發(fā)布時間：2018-06-16 01:49

  本文選題：GnRHR + EGFR　； 參考：《蘇州大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的:檢測GnRHR在胃癌組織中的表達(dá)情況,分析其與胃癌患者預(yù)后的相關(guān)性,探討GnRHR在胃癌發(fā)生發(fā)展、分化及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)分子機(jī)制。方法:應(yīng)用RT-PCR方法檢測48例術(shù)前未接受任何治療的胃癌患者病理標(biāo)本中腫瘤和腫瘤旁組織內(nèi)促性腺激素釋放激素受體(GnRHR)mRNA的表達(dá);免疫組化分析腫瘤組織及腫瘤旁組織中GnRHR蛋白的表達(dá)。通過卡方檢驗(yàn)分析GnRHR表達(dá)與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)的相關(guān)性,采用Kaplan Meier和秩檢驗(yàn)進(jìn)行生存分析,探討GnRHR表達(dá)對胃癌患者預(yù)后的影響。按腫瘤分化程度將48例胃癌患者腫瘤組織標(biāo)本分為分化差、分化良好兩組,應(yīng)用免疫組織化SP及原位定量法,對48例不同分化程度的胃癌組織中GnRHR、表皮生長因子受體(EGFR)的表達(dá)進(jìn)行檢測及半定量分析。Western blot檢測三種不同分化程度胃癌細(xì)胞中GnRHR表達(dá)情況;采用不同濃度(1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6mol/l)GnRH激動劑醋酸曲普瑞林作用于三種不同分化程度的胃癌細(xì)胞株,MTT實(shí)驗(yàn)觀察其對胃癌細(xì)胞增殖的影響。Western blot檢測GnRHR及分化相關(guān)蛋白表達(dá)情況。采用transwell小室檢測GnRH激動劑醋酸曲普瑞林激活胃癌細(xì)胞GnRHR后細(xì)胞侵襲和遷移能力;Western blot檢測GnRHR激活后胃癌細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白E-cad、vimentin及snail的表達(dá)情況。采用酪氨酸磷酸酶抑制劑正釩酸鈉激活EGFR磷酸化后MTT檢測細(xì)胞增殖情況、western blot檢測細(xì)胞增殖分化相關(guān)蛋白及EMT相關(guān)蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:為了研究GnRHR在胃癌中的作用,我們通過RT-PCR及免疫組化分別檢測48例胃癌組織及相應(yīng)的癌旁組織中GnRHR mRNA及GnRHR蛋白表達(dá),結(jié)果顯示GnRHR mRNA在胃癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁組織(-10.06±1.28 vs-12.43±1.33,p0.05)。GnRHR蛋白主要定位在細(xì)胞漿,在48例胃癌患者中,超過一半胃癌組織中GnRHR染色陰性(52.08%,25/48)。為了探討GnRHR與胃癌患者臨床參數(shù)及預(yù)后的相關(guān)性,我們收集48例胃癌患者臨床及隨訪資料,采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析發(fā)現(xiàn):GnRHR mRNA表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及TNM分期有關(guān);GnRHR mRNA表達(dá)與患者總生存率相關(guān),并且GnRHR mRNA低表達(dá)(-ΔCt-10.06)患者總生存率較差(p=0.003;HR=0.42,95%CI:0.22-0.87)。按腫瘤分化程度將48例胃癌患者腫瘤組織標(biāo)本分為分化差、分化良好兩組,各種不同分化的癌組織均顯示不同程度的GnRHR和EGFR陽性免疫反應(yīng),GnRHR表達(dá)陽性23例(47.92%),EGFR表達(dá)陽性26例(54.16%),原位定量顯示GnRHR的表達(dá)分化良好20例、分化差3例,隨著組織分化程度增高而增高,EGFR的表達(dá)分化良好13例、分化差13例,隨著組織分化程度增高而降低(P0.05)。相關(guān)性分析顯示:不同分化程度胃癌組織中GnRHR與EGFR表達(dá)成負(fù)相關(guān)并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;為了進(jìn)一步探討GnRHR與EGFR的相關(guān)性以及GnRHR在胃癌的發(fā)生發(fā)展、分化及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)分子機(jī)制,我們通過細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)從細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移三方面進(jìn)行研究。結(jié)果顯示:不同濃度醋酸曲普瑞林作用胃癌細(xì)胞不同時間抑制胃癌細(xì)胞增殖,western blot結(jié)果顯示GnRHR通過EGFR-ERK通路抑制胃癌細(xì)胞增殖;此外,GnRHR在不同分化程度胃癌細(xì)胞中表達(dá)不同,分化程度越高,GnRHR表達(dá)越高,進(jìn)一步western blot結(jié)果顯示GnRHR通過EGFR-CDK1通路調(diào)控胃癌細(xì)胞分化;胃癌組織中GnRHR與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān),為了從細(xì)胞水平研究GnRHR對胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響,采用醋酸曲普瑞林誘導(dǎo)GnRHR表達(dá)后transwell小室檢測胃癌細(xì)胞遷移及侵襲能力,結(jié)果顯示:醋酸曲普瑞林作用于胃癌細(xì)胞后,透膜細(xì)胞數(shù)明顯減少。提示誘導(dǎo)GnRHR表達(dá)抑制胃癌細(xì)胞遷移及侵襲能力。進(jìn)一步western blot結(jié)果顯示GnRHR抑制磷酸化EGFR水平,進(jìn)而抑制vimentin及snail蛋白水平,即GnRHR通過EGFR-EMT通路調(diào)控胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。結(jié)論:GnRHR在胃癌組織中表達(dá),其表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移、TNM分期及患者預(yù)后有關(guān)。不同分化程度的胃癌組織中GnRHR及EGFR表達(dá)成一定的負(fù)相關(guān)。GnRHR通過調(diào)控EGFR在胃癌的發(fā)生發(fā)展、分化及侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。
[Abstract]:鐩殑:媯，

本文編號：2024669