本文選題：乳腺癌 + 輻射抵抗��； 參考：《南方醫(yī)科大學》2016年博士論文

【摘要】：研究背景及目的：乳腺癌是威脅著全球女性的健康的常見惡性腫瘤。放射治療在乳腺癌的治療中占據(jù)著重要地位,是使用廣泛,臨床獲益顯著的治療手段,可以降低乳腺癌局部腫瘤復發(fā)風險和死亡率。然而,由于新生血管形成速度和惡性腫瘤細胞增殖速度的不平衡,大部分實體瘤內(nèi)部都存在一定的乏氧區(qū)域,存在于乏氧區(qū)域的腫瘤細胞一般被稱作乏氧腫瘤細胞,這些細胞常有顯著的輻射抵抗性。難以被徹底清除的乏氧腫瘤細胞,常常是造成實體瘤晚期發(fā)生轉(zhuǎn)移的一個重要原因。局部乏氧的微環(huán)境是實體瘤的重要特征之一,然而在正常組織中卻罕見乏氧區(qū)域。因此特異性地增加乏氧腫瘤細胞的輻射敏感性是一個提高乳腺癌的放射治療效果的理想途徑。p53是一個常見的抑癌基因,對腫瘤細胞的放射敏感性起著重要的調(diào)節(jié)作用,在多種惡性腫瘤中,p53的功能缺失會引發(fā)對輻射的抵抗。有研究報導,在乏氧的情況下,野生型p53的腫瘤細胞比敲除p53基因的腫瘤細胞對輻射更敏感,因此乏氧微環(huán)境中p53缺失的腫瘤細胞更易存活。而且在某些腫瘤細胞系中,乏氧處理會抑制p53的功能,從而導致細胞對輻射的敏感性減弱,而再激活p53則可以增加乏氧腫瘤細胞的放射敏感性。由于乏氧區(qū)域很少出現(xiàn)在正常組織當中,因此可以靶向乏氧腫瘤細胞的p53融合蛋白可能是一種新穎有效的輻射增敏劑。線粒體自噬,是線粒體上發(fā)生的一類自噬作用,是細胞在某些刺激因素(如低氧、饑餓、氧化應激等)刺激下,細胞中損傷和老化的線粒體被自噬小體特異性吞噬,并被溶酶體降解的過程。Parkin蛋白是線粒體自噬過程中一個重要的調(diào)節(jié)因子, Parkin蛋白被特異性地募集到膜電位低的受損線粒體上,并進一步介導受損線粒體被自噬小體吞噬降解。最近有研究發(fā)現(xiàn)乏氧可以誘導Parkin蛋白介導的線粒體自噬,降解受損的線粒體,從而維持細胞的穩(wěn)態(tài)。而過去的研究發(fā)現(xiàn)自噬參與腫瘤細胞對輻射產(chǎn)生抵抗的過程,因此,我們推測Parkin介導的線粒體自噬可能參與了乏氧細胞的輻射抵抗反應。研究發(fā)現(xiàn)p53既可以在核內(nèi)作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)自噬,也可以通過核外非轉(zhuǎn)錄途徑對自噬進行調(diào)節(jié),而這一途徑的作用機制尚研究甚少。近年來有研究發(fā)現(xiàn),在正常組織細胞中,p53可以抑制線粒體自噬,在鼠的心肌和胰腺β細胞中,胞質(zhì)p53可以通過與Parkin蛋白結(jié)合阻斷線粒體自噬的進程。然而在腫瘤細胞中p53如何調(diào)節(jié)線粒體自噬還未有研究。在我們的前期研究中,我們構(gòu)建了一個新型融合蛋白載體,TAT-ODD-p53,包含人野生型p53蛋白、蛋白轉(zhuǎn)導結(jié)構(gòu)域多肽(TAT47_57),以及缺氧靶向穩(wěn)定性結(jié)構(gòu)域多肽(ODD557-574),并成功地進行了蛋白的表達和純化。同時,我們也合成了其對照蛋白：p53, TAT-p53和TAT-ODD-EGFP。TAT-ODD-p53可以通過TAT多肽區(qū)域的作用成功進入腫瘤細胞,同時,在ODD多肽區(qū)域的作用下選擇性地在乏氧腫瘤細胞中穩(wěn)定存在。我們在體外和體內(nèi)實驗中驗證了TAT-ODD-p53在乏氧條件下對乳腺癌細胞的靶向輻射增敏作用,并闡明其作用機制。我們的研究發(fā)現(xiàn),TAT-ODD-p53可以靶向乏氧的乳腺癌細胞,并通過阻斷Parkin介導的線粒體自噬以增加其輻射敏感性。方法：1.體內(nèi)、體外實驗驗證融合蛋白TAT-ODD-p53在不同氧濃度的乳腺癌細胞中的穩(wěn)定性1.1乳腺癌細胞培養(yǎng)人乳腺癌細胞株MCF-7(p53野生型),和人乳腺癌細胞株MDA-MB-157(p53缺失型)用含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)基在37℃、5%CO2的條件下進行培養(yǎng)。