本文選題：上皮性卵巢癌 + 腫瘤干細(xì)胞��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的:上皮性卵巢癌(Epithelia ovarian cancer,以下簡(jiǎn)稱(chēng)卵巢癌)是嚴(yán)重威脅廣大婦女健康的婦科惡性腫瘤之一。由于該疾病早期臨床癥狀不明顯,多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處晚期。雖然經(jīng)過(guò)規(guī)范的腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)以及術(shù)后輔以鉑類(lèi)為主的藥物聯(lián)合化療能夠改善患者預(yù)后,但是由于其較易發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移和腫瘤復(fù)發(fā),嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。因此,對(duì)卵巢癌的發(fā)病、復(fù)發(fā)以及耐藥機(jī)制做深入的研究已成為婦科惡性腫瘤研究領(lǐng)域的難點(diǎn)與熱點(diǎn)問(wèn)題。腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells,CSCs)是一類(lèi)可復(fù)制或者再生的腫瘤細(xì)胞,數(shù)量較少,具有無(wú)限增殖、自我更新、高致瘤性等特點(diǎn),可成功地進(jìn)行異種移植并呈現(xiàn)與原腫瘤相同的具有異質(zhì)性的細(xì)胞表面標(biāo)志物或表型。CSCs在腫瘤的發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移以及腫瘤復(fù)發(fā)、化療耐藥中起至關(guān)重要的作用。目前用于CSCs研究的的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記分子有CD133、CD117、CD24、CD44和乙醛脫氫酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)等。因卵巢癌CSCs至今尚未分離鑒定,我們將此種具有CSCs生物學(xué)特性的卵巢癌細(xì)胞稱(chēng)之為腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞。血管生成擬態(tài)(Vasculogenic mimicry,VM)結(jié)構(gòu)自發(fā)現(xiàn)至今已有10多年的歷史。該結(jié)構(gòu)由經(jīng)過(guò)塑形的腫瘤細(xì)胞和能夠被過(guò)碘酸雪夫氏試劑(Periodic acid Schiff,PAS)染色陽(yáng)性的物質(zhì)圍成管道樣結(jié)構(gòu),血液流淌其中,能夠?yàn)槟[瘤的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)。VM是腫瘤血液供應(yīng)除血管外的另一重要結(jié)構(gòu)。研究發(fā)現(xiàn)VM與眾多惡性腫瘤預(yù)后密切相關(guān)。CSCs不僅參與血管的發(fā)生,還可能通過(guò)諸如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路使腫瘤干細(xì)胞的塑形、橫向分化等,參與惡性腫瘤VM的形成,共同影響腫瘤的發(fā)生、侵襲以及轉(zhuǎn)移。本研究第一部分收集術(shù)后隨訪(fǎng)資料完整的卵巢癌患者石蠟標(biāo)本120例,采用CD31/過(guò)碘酸雪夫氏試劑(Periodic acid Schiff,PAS)雙重染色法鑒定VM結(jié)構(gòu);采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)CD133的表達(dá)�；仡櫺苑治鯟D133、VM與卵巢癌患者臨床病理資料的關(guān)系及二者對(duì)患者生存時(shí)間的影響。探討cd133、vm在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征和患者預(yù)后的關(guān)系。