本文選題：卵巢癌干細(xì)胞 + 自我更新　； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：研究背景卵巢癌是五大發(fā)病率較高的女性惡性腫瘤之一,婦女的生命和健康受到嚴(yán)重的威脅。由于卵巢癌起病隱匿,大部分患者發(fā)病時(shí)都在晚期,患者的生存率和生存質(zhì)量比較低,迄今為止臨床上對(duì)卵巢癌的治療依然面臨巨大的挑戰(zhàn)。因此,深入闡明卵巢癌致病的分子機(jī)制是提高臨床上卵巢癌診斷和治療的關(guān)鍵。卵巢癌干細(xì)胞(CSCs)是一群具有多能的和胚胎樣的表型,并且具有自我更新和無限增殖能力的細(xì)胞。目前卵巢癌干細(xì)胞方向的學(xué)術(shù)研究越來越受到科研人員的關(guān)注,研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)卵巢癌中卵巢癌干細(xì)胞在卵巢癌發(fā)生發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移、化療耐藥和復(fù)發(fā)中起了重要的作用,因此在臨床上能兼顧卵巢癌干細(xì)胞和普通干細(xì)胞的治療策略才是真正有效的治療。隨著對(duì)于卵巢干細(xì)胞研究的不斷深入,對(duì)卵巢癌干細(xì)胞轉(zhuǎn)移、分化等生物學(xué)特性和分子機(jī)制的進(jìn)一步了解將有助于建立有效的卵巢癌治療方案。因此,深入研究卵巢癌干細(xì)胞具體分子機(jī)制具有重要的意義。近期有研究發(fā)現(xiàn)促炎性細(xì)胞因子和趨化因子介導(dǎo)了眾多腫瘤干細(xì)胞自我更新和分化的作用,因此我們推測卵巢癌干細(xì)胞為了保持其自我更新和分化的能力,可能也產(chǎn)生了大量炎癥因子及其受體。目的探討炎癥因子及其受體對(duì)卵巢癌干細(xì)胞自我更新的影響,同時(shí)進(jìn)一步分析IL-23及其受體介導(dǎo)的卵巢癌干細(xì)胞自我更新的生物學(xué)特性及具體分子機(jī)制,從而為探尋新的卵巢癌治療分子靶向物質(zhì)提供充分的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1.應(yīng)用RT2Profiler?PCR array比較卵巢癌干細(xì)胞與非卵巢癌干細(xì)胞之間炎癥相關(guān)因子的表達(dá)差異。并運(yùn)用western blotting、ELISA、Real-time PCR、免疫熒光和流式細(xì)胞儀檢測等方法對(duì)PCR array的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。2.應(yīng)用球體形成實(shí)驗(yàn)分析IL-23對(duì)卵巢癌干細(xì)胞樣細(xì)胞自我更新特性的影響。球體形成實(shí)驗(yàn)中我們采用三種不同的方法降低IL-23的水平并且觀察球體形成能力的變化。這三種不同方法分別是添加不同溶度的IL-23中和抗體和不同溶度的阿吡莫德(STA-5326)及轉(zhuǎn)染sh-IL-23p19基因慢病毒載體。3.應(yīng)用Western blotting和免疫熒光檢測IL-23抑制劑(STA-5326)處理和轉(zhuǎn)染IL-23p19干擾RNA的卵巢癌干細(xì)胞中卵巢癌干細(xì)胞標(biāo)志物Nanog,Oct4 and Sox2的表達(dá)。4.裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)檢測IL-23對(duì)卵巢癌CSCs成瘤能力的影響,同時(shí)統(tǒng)計(jì)裸鼠的生存率和測量腫瘤的體積和重量。成瘤實(shí)驗(yàn)中裸鼠分別皮下注射sh-IL-23p19基因轉(zhuǎn)染和IL-23(ST-5326)處理的卵巢癌CSCs及各對(duì)照組。5.應(yīng)用western blotting和免疫熒光檢測IL-23抑制劑(STA-5326)處理和sh-IL-23p19基因轉(zhuǎn)染的卵巢癌干細(xì)胞中STAT3、磷酸化STAT3和P65(NF-κB活性單元)的表達(dá)情況。此外,于sh-IL-23p19基因轉(zhuǎn)染的卵巢癌干細(xì)胞中添加不同溶度的人重組IL-23(rh IL-23)并且采用葫蘆素(STAT3抑制劑)和PDTC(NF-κB抑制劑)處理后,成球?qū)嶒?yàn)檢測球體的數(shù)量。6.應(yīng)用Real-time PCR檢測惡性卵巢癌患者組織標(biāo)本中IL-23、CD133、Nanog,Oct4 and和Sox2的表達(dá)水平。HE染色進(jìn)一步確定組織標(biāo)本的分化程度。結(jié)果1.RT2Profiler?PCR array結(jié)果發(fā)現(xiàn)與CD133-非卵巢癌干細(xì)胞相比較CD133+卵巢癌干細(xì)胞某些炎癥因子及受體高表達(dá),例如IL-1、IL-8 IL-15、IL-23及IL-23R。