1.2融合蛋白合成構(gòu)建TAT-ODD-p53, TAT-p53,p53 and TAT-ODD-EGFP的質(zhì)粒。通過質(zhì)粒表達和純化獲得相應的融合蛋白,獲得的融合蛋白溶解于50 mM PBS中,在-80℃保存六個月內(nèi)使用。1.3細胞乏氧處理使用Forma 1029厭氧培養(yǎng)箱,在37℃、0.5%O2和5%CO2的條件下對細胞進行乏氧處理。并且在使用融合蛋白或輻照處理前,細胞需在乏氧條件下培養(yǎng)8小時。1.4 Western blot實驗提取待檢測細胞的總蛋白,采用BCA法來測定相應蛋白濃度,接著進行蛋白變性反應,然后使用準備好的蛋白進行電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉步驟,并孵育相應的一抗和二抗,最后在顯影儀上采用ECL法進行顯影。1.5荷瘤鼠模型將MDA-MB-157細胞用無菌生理鹽水重懸制成細胞懸液,將細胞數(shù)調(diào)整為1×107個/ml。選擇6-8周齡的正常雌性Balb/c裸鼠,將接1x107個細胞接種在裸鼠右側(cè)乳房脂肪墊下。為了觀察p53融合蛋白的穩(wěn)定性和分布情況,當腫瘤長至200 mm3左右時,將1 mg/kg的p53融合蛋白進行裸鼠腹腔注射,每天一次連續(xù)注射5天后取瘤體標本進行觀察,在裸鼠處死前1h腹腔注射pimonidazole (60 mg/kg)以標記腫瘤內(nèi)的乏氧區(qū)域。1.6組織免疫熒光將所取腫瘤組織放在使用干冰預冷后錫箔紙上,待組織冷凍以后放置于-80℃凍存。取凍存組織制備冰凍切片,依據(jù)乏氧探針試劑盒(HypoxyprobeTM-1 Kit)說明書操作進行熒光染色,同時進行p53蛋白熒光染色,切片用激光共聚焦熒光顯微鏡進行觀察。2.體外實驗驗證TAT-ODD-p53融合蛋白對乏氧乳腺癌細胞的輻射增敏作用2.1細胞毒性實驗使用MTT比色法,測定通過p53融合蛋白對MCF-7和MDA-MB-157乳腺癌細胞的細胞毒性,以此作為后續(xù)實驗使用的蛋白濃度的參考。消化對數(shù)生長期狀態(tài)良好的乳腺癌細胞,制成單細胞的懸浮液后,均勻接種在96孔板中并培養(yǎng)過夜。第二天分別在常氧和乏氧條件下加入梯度濃度(0,2,4,8,16,32 μg/ml)的融合蛋白孵育72 h,接著在每孔中加入5mg/mL的MTT,充分混勻并繼續(xù)孵育4h,在棄掉上清液之后向每孔中加入150ul二甲基亞砜,最后使用酶標儀來檢測吸光值(A570nm)。2.2克隆形成實驗將對數(shù)生長期的乳腺癌細胞消化制成單細胞懸液,按0、2、4、6、8五個劑量組照接種相應數(shù)量的乳腺癌細胞于6孔板中培養(yǎng)過夜。使用6-MV的X射線對貼壁細胞進行照射后,繼續(xù)培養(yǎng)10-14天,直到培養(yǎng)出肉眼可以見的克隆,將細胞用甲醇固定后,加入1%的結(jié)晶紫乙醇溶液進行細胞染色,使用顯微鏡計算克隆(含有50個細胞以上)數(shù)目。統(tǒng)計數(shù)據(jù),計算克隆形成率和存活分數(shù),依據(jù)多靶單擊進行生存曲線擬合,并通過模型計算輻射增敏比值SER和氧增強比值OER。2.3流式細胞檢測分析檢測細胞凋亡在6孔板中接種5×105個／孔密度的細胞,鏡下觀察細胞的匯合度達到大約80%左右時進行處理。細胞照射繼續(xù)培養(yǎng)24小時后收集細胞檢測凋亡。采用Annexin V-FITC/PI細胞雙染法對細胞進行熒光染色,并使用流式細胞儀來檢測相應的熒光標記。3.體內(nèi)實驗驗證TAT-ODD-p53融合蛋白的輻射增敏作用3.1腫瘤生長抑制試驗當腫瘤長至200mm3左右時,將1mg/kg的p53融合蛋白進行裸鼠腹腔注射,每天注射一次,連續(xù)處理5天,最后一次注射后進行單次劑量10 Gy的照射。使用游標卡尺測量腫瘤的大小,每3天測量一次,腫瘤體積依據(jù)公式V=(axb2)/2來進行計算,a和b分別代表最長徑和最短徑。3.2 TUNEL法檢測組織凋亡在裸鼠照射后7天取腫瘤組織進行冰凍切片,根據(jù)In Situ Cell Death DetectionKit試劑盒的操作說明,通過原位末端標記(’TUNEL)法檢測各組織標本中的凋亡情況,用DAPI熒光試劑復染細胞核后,使用熒光顯微鏡來觀察并計算凋亡細胞數(shù)。