本文選題：MUC1 + 核酸適配體��； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年碩士論文

【摘要】：目的：化療是晚期腫瘤的主要治療手段,但傳統(tǒng)化療藥物的細(xì)胞毒性作用往往會(huì)引起全身的系統(tǒng)毒性反應(yīng),降低患者的耐受程度,導(dǎo)致治療效果下降。靶向治療作為一種可以與腫瘤細(xì)胞靶向結(jié)合從而抑制腫瘤生長(zhǎng)的治療手段,是克服傳統(tǒng)化療系統(tǒng)毒性的重要技術(shù)路徑之一。MUC1是一種跨膜糖蛋白,在多種腫瘤細(xì)胞中過(guò)量表達(dá),包括乳腺癌,肺癌,胃癌,結(jié)腸癌,前列腺癌,胰腺癌,卵巢癌等。MUC1在腫瘤的生長(zhǎng),代謝,轉(zhuǎn)移等方面也有一定的作用。除此之外在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的MUC1的結(jié)構(gòu)與正常組織細(xì)胞中表達(dá)的MUC1不同,其糖基化程度較低,因此使得MUC1成為了一種具有一定腫瘤特癥性的靶標(biāo)分子,為其在靶向治療的應(yīng)用中提供了生物學(xué)基礎(chǔ)。已經(jīng)有研究表明,針對(duì)MUC1的單克隆抗體、疫苗、小分子配體等手段在體外和體內(nèi)的腫瘤抑制實(shí)驗(yàn)中,可取得一定的初步效果,但目前MUC1靶向治療的臨床轉(zhuǎn)化依然十分遙遠(yuǎn),因此有必要探索針對(duì)MUC1的新型靶向治療方法。核酸適配體(aptamer)是一類由寡聚核苷酸組成的具有高特異性和親和性的小分子配體。與抗體相比,核酸適配體具有較低的免疫原性和較強(qiáng)的組織穿透性,并且制備過(guò)程簡(jiǎn)便,因此具有極大應(yīng)用前景。DNA正四面體(Td)作為一種DNA納米結(jié)構(gòu),其自組裝的特點(diǎn)使得該物質(zhì)具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、制備過(guò)程簡(jiǎn)單、容易被功能性基團(tuán)修飾的優(yōu)勢(shì)。已有研究表明,DNA正四面體可以作為一種藥物載體,可負(fù)載抗腫瘤藥物阿霉素(Doxorubicin,或Dox)。然而,目前尚未有研究報(bào)道將核酸適配體與DNA正四面體相偶聯(lián)構(gòu)建成為靶向藥物呈遞系統(tǒng)。本研究通過(guò)將MUC1核酸適配體(Apt)與DNA正四面體相偶聯(lián),構(gòu)建成為靶向性的阿霉素呈遞系統(tǒng),并且在體外評(píng)估了該靶向載體是否能夠與MUC1陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞特異結(jié)合,以及是否能靶向性地對(duì)MUC1陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性。方法：利用堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則,通過(guò)自組裝的方式,構(gòu)建出DNA正四面體以及與MUC1 aptamer相偶聯(lián)后的Apt-Td。通過(guò)用FAM熒光染料標(biāo)記Apt-Td,利用流式細(xì)胞分析技術(shù)來(lái)檢測(cè)Apt-Td是否可以特異性的與MUC1陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞結(jié)合。通過(guò)物理方法,將阿霉素載入DNA納米結(jié)構(gòu),構(gòu)建成為載有阿霉素的DNA納米結(jié)構(gòu)(Apt-Dox, Td-Dox,Apt-Td-Dox),評(píng)估其載藥率,并用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。利用共聚焦成像技術(shù),流式細(xì)胞分析技術(shù)以及細(xì)胞共培養(yǎng)來(lái)驗(yàn)證Apt-Td-Dox在體外是否可以將阿霉素靶向呈遞給MUC1陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞,并且通過(guò)MTS法測(cè)定Apt-Td-Dox在MUC1陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞與MUC1陰性對(duì)照細(xì)胞中產(chǎn)生的細(xì)胞毒性。結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)利用MUC1 aptamer和DNA正四面體通過(guò)自組裝的方式成功構(gòu)建了目標(biāo)藥物載體Apt-Td,并對(duì)其進(jìn)行了粒徑和Zeta電位的表征,Apt-Td的平均粒徑大小為12.38nm,其Zeta電位為-10.mV；流式細(xì)胞分析結(jié)果表明Apt-Td與本實(shí)驗(yàn)所采用的游離MUC1 aptamer類似,可以選擇性地與MUC1陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞結(jié)合而基本不與MUC1陰性細(xì)胞結(jié)合；通過(guò)對(duì)三種DNA納米結(jié)構(gòu)載藥率的研究發(fā)現(xiàn),Apt-Td的載藥率是游離aptamer載藥率的25倍;細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)表明Apt-Td-Dox可以將阿霉素靶向呈遞至MUC1陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞而限制阿霉素在MUC1陰性細(xì)胞中的藥物積累；細(xì)胞毒性試驗(yàn)表明,Apt-Td-Dox對(duì)MUC1陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生顯著的細(xì)胞毒性,并同時(shí)降低阿霉素對(duì)MUC1陰性細(xì)胞的毒性(P0.01)。結(jié)論：利用MUC1 aptamer和DNA正四面體可構(gòu)建成具有靶向作用的藥物載體Apt-Td。體外試驗(yàn)顯示,該藥物載體能靶向性的對(duì)MUC1陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性。
[Abstract]:Objective: chemotherapy is the main treatment for advanced tumor, but the cytotoxic effect of traditional chemotherapeutic drugs often causes systemic systemic toxicity, reducing the patient's tolerance and reducing the effect of treatment. Targeted therapy is a therapeutic method which can combine the target of tumor cells to inhibit the growth of tumor. One of the most important techniques for the toxicity of the system.MUC1 is a transmembrane glycoprotein, which is overexpressed in a variety of tumor cells, including breast cancer, lung cancer, gastric cancer, colon cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, and other aspects of the tumor growth, metabolism, and metastasis. In addition to the expression of