第二部分采用無(wú)血清懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)人卵巢癌skov3細(xì)胞,分離獲得懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞球,經(jīng)過(guò)傳代培養(yǎng)觀察其生物學(xué)特性及此類(lèi)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)第1、3、5、7代分選細(xì)胞cd133陽(yáng)性細(xì)胞比例,采用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和小鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)鑒定第7代分選細(xì)胞生物學(xué)特性;通過(guò)matrigel三維立體培養(yǎng)比較第7代分選細(xì)胞與親代skov3細(xì)胞的vm形成能力,采用rt-pcr的方法,檢測(cè)第7代分選細(xì)胞與親代skov3細(xì)胞的vm形成關(guān)鍵因子基質(zhì)金屬蛋白酶2,9(matrixmetalloproteinases-2,9,mmp-2,mmp-9)含量的差異性,初步探討卵巢癌干細(xì)胞樣細(xì)胞在vm形成機(jī)制中的作用。第三部分將無(wú)血清懸浮培養(yǎng)的第7代分選細(xì)胞接種于裸鼠,建立卵巢癌移植瘤模型,分別給予順鉑(cisplatin,ddp)最大耐受劑量化療(mtd-ddp)和低劑量節(jié)拍化療(ldm-ddp)。采用cd31/pas雙重染色法鑒定卵巢癌組織中vm的結(jié)構(gòu),顯微鏡下分別計(jì)數(shù)vm和微血管數(shù)量,比較其差異性。采用western-blot方法檢測(cè)兩種化療方式裸鼠皮下移植瘤組織中vm信號(hào)通路上皮細(xì)胞激酶(epithelialcellkinase,epha2)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide-3-kinase,pi3k)、層黏連蛋白-5γ2鏈(laminin-5γ2,ln-5γ2)表達(dá)的差異性。分析兩種化療方式對(duì)于裸鼠移植瘤模型vm及微血管形成的影響,初步探討mtd-ddp與ldm-ddp對(duì)于vmepha2信號(hào)通路的影響,為卵巢癌的靶向治療提供新的臨床思路。第一部分腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物cd133在上皮性卵巢癌血管生成擬態(tài)中的表達(dá)及意義方法:收集術(shù)后隨訪(fǎng)資料完整的上皮性卵巢癌患者石蠟標(biāo)本120例,采用cd31/pas雙重染色法鑒定卵巢癌組織中vm的結(jié)構(gòu);采用免疫組織化學(xué)sp法檢測(cè)cd133的表達(dá)�；仡櫺苑治鯿d133表達(dá)、vm形成與患者臨床病理資料的關(guān)系,以及cd133表達(dá)和vm形成對(duì)患者生存時(shí)間的影響。結(jié)果:1120例上皮性卵巢癌患者的臨床病理資料特點(diǎn)120例上皮性卵巢癌患者中,小于60歲的患者為78例(65.0%),大于等于60歲患者為42例(35.0%);按組織學(xué)分類(lèi)分為漿液性癌74例(61.7%),黏液性癌35例(29.2%),子宮內(nèi)膜樣癌11例(9.1%);按照f(shuō)igo(2009年)手術(shù)-病理分期:i期28例(23.3%),Ⅱ期10例(8.3%),iii期60例(50.0%),iv期22例(18.4%);按照組織分化程度:高分化(g1)17例(14.2%),中分化(g2)59例(49.2%),低分化(g3)44例(36.6%);發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移者為51例(42.5%),無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者為69例(57.5%)。39例(32.5%)患者產(chǎn)生鉑類(lèi)耐藥,81例(67.5%)患者為鉑敏感患者。2上皮性卵巢癌組織中vm結(jié)構(gòu)以及cd133的表達(dá)情況120例上皮性卵巢癌組織中,vm結(jié)構(gòu)陽(yáng)性(vm+)為52例,占總數(shù)的43.3%,vm陰性(vm-)68例,占總數(shù)的56.7%。cd133表達(dá)陽(yáng)性(cd133+)56例,占總數(shù)的46.7%,陰性(cd133-)64例,占總數(shù)的53.3%。其中,cd133+vm+38例,占總數(shù)的31.7%,cd133-vm+14例,占總數(shù)的11.7%,cd133+vm-18例,占總數(shù)的15.0%,cd117-vm-50例,占總數(shù)的41.6%。3上皮性卵巢癌組織中vm形成、cd133的表達(dá)與患者臨床病理資料的關(guān)系上皮性卵巢癌組織中vm的形成與患者的年齡、組織類(lèi)型及淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移均無(wú)關(guān)(χ2值分別為0.722、1.660和0.501,p值分別為0.395、0.436和0.479);vm的形成與卵巢癌手術(shù)-病理分期、組織分化程度及鉑類(lèi)化療敏感性均密切相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為8.744、41.903和15.781,p值分別為0.003、0.001和0.001)。