4. TAT-ODD-p53融合蛋白對乏氧乳腺癌細胞輻射增敏作用機制的研究4.1構(gòu)建穩(wěn)定表達GFP-LC3的MDA-MB-157細胞在6孔板中接種密度5×105個／孔的MDA-MB-157細胞,待細胞達到40%左右密度時,分別加入MAP1LC3B以及陰性對照LV5-NC慢病毒懸液(MOI=20),同時選擇2孔加入polybrene (6ug/ml)以增加感染效率,培養(yǎng)24h后更換細胞培養(yǎng)基,再繼續(xù)培養(yǎng)72h,使用熒光顯微鏡拍照并計算細胞感染效率。接著通過流式細胞儀將GFP表達陽性的細胞分選出來,從而得到GFP陽性比例較高的細胞,并繼續(xù)擴大培養(yǎng),最終得到可以穩(wěn)定表達GFP-LC3的乳腺癌細胞。4.2 siRNA和plasmid的轉(zhuǎn)染依據(jù)lipofectamine 2000試劑的操作說明,使用陽離子脂質(zhì)體法對細胞進行轉(zhuǎn)染,細胞接種后用無血清培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,當接種細胞的融合度達到70%左右時,將siRNA或者plasmid用轉(zhuǎn)染專用培養(yǎng)基Opti-MEMI Reduced Serum Medium稀釋,同樣的,將lipofectamine 2000用轉(zhuǎn)染專用培養(yǎng)基Opti-MEMI Reduced Serum Medium稀釋后,與siRNA或者plasmid的稀釋溶液充分混合后,在室溫下條件靜置20min,將混合液加入細胞培養(yǎng)板中小心混勻。將處理后的細胞繼續(xù)培養(yǎng)4-6h后,可置換培養(yǎng)基為含血清培養(yǎng)基,再將細胞繼續(xù)置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),進行后續(xù)實驗。4.3免疫熒光共定位實驗將5×104個穩(wěn)定表達GFP-LC3的MDA-MB-157細胞接種在共聚焦培養(yǎng)皿中培養(yǎng)過夜,然后將細胞分別置于常氧(20%02)和乏氧(0.5%O2)條件下培養(yǎng)8h,接著對細胞進行6 Gy劑量的照射,然后繼續(xù)培養(yǎng)6h,用4%的多聚甲醛進行細胞固定,加入200 nM的MitoTracker Red對線粒體進行染色,并用DAPI熒光試劑復染細胞核,最后使用激光共聚焦顯微鏡進行掃描和觀察。4.4透射電鏡實驗將5×105個細胞接種在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)過夜,然后將細胞在乏氧條件下培養(yǎng)8h,細胞接受6 Gy的照射6h后,立即置于含2%的多聚甲醛和2.5%的戊二醛固定液中進行固定。使用振動切片機制作50μm厚度的切片,用1%的四氧化鋨孵育切片1h進行后固定,通過乙醇梯度脫水后將切片嵌入環(huán)氧樹脂中。80℃孵育24 h完成聚合反應,最終制成100 nm的超薄切片,使用透射電鏡進行觀察。4.5 mtDNA分析實驗首先根據(jù)Universal Genomic DNA Extraction Kit說明書步驟獲得基因組DNA,接著使用SYBR(?) Premix Ex TaqTM kit試劑盒,依據(jù)試劑盒操作步驟來進行熒光定量PCR反應�；虮磉_水平通過標準曲線法校正,計算nt-Atp6/Rp113相對表達量。4.6 qRT-PCR實驗首先使用rizol Reagent試劑獲得細胞總RNA,然后依據(jù)PrimeScript (?) RT reagent kit操作步驟來進行逆轉(zhuǎn)錄反應,獲得實驗所需的cDNA;以上一步實驗獲得的cDNA為模板,使用SYBR(?) Premix Ex TaqTM kit試劑盒,依據(jù)試劑盒操作步驟來進行熒光定量PCR反應,以檢測目的mRNA的表達水平。4.7免疫共沉淀使用PARIS kit提取胞質(zhì)蛋白,接著采用Pierce Co-Immunoprecipitation Kit;進行免疫共沉淀反應,將裂解液與含有10 μg一抗的共價交聯(lián)樹脂置于4℃孵育過夜,共沉淀產(chǎn)物洗脫后進行Western blot分析。5.