發(fā)布時間：2018-06-23 16:14

  本文選題：Tfh細(xì)胞 + Tfr細(xì)胞　； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：背景:結(jié)直腸癌是全世界發(fā)病率排名第三的惡性腫瘤,每年有超過100萬患者確診為結(jié)直腸癌。傳統(tǒng)治療手段(手術(shù),化療,放療,靶向治療)療效不理想。除了腫瘤本身的機(jī)制外,腫瘤微環(huán)境特別是炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)與腫瘤的進(jìn)展甚至放化療、靶向藥物抵抗有關(guān)�？梢哉f,腫瘤免疫治療的時代已經(jīng)到來。事實上越來越多的證據(jù)表明,在預(yù)防腫瘤的發(fā)生、生長和轉(zhuǎn)移擴(kuò)散中免疫系統(tǒng)扮演重要的角色。對于CD4+T淋巴細(xì)胞亞群的研究是近年來免疫學(xué)研究的一個熱點。Tfh作為CD4+T淋巴細(xì)胞亞群的一種,是近年來研究發(fā)現(xiàn)的一種特殊的輔助性T細(xì)胞,表達(dá)CXCR5的Tfh細(xì)胞在CXCL13的趨化下,被募集到淋巴濾泡,參與誘導(dǎo)B細(xì)胞的分化及生發(fā)中心的形成,通過產(chǎn)生IL-21等細(xì)胞因子以及表達(dá)ICOS等粘附分子來調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。而Tfr細(xì)胞作為Tfh細(xì)胞的調(diào)節(jié)對應(yīng)物,兼有Tfh和Foxp3+Treg細(xì)胞的表型特征,抑制生發(fā)中心的形成及B細(xì)胞的分化,充當(dāng)與Tfh相反的角色。近來研究表明失調(diào)的免疫系統(tǒng)在乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌和肉瘤的發(fā)生中扮演重要的作用。而關(guān)于Tfh和Tfr在結(jié)直腸癌患者中表達(dá)的研究,國內(nèi)外尚少有報道。本研究分別采用流式細(xì)胞術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測結(jié)直腸癌患者和健康人外周血Tfh、Tfr的表達(dá)和上清IL-21的含量,并分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,探討其在結(jié)直腸癌中表達(dá)的意義。目的:檢測Tfh和Tfr在結(jié)直腸癌患者和健康對照組人外周血表達(dá)水平,同時測定外周血上清IL-21含量。分析Tfh和Tfr與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,探討其在結(jié)直腸癌中表達(dá)的意義。方法:1通過流式細(xì)胞術(shù)檢測實驗組結(jié)直腸癌患者和健康對照組人外周血中CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3-Tfh細(xì)胞和CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3+Tfr細(xì)胞的表達(dá)。2用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法,在分子水平檢測實驗組結(jié)直腸癌患者和健康對照組人外周血上清IL-21含量。結(jié)果:1研究對象的一般信息和臨床特點實驗組結(jié)直腸癌患者共62例,男性34例,女性28例,年齡范圍23~83歲,平均年齡57.6歲,中位年齡58.5歲,病理均證實為腺癌。TNM分期:Ⅰ期7例,Ⅱ期21例,Ⅲ期25例,Ⅳ期9例(肝轉(zhuǎn)移4例,肺轉(zhuǎn)移3例,腹腔廣泛轉(zhuǎn)移1例,腦轉(zhuǎn)移1例),其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及部分Ⅳ期(4例肝轉(zhuǎn)移)患者均行手術(shù)治療。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的32例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的30例。健康對照組共30例,男性6例,女性24例,年齡范圍26~78歲,平均年齡53.2歲,中位年齡54歲。實驗組與健康對照組在年齡、性別、吸煙狀態(tài)等方面相比沒有統(tǒng)計學(xué)差異。2實驗組和對照組外周血中Tfh細(xì)胞和Tfr細(xì)胞的表達(dá)以CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3-作為Tfh細(xì)胞的標(biāo)記,CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3+作為Tfr細(xì)胞的標(biāo)記。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測實驗組結(jié)直腸癌患者和對照組健康人外周血中Tfh細(xì)胞和Tfr細(xì)胞的表達(dá)。P1門為外周血淋巴細(xì)胞,設(shè)CD4+T細(xì)胞為2門,Q3和Q4分別為外周血中Tfh細(xì)胞和Tfr細(xì)胞的表達(dá)情況。3實驗組和對照組人外周血Tfh細(xì)胞和Tfr細(xì)胞的表達(dá)實驗組CRC患者外周血Tfh細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比高于健康對照組(2.93±2.48vs2.09±1.34,P=0.038);而實驗組CRC患者外周血Tfr細(xì)胞低于健康對照組(0.16±0.09vs0.2±0.11,P=0.047)。4結(jié)直腸癌患者外周血Tfh細(xì)胞與臨床病理參數(shù)的關(guān)系有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Tfh細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞百分比較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高(2.85±1.5 vs2.20±1.2)。各TNM分期間Tfh細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞百分比相比較,Ⅰ期(1.39±0.64)和Ⅳ期(1.97±0.82)相比較,P=0.04,有統(tǒng)計學(xué)差異;而Ⅰ期和Ⅱ期、Ⅲ期相比較及Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期間相互比較P值均大于0.05,沒有統(tǒng)計學(xué)差異。比較CRC患者CEA5ng/ml和CEA5ng/ml兩組間Tfh細(xì)胞表達(dá)(3.06±2.79vs2.19±2.16,P=0.173),無統(tǒng)計學(xué)差異。5酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測實驗組結(jié)直腸癌患者和健康對照組外周血上清IL-21水平,結(jié)果顯示:實驗組結(jié)直腸癌患者血清IL-21水平高于健康對照組(196.48±69.85vs149.85±91.49,P0.05)。結(jié)論:1結(jié)直腸癌患者外周血中Tfh細(xì)胞表達(dá)量升高,同時伴有Tfr表達(dá)量下降,且外周血上清IL-21水平升高。2 Tfh、Tfr細(xì)胞可能參與了結(jié)直腸癌進(jìn)展。
