本文選題：microRNA--p + 肺癌　； 參考：《中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)》2017年02期

【摘要】：microRNAs(miRNAs)是一類在真核生物中廣泛存在的長度約為20~22個核苷酸的單鏈非編碼小RNA,通過與其靶基因mRNA的3'非翻譯區(qū)(3'UTR)結(jié)合發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后抑制作用,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長增殖、細(xì)胞代謝、細(xì)胞凋亡以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展等過程。為研究microRNA-424-5p(miR-424-5p)在肺癌細(xì)胞中的作用及機(jī)理,利用lipo2000轉(zhuǎn)染試劑將miR-424-5p mimics轉(zhuǎn)染入人的非小細(xì)胞型肺癌細(xì)胞(NSCLC)A549中,流式細(xì)胞術(shù)檢測A549細(xì)胞的周期變化及凋亡情況,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長阻滯于G1/G0期且凋亡率顯著上升。利用克隆形成實(shí)驗(yàn)和CCK-8法分別檢測,發(fā)現(xiàn)miR-424-5p導(dǎo)致A549細(xì)胞增殖能力及活力降低。用在線數(shù)據(jù)庫預(yù)測出抗凋亡基因BCL-2可能是miR-424-5p的靶基因,隨后擴(kuò)增BCL-2 mRNA的3'UTR,采用雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)及Western印跡檢測證明BCL-2確為miR-424-5p的靶基因。構(gòu)建BCL-2的真核表達(dá)載體p CMV-HA-BCL-2,與空載分別轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)過表達(dá)BCL-2可抵消miR-424-5p引起的細(xì)胞周期阻滯及細(xì)胞凋亡。以上結(jié)果提示,miR-424-5p可以通過下調(diào)BCL-2的表達(dá)來抑制肺癌細(xì)胞增殖。
[Abstract]:MicroRNAs-miRNAs-) is a class of single-stranded non-coding RNAs with a length of about 20 ~ 22 nucleotides widely present in eukaryotes. It acts as a posttranscriptional inhibitor by binding to the 3'untranslated region of its target gene mRNA and participates in the regulation of cell growth, proliferation and cell metabolism. Apoptosis and tumor development and other processes. In order to study the role and mechanism of microRNA-424-5pmmiR-424-5p) in lung cancer cells, lipo2000 transfection reagent was used to transfect miR-424-5p mimics into human non-small cell lung cancer cell line NSCLCA549. Flow cytometry was used to detect the cell cycle changes and apoptosis of A549 cells. It was found that cell growth was blocked at G 1 / G 0 phase and apoptosis rate increased significantly. By using clone formation assay and CCK-8 assay, it was found that miR-424-5p induced the decrease of proliferation ability and activity of A549 cells. The anti-apoptotic gene BCL-2 was predicted to be the target gene of miR-424-5p by on-line database, then the 3UTRs of BCL-2 mRNA were amplified. The results of double luciferase report and Western blotting showed that BCL-2 was the target gene of miR-424-5p. The eukaryotic expression vector pCMV-HA-BCL-2 of BCL-2 was constructed and transfected into A549 cells respectively. It was found that overexpression of BCL-2 could counteract the cell cycle arrest and apoptosis induced by miR-424-5p. These results suggest that miR-424-5p can inhibit the proliferation of lung cancer cells by down-regulating the expression of BCL-2.
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(No.31530075)資助~~
【分類號】：R734.2

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本文編號：2042463