá)量具有顯著性差異(P0.05)。與低級(jí)別膠質(zhì)瘤組(0.626±0.452)相比,高級(jí)別膠質(zhì)瘤組(2.117±0.618)的TM4SF1m RNA相對(duì)表達(dá)量升高了238.4%。3 Western blot結(jié)果:TM4SF1蛋白在對(duì)照腦組織、低級(jí)別膠質(zhì)瘤及高級(jí)別膠質(zhì)瘤中的相對(duì)表達(dá)量具有顯著性差異。與對(duì)照腦組織相比,TM4SF1蛋白在低級(jí)別級(jí)腦膠質(zhì)瘤中相對(duì)表達(dá)量明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與低級(jí)別級(jí)腦膠質(zhì)瘤相比,TM4SF1蛋白在高級(jí)別級(jí)腦膠質(zhì)瘤中相對(duì)表達(dá)量明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與對(duì)照腦組織相比,TM4SF1蛋白在高級(jí)別級(jí)腦膠質(zhì)瘤中相對(duì)表達(dá)量顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論：1 TM4SF1在人腦膠質(zhì)瘤組織中高度表達(dá),且其表達(dá)隨著膠質(zhì)瘤病理級(jí)別的升高而增加,高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤的表達(dá)要高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 TM4SF1的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤級(jí)別的升高呈顯著的正相關(guān),提示TM4SF1能成為腦膠質(zhì)瘤臨床分級(jí)的重要分子標(biāo)志物。第二部分TM4SF1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、U251中的表達(dá)目的:檢測(cè)TM4SF1在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87和U251中的表達(dá)。方法：1應(yīng)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(q RT-PCR)測(cè)定U87和U251細(xì)胞株中TM4SF1 m RNA的表達(dá)。2應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)方法檢測(cè)U87和U251細(xì)胞株中TM4SF1蛋白的表達(dá)。結(jié)果：1 q RT-PCR結(jié)果:在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、U251及作為陽(yáng)性對(duì)照的結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116均檢測(cè)到了TM4SF1 m RNA的表達(dá),數(shù)據(jù)分析表明,三組間TM4SF1 m RNA表達(dá)水平的差異不明顯,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 Western blot結(jié)果:在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、U251及作為陽(yáng)性對(duì)照的結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116均檢測(cè)到了TM4SF1蛋白的表達(dá),數(shù)據(jù)分析表明,三組間TM4SF1蛋白表達(dá)的差異不明顯,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、U251中TM4SF1均表達(dá)陽(yáng)性,二者表達(dá)程度無(wú)明顯差異。第三部分TM4SF1的表達(dá)水平及相關(guān)臨床因素與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的多因素生存分析目的:探討影響腦膠質(zhì)瘤患者生存和預(yù)后的重要因素,從而更加準(zhǔn)確地判斷腦膠質(zhì)瘤病人的預(yù)后情況,以便進(jìn)一步改善腦膠質(zhì)瘤病人的預(yù)后。方法:查閱并記錄這72例膠質(zhì)瘤患者的臨床病例資料,分別了解這72例患者的性別、年齡、術(shù)前KPS評(píng)分、術(shù)前有無(wú)抽搐、腫瘤直徑、腫瘤術(shù)中切除范圍、腫瘤病理分級(jí)以及TM4SF1的表達(dá)程度。首先采用Kaplan-Meier法進(jìn)行單因素分析,分別考察患者的相關(guān)臨床因素及TM4SF1的表達(dá)程度對(duì)存活時(shí)間的影響。差異的顯著性檢驗(yàn)采用Log-rank法。對(duì)單因素分析中P0.05者以前進(jìn)法(Forward:LR)進(jìn)行COX回歸多因素模型分析。結(jié)果：1單因素分析結(jié)果:對(duì)選定的8項(xiàng)因子使用Kaplan-Meier法進(jìn)行單因素分析后發(fā)現(xiàn),患者年齡、術(shù)前KPS評(píng)分、腫瘤切除范圍、腫瘤病理分級(jí)、TM4SF1的表達(dá)程度對(duì)于膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后有影響,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2多因素分析結(jié)果:對(duì)Kaplan-Meier法進(jìn)行單因素分析發(fā)現(xiàn)的具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的5項(xiàng)因子進(jìn)行多因素分析。以前進(jìn)法(Forward:LR)進(jìn)行COX回歸多因素模型分析后發(fā)現(xiàn),腫瘤病理分級(jí)以及TM4SF1的表達(dá)程度這2項(xiàng)因子對(duì)膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后有影響,可以作為影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P0.05)。結(jié)論:膠質(zhì)瘤患者的腫瘤病理級(jí)別越高,TM4SF1的表達(dá)越強(qiáng),患者生存時(shí)間越短。膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)及TM4SF1的表達(dá)程度這2項(xiàng)因素可以作為影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
[Abstract]:In recent years , the expression levels of TM4SF4 , TM4SF5 , TM4SF18 , TM4SF19 , TM4SF20 , etc . Methods : The expression of TM4SF mRNA in human brain glioma tissues and 8 control brain tissues were determined by immunohistochemical method . The expression of TM4SF1mRNA in human glioma cell line U87 and U251 was significantly higher than that in control group ( P0.05 ) . Objective : To investigate the prognostic factors of glioma patients by using Kaplan - Meier method .
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.4
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本文編號(hào)：2071720