本文選題：miRNA-148b + miRNA-152　； 參考：《青島大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的:研究miRNA-148b和miRNA-152在腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma,RCC)中的表達(dá)情況及其功能,并進(jìn)一步討論其可能機(jī)制,以期為腎細(xì)胞癌的早期診斷和治療提供新的思路。方法:本研究應(yīng)用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT PCR)檢測在40例腎細(xì)胞癌及癌旁正常腎組織中miRNA-148b和miRNA-152的表達(dá)情況,研究其與臨床分期、病理分級(jí)之間的關(guān)系。同時(shí),應(yīng)用合成的miRNA-148b和miRNA-152模擬物轉(zhuǎn)染786-O及SN12-PM6細(xì)胞株,采用MTT比色法、凋亡檢測、克隆形成檢測、遷移侵襲檢測,觀察miRNA-148b和miRNA-152過表達(dá)對(duì)腎癌細(xì)胞功能的影響,研究其對(duì)腎癌細(xì)胞的增殖、凋亡、集落形成能力和侵襲遷移能力等生物學(xué)性狀的影響。繼之用生物信息學(xué)方法預(yù)測miRNA-148b和miRNA-152可能的靶基因,并用Western blot法檢測miRNA-148b和miRNA-152轉(zhuǎn)染的786-O及SN12-PM6腎癌細(xì)胞中KIT、AKT、m TOR、Bcl-2、Bcl-2L11等蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),與配對(duì)的癌旁正常腎組織相比,腎細(xì)胞癌組織中的miRNA-148b和miRNA-152的表達(dá)均下降,均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。對(duì)不同的病理分級(jí),高分化組(Fuhrman分級(jí)Ⅰ、Ⅱ級(jí))的miRNA-148b和miRNA-152的相對(duì)表達(dá)含量分別與中低分化組(Fuhrman分級(jí)Ⅲ、Ⅳ級(jí))的相對(duì)表達(dá)含量相比,均沒有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。在不同的臨床分期腎癌組織樣本中,I期腎細(xì)胞癌組織中miRNA-148b和miRNA-152的相對(duì)含量與II~III期腎細(xì)胞癌組織中各相對(duì)自的含量相比,也均未見顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。與對(duì)照組相比,在786-O和SN12-PM6細(xì)胞株,顯示miR-148b和miR-152的過表達(dá)抑制細(xì)胞增殖效果明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在786-O細(xì)胞株,轉(zhuǎn)染48h和72 h后,miR-152和miR-148b對(duì)細(xì)胞凋亡有明顯誘導(dǎo)作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在SN12-PM6細(xì)胞株,miR-152和miR-148b+miR-152在轉(zhuǎn)染48 h和72 h后誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡,miR-152在轉(zhuǎn)染后72 h對(duì)細(xì)胞凋亡有顯著誘導(dǎo)作用(P0.05)。集落形成能力結(jié)果顯示:在786-O和SN12-PM6細(xì)胞株腎癌細(xì)胞,轉(zhuǎn)染miR-148b組細(xì)胞集落形成個(gè)數(shù)均明顯低于對(duì)照組,兩者具有顯著性差異(P0.05);轉(zhuǎn)染miR-152組細(xì)胞集落形成個(gè)數(shù)也明顯低于對(duì)照組,兩者具有顯著差異(P0.05)。Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,兩個(gè)細(xì)胞株中轉(zhuǎn)染miR-148b組和miR-152組穿過膜侵襲的細(xì)胞數(shù)均明顯低于陰性對(duì)照組,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.01)。Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)表明,轉(zhuǎn)染miR-148b組和miR-152組細(xì)胞穿過膜遷移的細(xì)胞數(shù)也均明顯低于陰性對(duì)照組,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.01)生物信息搜索顯示KIT 3‘UTR第1650-1656位堿基與miR-148b和miR-152的種子序列互補(bǔ)。因此,我們推測KIT可能是miR-148b和miR-152的靶基因之一。Western blot結(jié)果證實(shí),在786-O細(xì)胞株,轉(zhuǎn)染24 h后miR-148b和miR-152能夠降低p-KIT和KIT的整體表達(dá)。在所有觀察的時(shí)間點(diǎn),miR-148b和miR-152對(duì)p-AKT和AKT蛋白表達(dá)水平均有下調(diào)作用,而對(duì)下游信號(hào)通路的p-m TOR以及總m TOR的表達(dá)幾乎沒有影響。在所有時(shí)間點(diǎn)miR-148b和miR-152均可下調(diào)Bcl-2表達(dá),但是對(duì)bcl-2L11蛋白表達(dá)無顯著作用。在SN12-PM6細(xì)胞株,在所有觀察的時(shí)間點(diǎn),miR-148b和miR-152均可降低p-KIT的表達(dá)水平。在miR-148b和miR-152轉(zhuǎn)染24h后對(duì)KIT蛋白的表達(dá)無明顯影響,轉(zhuǎn)染48h和72h后則明顯降低了KIT的表達(dá)水平。miR-148b和miR-152轉(zhuǎn)染后24 h下調(diào)了AKT和p-AKT的表達(dá)水平,而miR-152對(duì)AKT表達(dá)的下調(diào)作用更為顯著。miR-148b和miR-152對(duì)p-m TOR以及總m TOR的表達(dá)幾乎沒有影響。在miR-148b和miR-152轉(zhuǎn)染48和72 h后Bcl-2的表達(dá)減少,而對(duì)bcl-2L11蛋白表達(dá)無顯著作用。結(jié)論:1.miR-148b和miR-152在人腎細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平較癌旁正常腎組織明顯降低,但與腎細(xì)胞癌的病理分級(jí)及臨床分期可能無明顯相關(guān)性。2.miR-148b和miR-152對(duì)786-O和SN12-PM6腎癌細(xì)胞有抑制增殖和促進(jìn)凋亡作用,并能抑制786-O和SN12-PM6腎癌細(xì)胞的集落形成能力和侵襲遷移能力。3.KIT為miR-148b和miR-152在腎細(xì)胞癌中的靶基因之一,miR-148b和miR-152可能是通過對(duì)KIT、AKT和Bcl-2表達(dá)的調(diào)控抑制腎細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:鐩殑:鐮旂┒miRNA-148b鍜宮iRNA-152鍦ㄨ偩緇嗚優(yōu)鐧，

本文編號(hào)：2025600