[Abstract]:Background: colorectal cancer is the third most malignant tumor in the world. More than 1 million patients are diagnosed with colorectal cancer every year. Traditional treatments (surgery, chemotherapy, radiotherapy, targeted therapy) are not effective. In addition to the mechanism of the tumor itself, the tumor microenvironment especially the inflammatory reaction, the immune response and the progression of tumor and even radiotherapy and chemotherapy. The age of tumor immunotherapy has come. In fact, more and more evidence suggests that the immune system plays an important role in the prevention of tumor occurrence, growth and metastasis, and the study of CD4+T lymphocyte subsets is a hot spot in immunological research in recent years as a CD4+T lymph node. A kind of cell subgroup is a special kind of auxiliary T cell found in recent years. The Tfh cells expressing CXCR5 are recruited into the lymphoid follicles in the chemotactic of CXCL13, participate in the differentiation of B cells and the formation of the germinal center, and regulate the immune function by producing IL-21 and other adhesion molecules such as ICOS and other cytokines. Tfr cells, as a regulatory counterpart of Tfh cells, also have phenotypic characteristics of Tfh and Foxp3+Treg cells, inhibit the formation of germinal centers and differentiate between B cells, and act as opposite roles to Tfh. Recent studies have shown that the dysfunctional immune system plays an important role in the development of breast cancer, non small cell lung cancer and sarcomas, while Tfh and Tfr are in place. The study of colorectal cancer patients was rarely reported at home and abroad. Flow cytometry and enzyme-linked immunosorbent assay were used to detect the expression of Tfh, Tfr and the content of IL-21 in the peripheral blood of colorectal cancer patients and healthy people, and to analyze the correlation with the clinicopathological parameters and to explore the significance of their expression in colorectal cancer. To detect the level of peripheral blood expression of Tfh and Tfr in colorectal cancer patients and healthy controls, and to determine the IL-21 content of the peripheral blood supernatant, and to analyze the relationship between Tfh and Tfr and the clinicopathological parameters and to explore the significance of their expression in colorectal cancer. Methods: 1 the flow cytometry was used to detect the colorectal cancer patients and the healthy control group. The expression of CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3-Tfh and CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3+Tfr cells in peripheral blood.2 by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) method, at the molecular level, the content of IL-21 in the peripheral blood supernatant of colorectal cancer patients and healthy controls was detected at the molecular level. Results: 1 of the experimental group of colorectal cancer patients with the same information and clinical characteristics A total of 62 cases, 34 male and 28 female, age range 23~83 years, average age 57.6 