統(tǒng)計分析使用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析,實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(mean±SD)的形式表示,組間采用兩樣本t檢驗(Independent-Sample t-test)進行比較。P值0.05認為有統(tǒng)計學意義。結(jié)果：1.體外實驗證明TAT-ODD-p53特異穩(wěn)定存在于乏氧乳腺癌細胞中用pbs或10μg/mlp53融合蛋白處理p53缺失型乳腺癌細胞MDA-MB-157,分別在常氧(20%02)和乏氧(0.5%02)條件下孵育8h后,用Western blotting檢測p53蛋白表達水平。只有TAT-p53或TAT-ODD-p53融合蛋白處理的細胞中有p53蛋白表達,說明p53融合蛋白是通過TAT結(jié)構(gòu)域成功轉(zhuǎn)入細胞。TAT-p53處理的細胞中p53蛋白在常氧和乏氧條件下都有表達,而只有TAT-ODD-p53可以特異性的在乏氧乳腺癌細胞中穩(wěn)定存在,而在常氧乳腺癌細胞中快速降解。2.體內(nèi)實驗證明TAT-ODD-p53特異穩(wěn)定存在于乳腺癌乏氧區(qū)域使用免疫熒光共定位的方法分析荷瘤小鼠模型中TAT-ODD-p53與乏氧標記pimonidazole的表達,發(fā)現(xiàn)TAT-ODD-p53的表達與乏氧探針pimonidazole的表達區(qū)域具有一致性,說明TAT-ODD-p53可以特異性的穩(wěn)定存在于乳腺癌腫瘤組織中的乏氧區(qū)域。3.檢測TAT-ODD-p53的IC50值為了后續(xù)實驗選擇合適的蛋白濃度,我們在不同氧濃度條件下,使用梯度濃度的TAT-ODD-p53蛋白處理乳腺癌細胞,通過MTT法檢測TAT-ODD-p53蛋白的細胞毒性作用,并計算其IC50值。TAT-ODD-p53只有在乏氧條件下有顯著抑制腫瘤細胞增殖的作用,而p53缺失型乳腺癌細胞MDA-MB-157與p53野生型乳腺癌細胞MCF7細胞的ICso值分別為4.00 μg/ml和12.85 μg/ml。4. TAT-ODD-p53對乏氧乳腺癌細胞的輻射增敏作用不同氧濃度條件下,通過克隆形成實驗數(shù)據(jù)計算得到MCF7與MDA-MB-157細胞的氧增強比(OER)分別為1.91和2.43,說明乏氧條件下乳腺癌細胞產(chǎn)生了明顯的輻射抵抗。而乏氧條件下MCF7與MDA-MB-157細胞在4.00 μg/ml的TAT-ODD-p53處理1小時后的放射增敏比(SER)分別為1.55 and 2.24,表明TAT-ODD-p53提高了乏氧乳腺癌細胞的輻射敏感性,減輕了乏氧條件下乳腺癌細胞的輻射抵抗。同時通過流式分析檢測發(fā)現(xiàn)和western blot檢測TAT-ODD-p53處理乏氧乳腺癌MDA-MB-157細胞后凋亡明顯增加,這也證實了TAT-ODD-p53對乏氧乳腺癌細胞的輻射增敏作用。5.體內(nèi)實驗證明TAT-ODD-p53對乏氧乳腺癌細胞的輻射增敏作用建立MDA-MB-157移植瘤小鼠模型,使用PBS或TAT-ODD-p53 (1 mg/kg)處理后進行單次劑量10Gy的X線照射,觀察瘤體長到預期最大體積(600 mm3).的時間。在未照射組,使用PBS或TAT-ODD-p53處理后瘤體生長時間分別為14和18天,在照射組二者分別為21和32天。說明TAT-ODD-p53聯(lián)合照射組的瘤體生長速度顯著減緩。而TAT-ODD-EGFP對裸鼠腫瘤的生長并沒有抑制作用也沒有提高腫瘤的放射敏感性,說明TAT-ODD本身并沒有抗腫瘤作用。同樣的,通過TUNEL法檢測瘤體組織的凋亡情況,發(fā)現(xiàn)在TAT-ODD-p53聯(lián)合照射組的凋亡率明顯增加。6.乏氧條件下乳腺癌細胞中線粒體自噬增加線粒體通過自噬作用被清除的這一個過程稱作線粒體自噬,是維持線粒體穩(wěn)態(tài)的一個重要步驟。通過自噬標記蛋白LC3與線粒體標記物MitoTracker的熒光共定位可以用來評估線粒體自噬。在乏氧條件下,穩(wěn)定表達GFP-LC3的MDA-MB-157細胞中的熒光共定位數(shù)明顯增加。同時,透射電鏡也可以觀察到,在乏氧條件下,MDA-MB-157細胞內(nèi)被自噬小體包裹的線粒體數(shù)量增加。這些結(jié)果表明乏氧可以促進乳腺癌細胞線粒體自噬的發(fā)生,并在受照射后持續(xù)存在。