本文選題：食管腫瘤 + 舒尼替尼(snitinib)��； 參考：《鄭州大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：背景與目的食管癌為世界最多見的消化系惡性腫瘤之一。我國(guó)為食管癌的高發(fā)地區(qū),食管癌的發(fā)病率高居全國(guó)各種惡性腫瘤的前5位[1]。食管癌的早期表現(xiàn)不明顯,確診時(shí)大多已進(jìn)入中晚期,以手術(shù)為主的綜合治療已成為全球共識(shí)[2],能手術(shù)切除者的5年生存率在30%左右[3,4],食管癌在治療中的早期轉(zhuǎn)移和術(shù)后復(fù)發(fā)是造成其死亡率較高的重要原因。然而現(xiàn)在食管癌的治療結(jié)局很不讓人滿意,因此必須要找尋更優(yōu)的治療方案。舒尼替尼(sunitinib)為口服的高選擇性多靶點(diǎn)小分子蛋白激酶抑制劑,能抑制多種信號(hào)通路的正常進(jìn)行,而且它還有抗腫瘤血管生成和抗腫瘤細(xì)胞增殖的生物學(xué)活性[5,6]。它能抑制多種酪氨酸激酶受體,其中就有血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)、FNS樣酪氨酸激酶(FLT 3)、抑制干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(KIT),血小板衍生生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)等多種酪氨酸激酶受體[7]。血管生成擬態(tài)(Vasculogenic mimicry VM)是近年來在某些惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)的一種獨(dú)立于傳統(tǒng)腫瘤血管生成的全新腫瘤微循環(huán)模式[8],前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)食管癌細(xì)胞株中存在VM現(xiàn)象[9],并出現(xiàn)相關(guān)基因的高表達(dá)。本研究用sunitinib作用兩種食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系KYSE70(低分化鱗癌)和KYSE450(高分化鱗癌),觀察其對(duì)高、低分化不同的食管鱗癌細(xì)胞增殖、遷移和VM形成的影響及其不同等,為進(jìn)一步研究sunitinib在食管鱗癌治療中的應(yīng)用打下理論基礎(chǔ)。方法1.用含青霉素(常用濃度是25~100ui/ml)與鏈霉素(25~100μg/ml)且含10%滅活胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液體外培養(yǎng)食管癌細(xì)胞系KYSE70和KYSE450。2.應(yīng)用MTT法檢測(cè)不同濃度(1.50、3.00、6.00、12.00、24.00μmol/L)的sunitinib不同作用時(shí)間(24、48、72h)對(duì)兩種不同細(xì)胞的增殖抑制作用。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度(3、6、12μmol/L)的舒尼替尼作用于兩種細(xì)胞后細(xì)胞的凋亡情況的變化。4.三維培養(yǎng)是利用基質(zhì)膠制成三維培養(yǎng)體系模擬人體內(nèi)環(huán)境,并在此環(huán)境中培養(yǎng)人食管癌鱗狀細(xì)胞KYSE70和KYSE450,再放于熒光倒置顯微鏡下來觀察各實(shí)驗(yàn)組的管道結(jié)構(gòu)形成的形態(tài)及數(shù)量及其變化情況。5.RT-PCR檢測(cè)藥物作用前后各組細(xì)胞VM相關(guān)分子c-Met、mek、VE-cad和MMP-2基因m RNA的表達(dá)的變化情況。結(jié)果1.MTT結(jié)果顯示:舒尼替尼抑制KYSE450和KYSE70細(xì)胞系的增殖,且隨著舒尼替尼濃度的增高兩種細(xì)胞抑制作用也越明顯,根據(jù)不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)抑制率的測(cè)定在72小時(shí)時(shí)抑制率最高,且抑制作用隨時(shí)間和濃度的增加而增大,差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義(P0.05),而兩實(shí)驗(yàn)組之間差異不大(P=0.056)。2.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:(1)3、6、12μmol/Lsunitib分別作用于KYSE70細(xì)胞和KYSE450 48h小時(shí)后,細(xì)胞凋亡率分別為(33.20±0.91)%、(46.00±1.35)%、(69.00±1.56)%和(35.00±0.21)%、(47.00±0.98)%、(74.30±1.28)%,而對(duì)照組細(xì)胞凋亡率為(1.30±0.26)%和(1.50±0.34)%。統(tǒng)計(jì)分析后顯示,隨著舒尼替尼濃度的增加細(xì)胞凋亡率也不斷增大,且呈明顯的濃度依賴性,與空白對(duì)照組相比,差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義(P0.05),而兩實(shí)驗(yàn)組之間差異不大(P=0.053)。3.三維培養(yǎng)結(jié)果顯示:約12小時(shí)后KYSE70和KYSE450細(xì)胞在基質(zhì)膠上均形成典型的血管網(wǎng)狀樣結(jié)構(gòu),呈單個(gè)環(huán)狀或多個(gè)環(huán)相連的網(wǎng)格狀。