cd133的表達(dá)與卵巢癌患者的年齡、組織類(lèi)型及淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移均無(wú)關(guān)(χ2值分別為0.024、0.031和0.005,p值分別為0.878、0.985和0.941);其與手術(shù)-病理分期、組織分化程度及鉑類(lèi)化療敏感性均明顯相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為8.744、19.944和10.690,p值分別為0.003、0.001和0.001)。4具有vm的上皮性卵巢癌組織中cd133表達(dá)與患者臨床病理資料的關(guān)系按cd133表達(dá)與vm形成的關(guān)系將120例卵巢癌患者分為cd133+vm+、cd133-vm+、cd133+vm-和cd133-vm-共4組。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),cd133在上皮性卵巢癌vm+組和vm-組的表達(dá)分別與年齡、組織類(lèi)型及淋巴有無(wú)轉(zhuǎn)移均無(wú)關(guān)(χ2值分別為0.434、8.344及2.900,p值分別為0.933、0.214及0.407)。cd133在上皮性卵巢癌vm+組和vm-組的表達(dá)分別與手術(shù)-病理分期、組織分化程度及鉑類(lèi)化療敏感性密切相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為14.683、51.577及25.533,p值分別為0.002、0.001及0.001)。在手術(shù)-病理分期較晚(iii~iv期)、組織分化程度較低(g3)以及鉑類(lèi)耐藥的患者中cd133+vm+組比例明顯高于其他3組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p值0.05)。而cd133-vm+、cd133+vm-、cd133-vm-這3組患者比例在手術(shù)-病理分期、組織分化程度及化療敏感性方面均無(wú)明顯差異(p值0.05)。5上皮性卵巢癌中vm形成與cd133表達(dá)之間的關(guān)系sepearman相關(guān)分析顯示,上皮性卵巢癌組織中vm的形成與cd133的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.463,p≤0.001)。即在上皮性卵巢癌組織中,vm結(jié)構(gòu)陽(yáng)性中cd133的表達(dá)率較vm結(jié)構(gòu)陰性者更高。6上皮性卵巢癌組織vm中cd133的表達(dá)與及患者生存率的關(guān)系120例卵巢癌患者術(shù)后進(jìn)行隨訪(fǎng),隨訪(fǎng)時(shí)間6月~72月。隨訪(fǎng)結(jié)果顯示58例刪失,死亡53例,死亡率為44.2%。按有無(wú)vm結(jié)構(gòu)繪制kaplan-meier曲線(xiàn);分析顯示vm+組生存時(shí)間中位數(shù)為25.0個(gè)月,vm-組生存時(shí)間中位數(shù)為63.0個(gè)月,兩組患者的生存曲線(xiàn)分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=29.559,p0.001)。按cd133的表達(dá)繪制kaplan-meier曲線(xiàn);分析顯示cd133+組生存時(shí)間中位數(shù)為25.0個(gè)月,vm-組生存時(shí)間中位數(shù)為63.0個(gè)月,兩組患者的生存曲線(xiàn)分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=25.408,p0.001)。進(jìn)一步以cd133+vm+、cd133-vm+、cd133+vm-和cd133-vm-這4組繪制kaplan-meier曲線(xiàn);經(jīng)log-rank檢驗(yàn)結(jié)果顯示,各組生存時(shí)間存在差異性(χ2=51.941,p0.001),其中cd133+vm+組生存時(shí)間最短,為22.0個(gè)月。