MU in tumor cells The structure of C1 is different from the MUC1 expressed in normal tissue cells, and its glycosylation degree is low. Therefore, it makes MUC1 a target molecule with certain tumor specificity and provides a biological basis for its application in targeted therapy. In vitro and in vivo tumor inhibition experiments, some preliminary results can be obtained, but the clinical transformation of MUC1 targeting therapy is still very far away. Therefore, it is necessary to explore new targeting therapy for MUC1. Aptamer (aptamer) is a class of small molecular ligands with high specificity and affinity formed by oligonucleotides. Compared with the antibody, the aptamers have lower immunogenicity and stronger tissue penetration, and the preparation process is simple. Therefore, the.DNA tetrahedron (Td) is a kind of DNA nanostructure. Its self assembly characteristics make the material stable, simple preparation process and easy to be modified by functional groups. Potential. Studies have shown that DNA tetrahedron can be used as a drug carrier and can load the antitumor drug adriamycin (Doxorubicin, or Dox). However, there has not been a study on the coupling of aptamers with DNA tetrahedron to a targeting drug delivery system. This study was conducted by using the MUC1 aptamer (Apt) and DNA tetrahedron. Phase coupling, construction of a targeted adriamycin presentation system, and in vitro evaluation of whether the target carrier can specifically bind to MUC1 positive tumor cells and whether it can target MUC1 positive tumor cells to cytotoxicity. Method: using the principle of base complementary pairing, the DNA positive is constructed by self-assembly. Tetrahedron and Apt-Td. coupled with MUC1 aptamer are labeled Apt-Td by FAM fluorescent dye, and flow cytometry is used to detect whether Apt-Td can specifically bind to MUC1 positive tumor cells. By physical methods, adriamycin is loaded into the DNA nanostructure and is constructed as a DNA nanostructure carrying doxorubicin (Apt-Dox, T). D-Dox, Apt-Td-Dox), evaluate the drug loading rate, and use the confocal imaging technique, flow cytometry and cell co culture to verify that the target of adriamycin can be presented to MUC1 positive tumor cells in vitro, and the Apt-Td-Dox in MUC1 positive tumor cells and MUC1 negative is determined by MTS method. Results: the target drug carrier Apt-Td was successfully constructed by self assembly of MUC1 aptamer and DNA tetrahedron, and the particle size and Zeta potential were characterized. The average size of Apt-Td was 12.38nm, and its Zeta potential was -10.mV; the result of flow cytometry showed Apt-Td. Similar to free MUC1 aptamer used in this experiment, it can selectively bind to MUC1 positive tumor cells and not combine with MUC1 negative cells. By studying the drug loading rate of three DNA nanoscale structures, the drug carrying rate of Apt-Td is 25 times that of free aptamer drug loading rate; cell uptake experiments show that Apt-Td-Dox can make adriamycin. Targeting MUC1 positive tumor cells to restrict the accumulation of adriamycin in MUC1 negative cells; cytotoxicity test showed that Apt-Td-Dox could produce significant cytotoxicity to MUC1 positive tumor cells and decreased the toxicity of adriamycin to MUC1 negative cells (P0.01). Conclusion: MUC1 aptamer and DNA positive tetrahedron can be used. The targeting drug delivery vector Apt-Td. in vitro showed that the drug carrier could be cytotoxic to MUC1 positive tumor cells.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 MA Wen li;DNA Diagnosis and Gene Therapy:Advances and Prospects in the 21st Century[J];深圳大學(xué)學(xué)報(bào);2000年04期