為了進一步驗證這個結(jié)論,我們通過real time PCR檢測了以基因組DNA Rp113作為內(nèi)參的線粒體DNA (mtDNA)標志物mt-Atp6的相對表達量,這一數(shù)據(jù)可以反映細胞內(nèi)線粒體含量。結(jié)果表明,mtDNA含量在乏氧的受照射細胞中明顯減少,并且在干擾了自噬相關(guān)蛋白Atg7阻斷自噬過程后不再出現(xiàn)mtDNA含量的顯著減少。提示在乏氧條件下,線粒體可以通過線粒體自噬過程被清除。7. TAT-ODD-p53可以通過抑制乏氧誘導的線粒體自噬增加乳腺癌細胞放射敏感性在加入TAT-ODD-p53干預后,乏氧條件下MDA-MB-157細胞中熒光共定位數(shù)量減少,并且mtDNA含量增加。而在p53野生型乳腺癌MCF7細胞中,干擾p53的表達可以明顯增加乏氧條件下熒光共定位數(shù)量,并且mtDNA含量減少,這些結(jié)果說明TAT-ODD-p53可以抑制乏氧條件下乳腺癌細胞線粒體自噬的發(fā)生�？寺⌒纬蓪嶒烇@示,干擾Atg7阻斷線粒體自噬進程后,MDA-MB- 157細胞的SER為1.93,放射敏感性增加。而TAT-ODD-p53 處理組乏氧 MDA-MB-157細胞的SER值在Atg7被干擾后由2.26下降到1.27,說明TAT-ODD-p53的增敏作用在線粒體自噬過程被阻斷后明顯減弱,提示TAT-ODD-p53對乏氧乳腺癌細胞的增敏作用至少有一部分是通過抑制線粒體自噬來產(chǎn)生。8. TAT-ODD-p53可以通過Parkin通路抑制線粒體自噬在乏氧MDA-MB-157細胞中干擾Parkin表達后,線粒體自噬的熒光共定位數(shù)量減少,同時mtDNA含量增加,說明被線粒體自噬的清除作用減弱。提示乏氧條件下誘發(fā)了Parkin介導的線粒體自噬。過表達Parkin可以減弱TAT-ODD-p53對乏氧MDA-MB-157細胞線粒體自噬的抑制作用,線粒體含量相應的有所增加。在乏氧MCF7 ceils干擾p53后線粒體自噬顯著增加,而敲除Parkin后p53敲除對線粒體自噬的誘導也顯著減弱。說明在乏氧條件下TAT-ODD-p53可以通過Parkin通路抑制線粒體自噬的發(fā)生。9. TAT-ODD-p53可以在胞質(zhì)中與Parkin結(jié)合抑制其線粒體轉(zhuǎn)位qRT-PCR和western blot實驗顯示p53并沒有影響Parkin的表達水平,而是減少了乏氧乳腺癌細胞中Parkin定位在線粒體上的含量。在TAT-ODD-p53處理后,乏氧MDA-MB-157細胞線粒體上Parkin的蛋白含量明顯減少。而在干擾p53后,乏氧MCF7細胞線粒體上Parkin的蛋白含量明顯增加。并且TAT-ODD片段本身并不能改變Parkin的定位情況。進一步通過免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn),在TAT-ODD-p53處理的乏氧MDA-MB- 157細胞以及p53野生型的MCF7細胞中,p53和Parkin蛋白都可以直接結(jié)合。10. Parkin蛋白介導的線粒體自噬參與TAT-ODD-p53對乏氧乳腺癌細胞的輻射敏感作用在過表達Parkin蛋白后,TAT-ODD-p53對乏氧乳腺癌細胞MDA-MB- 157的輻射增敏作用明顯減弱。而在敲除ATG7抑制線粒體自噬進程后,再過表達Parkin蛋白便不再有增加輻射抵抗的作用。這些結(jié)果提示TAT-ODD-p53對乏氧乳腺癌細胞輻射增敏作用至少有一部分是通過抑制Parkin蛋白介導的線粒體自噬來實現(xiàn)。結(jié)論：1.體內(nèi)外實驗證明TAT-ODD-p53特異穩(wěn)定存在于乏氧乳腺癌細胞中。2.體外、體內(nèi)實驗中證明TAT-ODD-p53可增加乏氧乳腺癌細胞的輻射敏感性。3.TAT-ODD-p53通過抑制線粒體自噬從而增加乏氧乳腺癌細胞的輻射敏感性。4.TAT-ODD-p53通過結(jié)合Parkin蛋白阻斷其線粒體轉(zhuǎn)位從而抑制乏氧誘導的線粒體自噬。5.TAT-ODD-p53可以通過抑制Parkin蛋白介導的線粒體自噬而增加乏氧乳腺癌細胞輻射敏感性。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日報;2011年