第二部分人卵巢癌skov3細(xì)胞分選出的腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞在血管生成擬態(tài)形成中作用的初步探討方法:采用無(wú)血清懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)人卵巢癌skov3細(xì)胞,分離獲得懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞球,經(jīng)過(guò)傳代培養(yǎng)觀察其生物學(xué)特性及此類(lèi)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)第1、3、5、7代分選細(xì)胞cd133、cd117陽(yáng)性細(xì)胞比例,采用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和小鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)鑒定第7代分選細(xì)胞生物學(xué)特性;通過(guò)matrigel三維立體培養(yǎng)比較第7代分選細(xì)胞與親代skov3細(xì)胞的vm形成能力,采用rt-pcr的方法,檢測(cè)第7代分選細(xì)胞與親代skov3細(xì)胞的vm形成關(guān)鍵因子基質(zhì)金屬蛋白酶2,9(matrixmetalloproteinases-2,9,mmp-2,mmp-9)含量差異性。以上實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次。結(jié)果:1采用無(wú)血清懸浮培養(yǎng)人卵巢癌skov3細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察將skov3細(xì)胞接種于無(wú)血清培養(yǎng)基中,大部分沉積于培養(yǎng)板底,并有部分呈貼壁生長(zhǎng),初始形態(tài)各異,呈現(xiàn)圓形或者橢圓形,透明折光性較強(qiáng),此后貼壁細(xì)胞逐漸增多,可形成細(xì)胞島樣結(jié)構(gòu),散布于培養(yǎng)瓶底部,有的細(xì)胞形成較為短小的偽足,折光性逐漸降低,24小時(shí)左右大部分skov3細(xì)胞死亡,僅小部分細(xì)胞存活并呈懸浮生長(zhǎng)。2-4天后可見(jiàn)少量的懸浮細(xì)胞球形成,由3-8個(gè)細(xì)胞組成,外觀不規(guī)則,細(xì)胞大小一致,且結(jié)合較為松散,具有一定的折光性。5-7天后,懸浮球細(xì)胞數(shù)量增多達(dá)數(shù)十個(gè),體積增大,呈現(xiàn)圓球狀外觀,細(xì)胞間連接緊密,界限不清,折光性增強(qiáng)。隨著細(xì)胞傳代,懸浮細(xì)胞球數(shù)量不斷增加,且體積不斷增大。2流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果流式檢測(cè)結(jié)果表明cd133陽(yáng)性和cd117陽(yáng)性細(xì)胞在skov3球形體細(xì)胞親代skov3和每一代分選細(xì)胞中含量變化很大,親代skov3細(xì)胞cd133陽(yáng)性細(xì)胞率為0.25%,cd117陽(yáng)性細(xì)胞率為0.01%;而第1、3、5、7代分選細(xì)胞中的cd133陽(yáng)性細(xì)胞率分別為40.41%、70.00%、84.69%和91.58%;cd117陽(yáng)性細(xì)胞率分別為14.96%、25.14%、37.73%和49.58%,cd133和cd117陽(yáng)性細(xì)胞率隨著分選細(xì)胞傳代次數(shù)的增加明顯呈上升趨勢(shì)。3克隆形成實(shí)驗(yàn)無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的第7代分選細(xì)胞和親代skov3細(xì)胞均具有克隆形成能力,第7代分選細(xì)胞的克隆形成率為50.33%,而親代skov3的克隆形成率為5.33%。第7代分選細(xì)胞與親代skov3細(xì)胞克隆形成率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=15.093,p0.001)。表明第7代分選細(xì)胞具有更強(qiáng)的克隆形成能力。4裸鼠體內(nèi)成瘤能力實(shí)驗(yàn)采用無(wú)血清懸浮培養(yǎng)的第7代分選細(xì)胞和普通培養(yǎng)基培養(yǎng)的親代skov3細(xì)胞分別以不同的細(xì)胞密度注射于6只balb/c雌性裸鼠左、右側(cè)大腿皮下。結(jié)果顯示,接種第7代分選細(xì)胞的裸鼠右側(cè)大腿在3周左右即可觀察到腫瘤生長(zhǎng),而接種親代skov3細(xì)胞的裸鼠左側(cè)大腿在同一時(shí)期未觀察到腫瘤生長(zhǎng)。至6周時(shí),接種第7代分選細(xì)胞的裸鼠右側(cè)大腿均能見(jiàn)到腫瘤形成(6/6),成瘤率為100%,而接種親代skov3細(xì)胞的裸鼠始終左側(cè)大腿未見(jiàn)成瘤(0/6),成瘤率為0,懸浮細(xì)胞球比親代細(xì)胞更具成瘤能力。5分選細(xì)胞與親代skov3細(xì)胞形成vm的能力的比較matrigel基質(zhì)膠中,分選細(xì)胞在1.5h開(kāi)始形成vm管狀結(jié)構(gòu),部分細(xì)胞伸長(zhǎng)呈長(zhǎng)梭形,形成突起,細(xì)胞間突起彼此連接,構(gòu)成網(wǎng)格狀。