本文選題：骨肉瘤 + Livin基因　； 參考：《中國腫瘤生物治療雜志》2017年12期

【摘要】：目的:研究凋亡抑制蛋白基因Livin在逆轉(zhuǎn)骨肉瘤耐藥中的作用。方法:應(yīng)用多柔比星逐步誘導(dǎo)法誘導(dǎo)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞建立耐藥細(xì)胞株,MTT實(shí)驗(yàn)檢測耐藥細(xì)胞株的耐藥指數(shù),Western blotting法檢測MG-63細(xì)胞和耐藥細(xì)胞中Livin蛋白表達(dá)的差異。構(gòu)建Livin shRNA真核表達(dá)載體,應(yīng)用LipofectmineTM2000轉(zhuǎn)染至耐藥骨肉瘤細(xì)胞中,Real-time PCR和Western blotting分別檢測Livin shRNA轉(zhuǎn)染前后MG-63耐藥細(xì)胞中Livin基因和蛋白表達(dá)的變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡的變化,MTT法檢測對多柔比星化療敏感性的變化。結(jié)果:成功構(gòu)建重組質(zhì)粒p Silencer3.1-H1 neo-Livin si。誘導(dǎo)的耐藥細(xì)胞MG-63/R對多柔比星的耐藥指數(shù)為81.32±5.33。Livin shRNA可抑制MG-63細(xì)胞中Livin基因和蛋白表達(dá),明顯低于空白對照組和非特異性轉(zhuǎn)染組(分別下調(diào)72%和69%,P0.05)。特異性轉(zhuǎn)染Livin shRNA組MG-63/R細(xì)胞的凋亡率顯著高于未轉(zhuǎn)染組和非特異性轉(zhuǎn)染組[(22.4±3.2)%vs(4.2±1.1)%、(4.7±0.6)%,P0.05]。3組細(xì)胞在加入多柔比星后增殖均受到不同程度的抑制,且呈明顯的時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系,但特異性轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的存活率均顯著低于其他兩組(P0.05)。結(jié)論:應(yīng)用RNA干擾技術(shù)下調(diào)Livin的基因表達(dá)可有效促進(jìn)耐藥MG-63骨肉瘤細(xì)胞的凋亡,從而增加其對化療藥物的敏感性。
[Abstract]:Aim: to study the role of apoptosis inhibitor gene Livin in reversing drug resistance in osteosarcoma. Methods: human osteosarcoma MG-63 cells were induced by doxorubicin step by step to establish a drug-resistant cell line. MTT assay was used to detect the difference of Livin protein expression between MG-63 cells and drug-resistant cells by Western blotting assay. Livin shRNA eukaryotic expression vector was constructed. Real-time PCR and Western blotting were used to detect the expression of Livin gene and protein before and after transfection into drug-resistant osteosarcoma cells by Lipofectmine TM2000. Apoptosis was detected by flow cytometry and the sensitivity to doxorubicin was detected by MTT assay. Results: the recombinant plasmid pSilencer3.1-H1 neo-Livin si. was successfully constructed. The resistance index of MG-63 / R to doxorubicin was 81.32 鹵5.33. Livin shRNA inhibited the expression of Livin gene and protein in MG-63 cells, which was significantly lower than that in control group and non-specific transfection group. The apoptosis rate of MG-63 / R cells in specific transfection group was significantly higher than that in non-transfection group and non-specific transfection group [22.4 鹵3.2)%vs(4.2 鹵1.1] .3 cells were inhibited by doxorubicin. But the survival rate of the cells in the specific transfection group was significantly lower than that in the other two groups. Conclusion: down-regulation of Livin gene expression by RNA interference can effectively promote apoptosis of drug-resistant MG-63 osteosarcoma cells and increase its sensitivity to chemotherapeutic drugs.
【作者單位】： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院骨科;江西省都昌縣中醫(yī)院骨科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81660443) 江西省衛(wèi)計(jì)委科技項(xiàng)目資助(No.20155278)~~
【分類號】：R738.1

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9 朱U，

本文編號：2026179