2 葛學(xué)銘,陸應(yīng)麟,付生法,范文紅,劉爽;A NOVEL HUMAN DNA SEQUENCE WITH TUMOR METASTASIS SUPPRESSIVE ACTIVITY[J];Chinese Journal of Cancer Research;2000年02期

3 曹暉,劉玉萍,小松かつ子,畢培曦,邵鵬柱;DNA Molecular Profiling:A New Approach to Quality Control of Chinese Drugs[J];Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine;2000年01期

4 ;DNA REPAIR CAPACITY IN LUNG CANCER PATIENTS[J];癌變.畸變.突變;2001年04期

5 黃力拉,朱剛勁;被拐賣(mài)及失蹤兒童采血驗(yàn)DNA前的心理問(wèn)題及對(duì)策[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年03期

6 安小惠 ,王一理 ,來(lái)寶長(zhǎng) ,耿一萍 ,司履生;CONSTRUCTION OF HUMAN INTERLUEKIN-18 DNA VACCINE AND IT'S EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS[J];Journal of Xi'an Medical University;2001年02期

7 ;A Study of PCR with DNA Extracted from Single Cell Isolated from Histological Sections[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年01期

8 王軍陽(yáng),范桂香,勝利,袁育康;THE CONSTRUCTION AND PRELIMINARY APPRAISEMENT OF HSV-2 gD GENE DNA VACCINE[J];Academic Journal of Xi'an Jiaotong University;2002年02期

9 董菁 ,成軍 ,王勤環(huán) ,施雙雙 ,王剛 ,斯崇文;CLONING AND ANALYSIS OF THE GENOMIC DNA SEQUENCE OF AUGMENTER OF LIVERR EGENERATION FROM RAT[J];Chinese Medical Sciences Journal;2002年02期

10 ;Real time observation of the photocleavage of single DNA molecules[J];Chinese Science Bulletin;2003年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 Michael J.Siefkes;Cory O.Brant;Ronald B.Walter;;A novel real-time XL-PCR for DNA damage detection[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

2 ;Hormonal Regulation and Tumorigenic Role of DNA Methyltransferase[A];2011中國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省計(jì)劃生育與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)暨生殖健康講習(xí)班論文匯編[C];2011年

3 Dongmei Zhao;Fan Jin;Yuli Qian;Hefeng Huang;;Expression patterns of Dnmtl and Dnmt3b in preimplantational mouse embryos and effects of in-vitro cultures on their expression[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議婦科內(nèi)分泌會(huì)場(chǎng)（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計(jì)劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

4 姜東成;蔣稼歡;楊力;蔡紹皙;K.-L.Paul Sung;;在聚吡咯微點(diǎn)致動(dòng)下的DNA雜交行為[A];2008年全國(guó)生物流變學(xué)與生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2008年

5 白明慧;翁小成;周翔;;聯(lián)鄰苯二酚類小分子作為DNA交聯(lián)劑的研究[A];第六屆全國(guó)化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

6 張曄;杜智;楊斌;高英堂;;檢測(cè)外周血中游離DNA的應(yīng)用前景(綜述)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第29屆學(xué)術(shù)年會(huì)暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2009年

7 周紅;鄭江;王良喜;丁國(guó)富;魯永玲;潘文東;羅平;肖光夏;;CpG DNA誘導(dǎo)全身炎癥反應(yīng)綜合征的作用及其機(jī)制研究[A];全國(guó)燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會(huì)論文匯編[C];2004年