Sunitinib作用24小時(shí)后,兩種細(xì)胞在體外的管道狀結(jié)構(gòu)形成能力皆被明顯的抑制了,環(huán)狀結(jié)構(gòu)斷裂不全,大部分為不完全封閉環(huán)形甚至形成線狀結(jié)構(gòu),且濃度越大環(huán)狀結(jié)構(gòu)個(gè)數(shù)就越少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而兩組不同的細(xì)胞間相比差異不明顯(P=0.054)。4.RT-PCR結(jié)果顯示:sunitinib作用48小時(shí)后c-met,mek,VE-cad,MMP-2m RNA的表達(dá)明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且C-met與mek下降程度一致,VE-cad與MMP-2下降程度一致;而兩組細(xì)胞之間對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.06)。結(jié)論1.舒尼替尼可通過多種通路有效抑制高低分化食管鱗癌細(xì)胞中VE-cad和C-met的表達(dá),通過下調(diào)MMP-2和mek等下游信號(hào)的表達(dá)而抑制血管生成擬態(tài)的形成和其他途徑共同發(fā)揮這抑制腫瘤細(xì)胞增殖和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的效應(yīng)。2.多靶點(diǎn)靶向治療在食管鱗癌綜合治療中有進(jìn)一步的研究前景。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : Esophageal cancer is one of the most common digestive malignant tumors in the world . The incidence of esophageal cancer is high in the high incidence area of esophageal cancer . It is not obvious that the early stage of esophageal cancer is not obvious , and most of them have entered the middle and late stage , the comprehensive treatment based on operation has become the global consensus . However , the 5 - year survival rate of esophageal cancer is not satisfactory . However , it also has the biological activity of anti - tumor angiogenesis and anti - tumor cell proliferation . It can inhibit various tyrosine kinase receptors , including vascular endothelial growth factor receptor ( VEGFR ) , FNS - like tyrosine kinase ( flt 3 ) , stem cell growth factor receptor ( KIT ) , platelet - derived growth factor receptor ( PDGFR ) and other tyrosine kinase receptors . The effects of sunitinib on proliferation , migration and VM formation in esophageal squamous cell carcinoma were studied by MTT assay . The results of RT - PCR showed that the expression of E - cad and C - met was significantly decreased after 48 hours of sunitinib ( P = 0 . 05 ) , and that of C - met and mek decreased significantly ( P = 0.06 ) . Conclusion 1 . Sunitinib can effectively inhibit the formation of VE - cad and C - met in esophageal squamous carcinoma cells by downregulating the expression of downstream signals such as MMP - 2 and mek .
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 徐紅艷;缺氧微環(huán)境中Bcl-2干擾對(duì)食管鱗癌細(xì)胞Ec9706血管生成擬態(tài)的影響[D];鄭州大學(xué);2014年

2 馮應(yīng)勤;鹽酸�？颂婺崧�(lián)合1α,25-二羥基維生素D_3對(duì)A549細(xì)胞增殖及EGFR表達(dá)的影響[D];鄭州大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：2040064