發(fā)布時(shí)間：2018-06-15 04:03

  本文選題：β-細(xì)辛醚 + 有氧糖酵解��； 參考：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的:觀察β-細(xì)辛醚對(duì)不同分化程度胃癌細(xì)胞株體外化療增敏作用;同時(shí)探討β-細(xì)辛醚對(duì)胃癌PDKs表達(dá)的調(diào)控與化療增敏機(jī)制的相關(guān)性。研究方法:·1、采用MTT法觀察β-細(xì)辛醚、順鉑單獨(dú)與聯(lián)合用藥對(duì)多種胃癌細(xì)胞株的增殖抑制作用,利用中效原理計(jì)算合用指數(shù)來(lái)判定β-細(xì)辛醚和順鉑的協(xié)同增敏作用;使用Real-time PCR方法檢測(cè)β-細(xì)辛醚、順鉑單獨(dú)與聯(lián)合作用人胃癌細(xì)胞后對(duì)化療藥物相關(guān)基因ERCC1、BRCA1表達(dá)的改變。2、使用乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒檢測(cè)不同濃度β-細(xì)辛醚(120 μg·mnL-1,60μg·mL-1,30μg·mL-1,15μg·ML-1)以及在 Cocl2誘導(dǎo)(200mM24h)的缺氧環(huán)境和 H202(100mM1h)誘導(dǎo)的有氧環(huán)境下對(duì)胃癌細(xì)胞乳酸脫氫酶生成量的影響,以明確β-細(xì)辛醚對(duì)PDK1活性的影響。3、運(yùn)用AnnexinV/PI雙染法研究在Coc12誘導(dǎo)(200mM 24h)的缺氧環(huán)境和H202(1OOmM 1h)誘導(dǎo)的有氧環(huán)境下β-細(xì)辛醚對(duì)不同分化程度的人胃癌細(xì)胞株凋亡的誘導(dǎo)作用;同時(shí)利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)人胃癌細(xì)胞株的周期阻滯效應(yīng)。4、使用RT-PCR檢測(cè)β-細(xì)辛醚對(duì)胃癌細(xì)胞有氧糖酵解相關(guān)基因PDK1、PDK4、HIF-1α、c-myc基因的影響。5、運(yùn)用we3tern blot檢測(cè)β-細(xì)辛醚對(duì)有氧糖酵解相關(guān)蛋白PDK1、0-PDK1、PDK4、HIF-1 α、STAT5、p-STAT5蛋白表達(dá)的影響。研究結(jié)果:1、β-細(xì)辛醚作用于不同分化水平的胃癌細(xì)胞株對(duì)化療藥物順鉑均有化療增敏作用,其中對(duì)MGC-803細(xì)胞株的化療增敏效果最佳;3-細(xì)辛醚可以下調(diào)ERCC1、BRCA1基因表達(dá)。2、不同濃度的β-細(xì)辛醚作用于胃癌細(xì)胞MGC-803、SGC-7901、MKN-28后,細(xì)胞的乳酸脫氫酶含量受到抑制,且呈濃度相關(guān);不同分化程度胃癌細(xì)胞之間沒(méi)有相關(guān)性,缺氧條件下,β-細(xì)辛醚作用后的胃癌細(xì)胞LDH表達(dá)量明顯下降,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、β-細(xì)辛醚在缺氧及有氧條件下均可以誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞株MGC-803、SGC-7901、MKN-28凋亡,能阻滯胃癌細(xì)胞于G2/M期,且β-細(xì)辛醚作用后呈現(xiàn)明顯亞二倍體峰,提示其有誘導(dǎo)凋亡的作用。4、β-細(xì)辛醚在缺氧條件下調(diào)胃癌細(xì)胞株P(guān)DK1、PDK4、HIF-1 α、c-myc基因的表達(dá)。5、β-細(xì)辛醚在缺氧條件下可以抑制胃癌細(xì)胞株P(guān)DK1、p-PDK1、PDK4、HIF-1α、STAT5、p-STAT5蛋白表達(dá)的影響。研究結(jié)論:1、β-細(xì)辛醚對(duì)不同分化水平的胃癌細(xì)胞株均有增殖抑制的作用,且呈濃度相關(guān)性;β-細(xì)辛醚在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)順鉑化療有化療增敏的作用,其化療增敏作用可能與抑制ERCC1、BRCA1基因表達(dá)有關(guān)。2、β-細(xì)辛醚可以降低胃癌細(xì)胞乳酸脫氫酶生成量,呈濃度依賴(lài)性;β-細(xì)辛醚能降低缺氧條件下胃癌細(xì)胞株的乳酸脫氫酶含量,作用類(lèi)似于H2O2組,提示其抑制腫瘤機(jī)制可能與抑制腫瘤細(xì)胞有氧糖酵解相關(guān)。3、缺氧條件下β-細(xì)辛醚可以誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞株凋亡,將阻滯胃癌細(xì)胞于細(xì)胞周期的G2/M期,同時(shí)實(shí)驗(yàn)表明β-細(xì)辛醚作用于不同分化程度胃癌后出現(xiàn)明顯亞二倍體峰,提示其有誘導(dǎo)凋亡的作用。4、β-細(xì)辛醚能有誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡,其作用可能與抑制PDK1、PDK4、HIF-1 α、c-myc基因的表達(dá),下調(diào)PDK1、p-PDK1、PDK4、HIF-1α、STAT5、p-STAT5蛋白表達(dá)有關(guān)。上述基因及蛋白與糖酵解相關(guān),進(jìn)一步提示β-細(xì)辛醚抑制胃癌細(xì)胞增殖,與順鉑化療增敏作用可能與其抑制腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中有氧糖酵解相關(guān)。
[Abstract]:The effects of 尾 - Asarum on the proliferation of gastric cancer cell lines were studied by MTT assay . The effects of 尾 - Asarum on the expression of PDK1 , PDK4 , PDK4 , HIF - 1偽 , STAT5 and p - STAT5 in gastric cancer cells were determined by MTT assay . The expression of PDK1 , PDK4 , PDK4 , HIF - 1偽 , STAT5 , p - STAT5 protein in gastric cancer cell lines could be inhibited by 尾 - Asarum . The results showed that 尾 - asocine could inhibit the expression of PDK1 , PDK4 , PDK4 , HIF - 1偽 , STAT5 and p - STAT5 in gastric cancer cells .
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2020538