并且通過real-time PCR、ELISA、免疫熒光、western blotting和流式細(xì)胞儀檢測的方法得到證實(shí)。2.成球?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示卵巢癌干細(xì)胞中添加不同溶度的IL-23中和抗體和不同溶度的阿吡莫德(STA-5326)及轉(zhuǎn)染IL-23p19干擾RNA慢病毒載體均能降低干細(xì)胞“球體”的數(shù)量,其中添加不同溶度的阿吡莫德(STA-5326)及轉(zhuǎn)染IL-23p19干擾RNA慢病毒載體呈劑量依賴效應(yīng)。同時(shí)三種不同的方法減弱IL-23的表達(dá)水平后卵巢癌干細(xì)胞“球體”的體積也相應(yīng)減小。3.Western blotting和免疫熒光檢測結(jié)果顯示IL-23抑制劑(STA-5326)處理或IL-23p19干擾RNA轉(zhuǎn)染的卵巢癌干細(xì)胞中卵巢癌干細(xì)胞標(biāo)志物Nanog,Oct4 and Sox2的表達(dá)水平均降低。4.裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示皮下注射轉(zhuǎn)染IL-23p19干擾RNA的卵巢癌干細(xì)胞的裸鼠組能顯著降低老鼠的發(fā)病率并且能提高其生存率,而皮下注射采用阿吡莫德(STA-5326)處理的卵巢癌干細(xì)胞的裸鼠組也能降低老鼠的發(fā)病率并且腫瘤的重量也降低,但是并不能提高老鼠的生存率。5.Western blotting和免疫熒光檢測結(jié)果顯示IL-23抑制劑(STA-5326)處理和IL-23p19干擾RNA轉(zhuǎn)染的卵巢癌干細(xì)胞中STAT3、磷酸化STAT3和P65(NF-κB活性單元)的表達(dá)水平均降低,并且磷酸化STAT3的表達(dá)水平與STA-5326呈劑量依賴。此外,于IL-23p19干擾RNA轉(zhuǎn)染的卵巢癌干細(xì)胞中添加不同溶度的人重組IL-23(rh IL-23)和葫蘆素(STAT3抑制劑)或PDTC(NF-κB抑制劑),卵巢癌干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)顯示加入葫蘆素(STAT3抑制劑)及PDTC(NF-κB抑制劑)后細(xì)胞成球數(shù)量顯著降低。6.惡性卵巢癌患者組織標(biāo)本中Real-time PCR檢測和HE染色結(jié)果顯示高表達(dá)IL-23p19的卵巢癌組織標(biāo)本中表現(xiàn)出低分化狀態(tài),并且RNA水平中IL-23p19的表達(dá)與CD133、Nanog、Oct4呈正相關(guān)。結(jié)論1.CD133+卵巢癌干細(xì)胞同時(shí)高表達(dá)炎癥因子IL-23及受體。2.體外實(shí)驗(yàn)顯示IL-23能促進(jìn)CD133+卵巢癌干細(xì)胞的自我更新能力并且在維持干細(xì)胞標(biāo)志物的穩(wěn)定表達(dá)上具有重要作用。3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示IL-23能維持CD133+卵巢癌干細(xì)胞的致瘤潛能。4.IL-23能通過激活STAT3和NF-κB信號(hào)通路能介導(dǎo)CD133+卵巢癌干細(xì)胞的自我更新和腫瘤的形成。5.人體卵巢癌組織標(biāo)本中,IL-23高表達(dá)者表現(xiàn)出低分化的組織狀態(tài)并且和干細(xì)胞標(biāo)志物CD133,Nanog和Oct4的表達(dá)水平正相關(guān)。
[Abstract]:Ovarian cancer stem cells ( CSCs ) are the key to the diagnosis and treatment of ovarian cancer . The results showed that IL - 23 and IL - 23p19 - interfering RNA - transfected ovarian cancer stem cells could significantly reduce the incidence of ovarian cancer and decrease the tumor weight . Conclusion : IL - 23 can promote the self - renewal ability of CD133 + ovarian cancer stem cells and increase the survival rate .
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31

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本文編號(hào)：2026303