years, middle age 58.5 years old, pathology confirmed.TNM staging of adenocarcinoma: stage I, 21 cases, stage III 25 cases, stage IV 9 cases (4 cases of liver metastasis, 3 lung metastasis, peritoneal metastasis 1, 1 cases of brain metastasis), of which, I, II, III and part IV stage (4 case of liver metastases) There were 32 cases of lymph node metastasis and 30 cases without lymph node metastasis. The healthy control group was 30 cases, 6 men and 24 women, the age range was 26~78 years, the average age was 53.2 years and the median age was 54 years. The experimental group and the healthy control group had no statistical difference between the.2 experiment group and the control group at the age, sex, and smoking status. The expression of Tfh and Tfr cells in the blood was marked by CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3- as a Tfh cell, and CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3+ as a marker for Tfr cells. The expression of Tfh cells and Tfr cells in peripheral blood of the colorectal cancer patients and the control group was detected by flow cytometry. The.P1 gate of the peripheral blood of the peripheral blood was 2 of the peripheral blood lymphocytes, and the CD4+T cells were set up to be 2. The expression of Tfh and Tfr cells in peripheral blood, Q3 and Q4, respectively,.3 experimental group and control group, the expression of Tfh cells and Tfr cells in the peripheral blood of the control group, the percentage of Tfh cells in the peripheral blood of CRC patients was higher than that of the healthy control group (2.93 + 1.34, P=0.038), and the peripheral blood of the experimental group was lower than the healthy control group. The relationship between the peripheral blood Tfh cells and the clinicopathological parameters in the patients with.4 colorectal cancer (0.16 + 0.09vs0.2 + 0.11, P=0.047) with lymph node metastasis, Tfh cells accounted for the percentage of CD4+T cells with no lymph node metastasis (2.85 + 1.5 vs2.20 + 1.2). The percentage of Tfh cells in TNM staging was compared with the percentage of CD4 +T cells, stage I (1.39 + 0.64) and IV stage (1.97 + 0.82) compared, P=0.04, there were statistical differences, while phase I and stage II, phase II, stage II, stage III and IV were more than 0.05, and there was no statistical difference. Tfh cells in CEA5ng/ml and CEA5ng/ml two groups of CRC patients were compared with Tfh cells (3.06 + 2.79vs2.19 + 2.16, P=0.173), and there was no statistical difference in the.5 enzyme immunoadsorption experiment The IL-21 level of peripheral blood supernatant in the experimental group and the healthy control group was detected. The results showed that the serum IL-21 level of the colorectal cancer patients in the experimental group was higher than that of the healthy control group (196.48 + 69.85vs149.85 + 91.49, P0.05). Conclusion: the amount of Tfh cells in the peripheral blood of 1 colorectal cancer patients was increased, and the expression of Tfr was decreased, and the peripheral blood was in the peripheral blood. Supernatant IL-21 level increased.2 Tfh, Tfr cells may participate in the progression of colorectal cancer.
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34

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本文編號：2057705