9 王樂　沈基飛;我科學家發(fā)現(xiàn)導致乳腺癌耐藥的新標志物[N];科技日報;2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日報;2011年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 柴紅燕;疾病狀態(tài)下CYP4Z1和4A的生物學行為及其藥物干預研究[D];武漢大學;2012年

2 李凱;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白調(diào)控乳腺細胞的分化并影響乳腺癌的預后[D];復旦大學;2014年

3 江一舟;乳腺癌新輔助化療前后基因變異檢測及其功能論證[D];復旦大學;2014年

4 馬邵;酪氨酸去磷酸化增強表皮生長因子受體在乳腺癌治療中靶向性的研究[D];山東大學;2015年

5 姚若斯;精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7誘導乳腺癌細胞發(fā)生表皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)換及轉(zhuǎn)移的作用機制研究[D];東北師范大學;2015年

6 侯培鋒;α-酮戊二酸二甲酯(DM-2KG)上調(diào)缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)誘發(fā)高致瘤性干細胞樣乳腺癌細胞機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2014年

7 李麗麗;分泌蛋白SHON調(diào)控乳腺癌細胞EMT的分子機制研究[D];東北師范大學;2015年

8 陳麗艷;PI3K抑制劑聯(lián)合組蛋白去乙酰化酶抑制劑對乳腺癌協(xié)同殺傷作用的分子機制研究[D];延邊大學;2015年

9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對其生物學行為的影響[D];延邊大學;2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點[D];鄭州大學;2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標的相關(guān)性研究[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

3 靳文;乳腺癌全基因組DNA甲基化修飾的研究[D];內(nèi)蒙古大學;2015年

4 吳坤琳;TLR4/MyD88信號通路對乳腺癌侵襲性影響的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

5 葛廣哲;樹，

本文編號：2035625