本文選題：miRNA-148b + miRNA-152　； 參考：《青島大學》2016年博士論文

【摘要】：目的:研究miRNA-148b和miRNA-152在腎細胞癌(renal cell carcinoma,RCC)中的表達情況及其功能,并進一步討論其可能機制,以期為腎細胞癌的早期診斷和治療提供新的思路。方法:本研究應用實時定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT PCR)檢測在40例腎細胞癌及癌旁正常腎組織中miRNA-148b和miRNA-152的表達情況,研究其與臨床分期、病理分級之間的關系。同時,應用合成的miRNA-148b和miRNA-152模擬物轉(zhuǎn)染786-O及SN12-PM6細胞株,采用MTT比色法、凋亡檢測、克隆形成檢測、遷移侵襲檢測,觀察miRNA-148b和miRNA-152過表達對腎癌細胞功能的影響,研究其對腎癌細胞的增殖、凋亡、集落形成能力和侵襲遷移能力等生物學性狀的影響。繼之用生物信息學方法預測miRNA-148b和miRNA-152可能的靶基因,并用Western blot法檢測miRNA-148b和miRNA-152轉(zhuǎn)染的786-O及SN12-PM6腎癌細胞中KIT、AKT、m TOR、Bcl-2、Bcl-2L11等蛋白的表達情況。結果:實時定量PCR結果發(fā)現(xiàn),與配對的癌旁正常腎組織相比,腎細胞癌組織中的miRNA-148b和miRNA-152的表達均下降,均有顯著統(tǒng)計學差異(P0.01)。對不同的病理分級,高分化組(Fuhrman分級Ⅰ、Ⅱ級)的miRNA-148b和miRNA-152的相對表達含量分別與中低分化組(Fuhrman分級Ⅲ、Ⅳ級)的相對表達含量相比,均沒有顯著統(tǒng)計學差異(P0.05)。在不同的臨床分期腎癌組織樣本中,I期腎細胞癌組織中miRNA-148b和miRNA-152的相對含量與II~III期腎細胞癌組織中各相對自的含量相比,也均未見顯著統(tǒng)計學差異(P0.05)。與對照組相比,在786-O和SN12-PM6細胞株,顯示miR-148b和miR-152的過表達抑制細胞增殖效果明顯,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在786-O細胞株,轉(zhuǎn)染48h和72 h后,miR-152和miR-148b對細胞凋亡有明顯誘導作用,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在SN12-PM6細胞株,miR-152和miR-148b+miR-152在轉(zhuǎn)染48 h和72 h后誘導了細胞凋亡,miR-152在轉(zhuǎn)染后72 h對細胞凋亡有顯著誘導作用(P0.05)。集落形成能力結果顯示:在786-O和SN12-PM6細胞株腎癌細胞,轉(zhuǎn)染miR-148b組細胞集落形成個數(shù)均明顯低于對照組,兩者具有顯著性差異(P0.05);轉(zhuǎn)染miR-152組細胞集落形成個數(shù)也明顯低于對照組,兩者具有顯著差異(P0.05)。Transwell小室侵襲實驗顯示,兩個細胞株中轉(zhuǎn)染miR-148b組和miR-152組穿過膜侵襲的細胞數(shù)均明顯低于陰性對照組,有顯著統(tǒng)計學差異(P均0.01)。Transwell小室遷移實驗表明,轉(zhuǎn)染miR-148b組和miR-152組細胞穿過膜遷移的細胞數(shù)也均明顯低于陰性對照組,有顯著統(tǒng)計學差異(P均0.01)生物信息搜索顯示KIT 3‘UTR第1650-1656位堿基與miR-148b和miR-152的種子序列互補。因此,我們推測KIT可能是miR-148b和miR-152的靶基因之一。Western blot結果證實,在786-O細胞株,轉(zhuǎn)染24 h后miR-148b和miR-152能夠降低p-KIT和KIT的整體表達。在所有觀察的時間點,miR-148b和miR-152對p-AKT和AKT蛋白表達水平均有下調(diào)作用,而對下游信號通路的p-m TOR以及總m TOR的表達幾乎沒有影響。在所有時間點miR-148b和miR-152均可下調(diào)Bcl-2表達,但是對bcl-2L11蛋白表達無顯著作用。在SN12-PM6細胞株,在所有觀察的時間點,miR-148b和miR-152均可降低p-KIT的表達水平。在miR-148b和miR-152轉(zhuǎn)染24h后對KIT蛋白的表達無明顯影響,轉(zhuǎn)染48h和72h后則明顯降低了KIT的表達水平。miR-148b和miR-152轉(zhuǎn)染后24 h下調(diào)了AKT和p-AKT的表達水平,而miR-152對AKT表達的下調(diào)作用更為顯著。miR-148b和miR-152對p-m TOR以及總m TOR的表達幾乎沒有影響。在miR-148b和miR-152轉(zhuǎn)染48和72 h后Bcl-2的表達減少,而對bcl-2L11蛋白表達無顯著作用。結論:1.miR-148b和miR-152在人腎細胞癌組織中的表達水平較癌旁正常腎組織明顯降低,但與腎細胞癌的病理分級及臨床分期可能無明顯相關性。2.miR-148b和miR-152對786-O和SN12-PM6腎癌細胞有抑制增殖和促進凋亡作用,并能抑制786-O和SN12-PM6腎癌細胞的集落形成能力和侵襲遷移能力。3.KIT為miR-148b和miR-152在腎細胞癌中的靶基因之一,miR-148b和miR-152可能是通過對KIT、AKT和Bcl-2表達的調(diào)控抑制腎細胞癌的發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:鐩殑:鐮旂┒miRNA-148b鍜宮iRNA-152鍦ㄨ偩緇嗚優(yōu)鐧，

本文編號：2025600