發(fā)布時(shí)間：2018-06-26 00:58

  本文選題：洛鉑 + 紫杉醇��； 參考：《大連大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的:探討洛鉑聯(lián)合紫杉醇對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞的作用機(jī)制,并研究卵巢癌組織中AKAP95、cyclinE1、cyclinD1、Cx43蛋白的表達(dá)及與臨床病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系。方法:1、MTT實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)洛鉑、紫杉醇及兩者聯(lián)合作用于胃癌SGC-7901細(xì)胞系的抗腫瘤效應(yīng)。2、運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)洛鉑、紫杉醇及兩者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞的細(xì)胞周期分布影響。3、運(yùn)用western blot方法檢測(cè)洛鉑、紫杉醇作用SGC-7901細(xì)胞后,cyclinD1/E1/B1及CDK2/4、Rb、pRb蛋白表達(dá)的變化。4、采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)54例卵巢癌組織中蛋白的表達(dá)。5、利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建cyclinE2過(guò)表達(dá)及沉默質(zhì)粒。6、利用western blot和免疫熒光實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)cyclinE2和LMW-cyclinE2的定位,并檢測(cè)兩種抗體對(duì)CCNE2編碼的蛋白的特異性。7、利用Co-IP、銀染、MS/MS方法鑒定cyclinE2(A-9)抗體對(duì)應(yīng)蛋白是否為CCNE2基因編碼的蛋白。結(jié)果:1、洛鉑聯(lián)合紫杉醇對(duì)胃癌SGC-7901具有協(xié)同作用聯(lián)合指數(shù)CI1。2、聯(lián)合使用洛鉑和紫杉醇能增加SGC-7901細(xì)胞中cylinE1和CDK2的表達(dá)(P0.05),減少cylinB1、Rb、pRb的表達(dá)(P0.05),cyclinD1和CDK4表達(dá)變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);聯(lián)合使用可以導(dǎo)致細(xì)胞S期和M期阻滯。3、AKAP95、cyclinD1、cyclinE1蛋白在卵巢癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性率分別為72.22%、66.67%和79.63%,高于癌旁組織的33.33%、25.00%和8.30%;Cx43蛋白在卵巢癌組織的陽(yáng)性率為40.74%,低于癌旁組織的75.00%,其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、在卵巢癌組織中,cyclinD1蛋白的表達(dá)與組織類型有關(guān)(P0.05),與分化程度無(wú)關(guān)(P0.05),AKAP95、cyclinD1、cyclinE1蛋白的表達(dá)與分化程度、組織類型均無(wú)關(guān)(P0.05)。5、AKAP95、cyclinE1和Cx43蛋白三者之間的表達(dá)均有關(guān)聯(lián)性(P0.05),cyclinD1、cyclinE1和Cx43蛋白三者之間互有關(guān)聯(lián)性(P0.05),而AKAP95與cyclinD1蛋白之間未見(jiàn)關(guān)聯(lián)性(P0.05)。6、cyclinE2主要定位于細(xì)胞漿,核內(nèi)少量表達(dá),而LMW-cyclinE2主要定位于細(xì)胞核。7、cyclinE2對(duì)CCNE2編碼的蛋白沒(méi)有特異性,而LMW-cyclinE2對(duì)CCNE2編碼的蛋白有特異性。8、cyclinE2(A-9)抗體對(duì)應(yīng)的蛋白沒(méi)有檢測(cè)到CCNE2基因編碼的氨基酸序列。結(jié)論:1、洛鉑聯(lián)合紫杉醇對(duì)胃癌SGC7901的細(xì)胞周期阻滯具有協(xié)同作用。2、AKAP95、cyclinD1和cyclinE1蛋白可能具有促進(jìn)卵巢癌發(fā)生發(fā)生發(fā)展的作用,Cx43具有抑制卵巢癌發(fā)生發(fā)展的作用。3、cyclinE2(A-9)抗體識(shí)別未知蛋白,此蛋白可能不是LMW-cyclinE2,cyclinE2(40890)抗體識(shí)別的是cyclinE2蛋白。
[Abstract]:Objective: To investigate the mechanism of the action of luoplatin combined paclitaxel on human gastric cancer SGC-7901 cells and to study the expression of AKAP95, cyclinE1, cyclinD1, Cx43 protein in ovarian cancer and its relationship with the clinicopathological indexes. Methods: 1, MTT tests were conducted to detect the antitumor effect of luoplatin, paclitaxel and both of them on the anti-tumor effect.2 of gastric cancer SGC-7901 cell lines, respectively. Flow cytometry was used to detect the cell cycle distribution of SGC-7901 cells in gastric cancer by using luoplatinum, paclitaxel and both.3. The Western blot method was used to detect the changes of cyclinD1/E1/B1 and CDK2/4, Rb, and pRb protein expression in SGC-7901 cells of paclitaxel,.4, and 54 cases of ovarian cancer were detected by immunohistochemistry. The expression of medium protein.5, cyclinE2 overexpression and silencing plasmid.6 were constructed by molecular cloning technology. The localization of cyclinE2 and LMW-cyclinE2 was detected by Western blot and immunofluorescence assay, and the specificity of two antibodies against CCNE2 encoded proteins was detected. Co-IP, silver staining and MS/MS methods were used to identify the corresponding protein of the antibody. The protein encoded by CCNE2 gene. Results: 1, the combination of luoplatin and paclitaxel has synergistic combined index CI1.2. The combined use of luoplatin and paclitaxel can increase the expression of cylinE1 and CDK2 in SGC-7901 cells (P0.05), and reduce the expression of cylinB1, Rb, pRb (P0.05). The positive rates of.3, AKAP95, cyclinD1, cyclinE1 protein expression in ovarian cancer tissues were 72.22%, 66.67% and 79.63% respectively, higher than 33.33%, 25% and 8.30% in para cancerous tissues, and 40.74% for Cx43 protein in ovarian cancer tissue, and the difference was statistically significant (P0) (P0). The difference was statistically significant (P0) (P0). (P0), the positive rate of Cx43 protein in ovarian cancer tissues was 40.74%, lower than that of the para cancerous tissue (P0) (P0). .05).4, in ovarian cancer, the expression of cyclinD1 protein is related to the type of tissue (P0.05), not related to the degree of differentiation (P0.05), the expression of AKAP95, cyclinD1, cyclinE1 protein and the degree of differentiation (P0.05).5, AKAP95, cyclinE1, and egg white three There is a mutual association between the three (P0.05), and there is no association between AKAP95 and cyclinD1 protein (P0.05).6, cyclinE2 is mainly located in the cytoplasm and a small amount of expression in the nucleus, while LMW-cyclinE2 is mainly located in the nuclear.7, cyclinE2 is not specific to the protein encoded by CCNE2, but LMW-cyclinE2 on the proteins encoded by CCNE2. The antibody corresponding protein did not detect the amino acid sequence encoded by the CCNE2 gene. Conclusion: 1, luoplatin combined with paclitaxel has a synergistic effect on the cell cycle block of gastric cancer SGC7901,.2, AKAP95, cyclinD1 and cyclinE1 proteins may play a role in promoting the development of ovarian cancer. Cx43 has the effect of inhibiting the development of ovarian cancer,.3, cyc LinE2 (A-9) antibody recognizes unknown protein. This protein may not be LMW-cyclinE2, and cyclinE2 (40890) antibody recognizes cyclinE2 protein.
【學(xué)位授予單位】：大連大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：2068321