此后細(xì)胞間連接逐漸增多,管道縱橫交錯(cuò),連接緊密,4h后形成較為規(guī)則的網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu),持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng),至30h結(jié)構(gòu)方開(kāi)始松散凋落;而skov3細(xì)胞于接種后3h才開(kāi)始出現(xiàn)vm管狀結(jié)構(gòu),部分細(xì)胞亦產(chǎn)生突起,但與分選細(xì)胞相比,突起數(shù)量不多。細(xì)胞間連接形成緩慢,至6h后管狀樣結(jié)構(gòu)達(dá)最多,但規(guī)則的網(wǎng)格形成不多,細(xì)胞間連接不規(guī)則。6real-timepcr檢測(cè)第7代分選細(xì)胞和親代skov3細(xì)胞mmp2、mmp9的表達(dá)采用實(shí)時(shí)熒光定量pcr方法,以gapdh為內(nèi)參基因,對(duì)2條目的rna進(jìn)行歸一化處理,分析親代skov3細(xì)胞與懸浮細(xì)胞球中mmp-2、mmp-9基因的表達(dá)水平。根據(jù)熔解曲線(xiàn),在基因擴(kuò)增過(guò)程中沒(méi)有明顯的引物二聚體形成,證明引物的特異性較好;根據(jù)擴(kuò)增曲線(xiàn),隨著循環(huán)數(shù)的增加熒光信號(hào)具有明顯的對(duì)數(shù)期,且擴(kuò)增曲線(xiàn)平滑,檢測(cè)到的各目的基因rna的ct值在20-30之間,屬于正常檢測(cè)值范圍,其值可信。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析懸浮細(xì)胞球的mmp-2、mmp-9基因較skov3細(xì)胞分別增高了2倍、7.6倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-21.96,p0.001;t=-6.94,p=0.016)。第三部分不同化療模式對(duì)裸鼠卵巢癌移植瘤血管生成擬態(tài)epha2信號(hào)通路影響的研究方法:體外無(wú)血清懸浮培養(yǎng)skov3細(xì)胞至第7代,將1×107細(xì)胞重懸于0.2mlpbs中,接種于6-8周齡雌性裸鼠大腿外側(cè)皮下,接種于裸鼠,建立卵巢癌移植瘤模型。待移植瘤體積生長(zhǎng)至150mm3-200mm3時(shí),隨機(jī)將36只裸鼠分為三組,每組12只,給予不同方式化療,即順鉑最大可耐受劑量組(mtd-ddp組),ddp3mg/kg,1次/3日,腹腔注射,共6次;順鉑低劑量節(jié)拍化療組(ldm-ddp組),ddp1mg/kg,1次/日,腹腔注射,共18次;對(duì)照組,等量生理鹽水腹腔注射,1次/日,共計(jì)18次。采用cd31/pas雙重染色法鑒定卵巢癌組織中vm和微血管結(jié)構(gòu),顯微鏡下分別計(jì)數(shù)vm和微血管數(shù)量,比較其差異性。采用western-blot方法檢測(cè)兩種化療方式裸鼠皮下移植瘤組織中vm信號(hào)通路epha2、pi3k、ln-5γ2蛋白表達(dá)的差異性。結(jié)果:1裸鼠的一般情況45只雌性裸鼠的體重為18-20g,平均體重為(18.96±0.62)g,按照化療方式的不同將其隨機(jī)分為三組即mtd-ddp組、ldm-ddp組和對(duì)照組,mtd-ddp組裸鼠體重為(19.03±0.67)g;ldm-ddp組裸鼠體重為(18.97±0.61)g;對(duì)照組裸鼠體重為(18.87±0.62)g。三組雌性裸鼠體重比較無(wú)明顯差異,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=0.263,p=0.770)。化療結(jié)束后,三組裸鼠化療后移植瘤體重相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(f=32.697,p0.001),與對(duì)照組相比,mtd-ddp組裸鼠體重最輕,為(16.85±0.69)g;lsd-ddp組裸鼠體重[(17.77±0.61)g]介于mtd-ddp組與對(duì)照組[(18.65±0.51)g]之間。2裸鼠卵巢癌移植瘤模型形成情況將富集無(wú)血清懸浮培養(yǎng)的第7代分選細(xì)胞稀釋至1×107個(gè)接種于所有雌性裸鼠右側(cè)大腿皮下,10-14d左右均可形成卵巢癌移植瘤,45只裸鼠均能成瘤(45/45),成瘤率為100%,且隨著腫瘤的生長(zhǎng),腫瘤體積均能達(dá)到150mm3-200mm3。其中mtd-ddp組移植瘤體積為(176.27±15.46)mm3,ldm-ddp組移植瘤體積為(178.73±14.40)mm3,對(duì)照組體積為(174.60±16.02)mm3。