8 ;EFFECTS OF Ku70-DEFICIENT ON ARSENITE-INDUCED DNA DOUBLE STRAND BREAKS, CHROMOSOMAL ALTERATIONS AND CELL CYCLE ARREST[A];海峽兩岸第三屆毒理學(xué)研討會(huì)論文摘要[C];2005年

9 李經(jīng)建;冀中華;蔡生民;;小溝結(jié)合方式中的DNA媒介電荷轉(zhuǎn)移[A];第十三次全國(guó)電化學(xué)會(huì)議論文摘要集（下集）[C];2005年

10 ;The interaction between Levofloxacine Hydrochloride and DNA mediated by Cu~(2+)[A];湖北省化學(xué)化工學(xué)會(huì)2006年年會(huì)暨循環(huán)經(jīng)濟(jì)專家論壇論文集[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 本報(bào)記者 袁滿;平安：把“領(lǐng)先”作為DNA[N];經(jīng)濟(jì)觀察報(bào);2006年

2 舒放;編織一個(gè)DNA納米桶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

3 閆潔;英兩無(wú)罪公民起訴要求銷毀DNA記錄[N];新華每日電訊;2008年

4 何德功;日本制成診斷魚(yú)病的“DNA書(shū)”[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2004年

5 本報(bào)記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

6 周斌偉　鄒巍;蘇州警方應(yīng)用DNA技術(shù)一年偵破案件1887起[N];人民公安報(bào);2011年

7 本報(bào)記者 楊天笑;揭秘“神探”DNA[N];蘇州日?qǐng)?bào);2011年

8 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語(yǔ)[N];東方早報(bào);2011年

9 常麗君;DNA電路可檢測(cè)導(dǎo)致疾病的基因損傷[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

10 常麗君;效率和質(zhì)量：“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 唐陽(yáng);基于質(zhì)譜技術(shù)的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學(xué);2014年

2 池晴佳;DNA動(dòng)力學(xué)與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學(xué);2015年

3 胡璐璐;哺乳動(dòng)物DNA去甲基化過(guò)程關(guān)鍵酶TET2的三維結(jié)構(gòu)與P暬蒲芯縖D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬寅洲;基于滾環(huán)擴(kuò)增的DNA自組裝技術(shù)的研究[D];南京大學(xué);2014年

5 黃學(xué)鋒;精子DNA碎片的臨床意義：臨床和實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 隋江東;APE1促進(jìn)DNA-PKcs介導(dǎo)hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護(hù)中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 劉松柏;結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1在DNA復(fù)制及細(xì)胞周期過(guò)程中的功能性研究[D];浙江大學(xué);2015年

8 王璐;哺乳動(dòng)物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

9 齊文靖;染色質(zhì)改構(gòu)蛋白BRG1在DNA雙鏈斷裂修復(fù)中的作用及機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

10 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 董洪奎;面向可視化納米操作的DNA運(yùn)動(dòng)學(xué)建模及誤差實(shí)時(shí)校正方法[D];沈陽(yáng)理工大學(xué);2014年

2 聞金燕;水溶性羧基和吡啶基咔咯大環(huán)與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

3 江懌雨;水溶性羧酸卟啉及其配合物與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

4 高志森;比較外周游離循環(huán)腫瘤DNA與癌胚抗原監(jiān)測(cè)非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)前后腫瘤負(fù)荷變化的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 丁浩;血漿循環(huán)DNA完整性及多基因甲基化對(duì)肺癌診斷價(jià)值的研究[D];河北大學(xué);2015年

6 王鵬;基于碳點(diǎn)@氧化石墨烯復(fù)合材料DNA生物傳感器的構(gòu)建及用于PML/RARα基因檢測(cè)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李海青;轉(zhuǎn)堿篷和鹽角草總DNA的耐鹽紫花苜蓿的選育[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

8 李婷婷;小鼠DNA模式識(shí)別重要受體的分子結(jié)構(gòu)特征及其功能研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

9 劉瑞斯;抗癌藥物奧沙利鉑與DNA相互作用的原子力顯微鏡觀察研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

10 熊忠;芳香二肽與一價(jià)金屬離子間相互作用及DNA切割活性的研究[D];鄭州大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2061690