本文選題：結腸癌 + KLF4　； 參考：《承德醫(yī)學院》2017年碩士論文

【摘要】：結腸癌(colon cancer)為嚴重威脅人類健康的主要癌種之一,不論是在世界范圍內還是國內,其發(fā)病率和死亡率逐年上升,全面探索該病的發(fā)生機理于其診治意義深廣。胃腸富集Krüppel樣因子(Gut enriched Krüppel like factor4,KLF4),可以廣泛在人類多種組織和器官中表達,且其已經被發(fā)現與許多種類的惡性腫瘤的發(fā)病發(fā)展過程息息相關,是最近惡性腫瘤發(fā)生相關基因的研究熱點之一。根據各文獻報道總結,KLF4在胃腸、肝、膀胱及皮膚等組織的癌種中低表達,表現為對癌癥的負向效能,在原發(fā)性乳腺導管、前列腺、口腔等組織與部位的惡性腫瘤中高表達,表現為腫瘤正向效能。VEGF作為當前研究最為深入的腫瘤血管促生因子,已被發(fā)現在幾乎所有的實體腫瘤中均有過表達現象,被認為是已知的最為強大的腫瘤血管內皮生長促進要素,而且以其為靶點的藥物也已在臨床中廣泛應用。有關結腸惡性腫瘤的大量研究已經證實,VEGF在結腸癌癌組織與正常組織中的表達水平有顯著差異,且與結腸癌的浸潤深度、有無淋巴結轉移相關,可以作為預后指標。然而,有關KLF4及VEGF之間聯(lián)系的研究國內外報道不多,尤其在結腸癌發(fā)生機制中,二者之間是否存在相互調控關系尚無報道。本研究初步探討VEGF與KLF4在結腸癌中的線性關系,通過檢測沉默KLF4基因后結腸癌HT-29細胞株VEGF蛋白的表達水平,探尋結腸惡性腫瘤發(fā)生的部分機理,探討潛在的治療靶點。目的:對結腸癌及癌旁組織中KLF4和VEGF蛋白表達情況行檢測,比較KLF4和VEGF蛋白之間的相關性。進一步再通過檢測沉默KLF4基因后結腸癌HT-29細胞株VEGF蛋白的表達水平,以證實KLF4在結腸癌中對VEGF的調控關系。方法:收集由秦皇島市第一醫(yī)院自2015年9月至2016年1月收治的經手術切除的結腸癌的癌組織標本及癌旁正常結腸黏膜組織標本每組各35例,以Western-blotting方法檢測KLF4及VEGF蛋白含量的表達情況,以此來反應結腸癌組織及癌旁正常結腸黏膜組織中VEGF及KLF4的表達水平。對結腸癌HT-29細胞株進行細胞培養(yǎng),然后利用KLF4-Si RNA瞬時轉染從而下調結腸癌HT-29細胞中KLF4基因的表達,并培養(yǎng)沉默表達KLF4的結腸癌細胞株,再以Western-blotting方法檢測細胞株中KLF4及VEGF蛋白表達情況,驗證轉染成功后再根據轉染前后VEGF表達水平的變化,明確二者之間的調控關系,對實驗數據進行統(tǒng)計分析。結果:1結腸癌組織Western-blotting結果1.1在結腸癌、癌旁組織中KLF4和VEGF蛋白表達情況:在癌組織中,KLF4的表達量(VEGF/GAPDH)為0.403±0.072,明顯低于癌旁正常結腸黏膜組織的0.613±0.206,兩項結果比較在醫(yī)學統(tǒng)計學中具備顯著性差異(t=-5.690,P0.001);VEGF蛋白的表達量(VEGF/GAPDH)為0.499±0.149,癌旁組織為0.178±0.054,兩項結果比較顯示前者表達顯著高于后者,在醫(yī)學統(tǒng)計學中具備顯著性差異(t=11.990,P0.001)。1.2在結腸癌組織中KLF4和VEGF蛋白表達的相關性依Western-blotting中KLF4和VEGF蛋白的表達結果,經Pearson直線相關分析得出:KLF4與VEGF二者蛋白的表達量呈顯著負相關,r=-0.713(P0.001)。2沉默KLF4基因后,結腸癌HT-29細胞株Western-blotting結果2.1 HT-29細胞轉染前后KLF4和VEGF蛋白表達情況:沉默KLF4后,提取結腸癌HT-29細胞中總蛋白,用Western-blotting方法檢測兩組細胞中KLF4及VEGF的表達含量:KLF4沉默實驗組KLF4蛋白的表達量(KLF4/GAPDH)為0.165±0.017,明顯低于對照組KLF4蛋白的表達量0.311±0.034,兩項結果比較在醫(yī)學統(tǒng)計學中具備顯著性差異(t=-11.470,P0.001);KLF4沉默實驗組VEGF蛋白的表達量(VEGF/GAPDH)為0.816±0.042,對照組為0.630±0.083,兩項結果比較在醫(yī)學統(tǒng)計學中具備顯著性差異(t=6.010,P0.001)。2.2轉染后HT-29細胞中KLF4和VEGF蛋白表達的相關性依Western-blotting中KLF4和VEGF蛋白表達結果,經Pearson直線相關分析得出:KLF4與VEGF蛋白的表達量呈顯著負相關,r=-0.764(P=0.016)。結論:1在結腸癌中,KLF4蛋白的表達低于癌旁組織,對結腸癌可能為抑制效應;VEGF蛋白在結腸癌組織中的表達量則明顯高于癌旁的正常組織,為結腸癌發(fā)生過程中的促進因子。2 KLF4-Si RNA瞬時轉染HT-29細胞后,KLF4蛋白表達明顯下調,說明瞬時轉染成功。3 KLF4沉默后表達作用下降,VEGF蛋白的表達上調,二者的這種調控作用可能與結腸癌的發(fā)生及腫瘤血管形成有關,KLF4可能通過調控VEGF蛋白表達水平而調控結腸癌的發(fā)病過程。
[Abstract]:Objective : To investigate the relationship between the expression of KLF4 and VEGF protein in colon cancer . Results : The expression of KLF4 and VEGF protein in colon cancer and adjacent tissues was 0.403 鹵 0.072 . The expression of KLF4 and VEGF protein in colon cancer tissues was 0.612 鹵 0.042 . The expression of KLF4 and VEGF protein was significantly correlated with the expression of KLF4 and VEGF protein in colon cancer tissues . KLF4 may regulate the progression of colon cancer by regulating the level of VEGF protein expression .
【學位授予單位】：承德醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.35

【參考文獻】

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本文編號：2055910