三組比較裸鼠移植瘤體積無(wú)顯著性差異(f=0.277,p=0.760)�；熯^(guò)程中,三組裸鼠皮下移植瘤處于持續(xù)增長(zhǎng)狀態(tài),至化療結(jié)束后,測(cè)量剝下腫瘤體積,結(jié)果發(fā)現(xiàn),三組裸鼠化療后移植瘤體積相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(f=105.883,p0.001)。與對(duì)照組相比,ldm-ddp組移植瘤體積最小,為(436.33±68.29)mm3;mtd-ddp組移植瘤體積(650.93±69.60)mm3介于ldm-ddp組與對(duì)照組(802.40±69.79)mm3之間。3三組裸鼠移植瘤微血管計(jì)數(shù)、vm的差異性的比較經(jīng)過(guò)cd31/pas染色,微血管由內(nèi)皮細(xì)胞圍成,經(jīng)cd31免疫組織化學(xué)染色后,著色于血管內(nèi)皮細(xì)胞膜,呈棕黃色,胞漿可見(jiàn)棕黃色顆粒,且過(guò)碘酸雪夫(pas)染色為陽(yáng)性。若血管腔大于8個(gè)紅細(xì)胞直徑,且有較厚肌層的血管及硬化區(qū)域的血管視為較大血管,均不納入計(jì)算。而vm則由cd31染色結(jié)果陰性的腫瘤細(xì)胞構(gòu)成管腔樣結(jié)構(gòu),pas染色陽(yáng)性物質(zhì)襯附其周?chē)?未見(jiàn)cd31陽(yáng)性的內(nèi)皮細(xì)胞,部分管腔內(nèi)可見(jiàn)紅細(xì)胞。三組經(jīng)過(guò)比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn),三組微血管密度比較存在差異性,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=21.115,p0.001)。經(jīng)兩兩比較,ldm-ddp組移植瘤內(nèi)微血管為(10.87±3.70),數(shù)量最少,對(duì)照組微血管最多(23.13±6.58),而mtd-ddp組微血管數(shù)量(16.33±4.85)介于ldm-ddp組與對(duì)照組之間。三組vm數(shù)量亦存在差異性,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=10.551,p0.001)。ldm-ddp組移植瘤內(nèi)vm為(13.53±3.96),數(shù)量最少,mtd-ddp組vm最多(21.20±5.23),而對(duì)照組vm數(shù)量(17.33±4.44)介于ldm-ddp組與對(duì)照組之間。4移植瘤組織中調(diào)節(jié)vm生成的epha2信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)三組移植瘤中epha2的表達(dá)存在差異性,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=66.130,p0.001)。ldm-ddp組epha2的表達(dá)最低,mtd-ddp組epha2的表達(dá)最高,而對(duì)照組epha2的表達(dá)介于兩組之間。三組移植瘤中pi3k的表達(dá)存在差異性,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=40.132,p0.001)。ldm-ddp組pi3k的表達(dá)最低,mtd-ddp組pi3k的表達(dá)最高,而對(duì)照組pi3k的表達(dá)介于兩組之間。三組移植瘤中l(wèi)n-5γ2的表達(dá)存在差異性,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=32.921,p0.001)。ldm-ddp組ln-5γ2的表達(dá)最低,mtd-ddp組ln-5γ2的表達(dá)最高,而對(duì)照組pi3k的表達(dá)介于兩組之間。結(jié)論:1cd133在上皮性卵巢癌vm中的表達(dá)與腫瘤惡性度有關(guān),是患者預(yù)后的重要指標(biāo)。2cd133+腫瘤干細(xì)胞可能參與上皮性卵巢癌vm的發(fā)生。3采用無(wú)血清懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)的skov3能夠分選出懸浮細(xì)胞球4經(jīng)過(guò)生物學(xué)鑒定,第7代分選細(xì)胞具有腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性。5第7代分選細(xì)胞與親代skov3細(xì)胞相比具有較強(qiáng)的vm形成能力,可能在vm形成中發(fā)揮作用。6ldm-ddp與mtd-ddp相比,能夠更為有效的殺滅卵巢癌細(xì)胞,減少VM及微血管的形成,使腫瘤的生長(zhǎng)受到抑制。7 LDM-DDP與MTD-DDP相比,能夠抑制EphA2信號(hào)通路的EphA2、PI3K、LN-5γ2蛋白表達(dá),可能影響VM形成。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2046182