本文選題：黏蛋白-1 + 血管內(nèi)皮細胞生長因子　； 參考：《鄭州大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的黏蛋白-1(Mucin 1,MUC1)是一種跨膜的糖蛋白,MUC1蛋白在多種癌癥組織中都異常高表達,其中包括非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。已知新生血管的形成在腫瘤的發(fā)生、生長、浸潤和轉(zhuǎn)移四個過程中都具有非常重要的意義,腫瘤組織中內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是主要的促進新生血管形成機制。本課題旨在研究MUC1和VEGF在NSCLC組織中表達的相關(guān)性,進一步研究過表達MUC1基因?qū)SCLC細胞生物學(xué)特征影響及其分子機制。方法定量PCR檢測MUC1和VEGF m RNA在NSCLC癌組織和癌旁組織中的表達;免疫組化法檢測MUC1和VEGF在100例NSCLC組織中的表達,分析二者的相關(guān)性。通過在A549和NCI-H460細胞中轉(zhuǎn)染MUC1基因進而觀察過表達MUC1對NSCLC促血管生成的影響。逆轉(zhuǎn)錄PCR和蛋白質(zhì)印跡法用于檢測轉(zhuǎn)染細胞中MUC1 m RNA和蛋白表達的情況。收集轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)上清,并與人靜脈內(nèi)皮細胞孵育,應(yīng)用內(nèi)皮細胞遷移實驗和血管形成實驗研究過表達MUC1對于NSCLC細胞促內(nèi)皮細胞遷移和形成血管樣結(jié)構(gòu)的能力的影響。通過MTT實驗分析過表達MUC1對NSCLC細胞增殖的影響。應(yīng)用克隆形成實驗分析分析MUC1基因過表達后NSCLC細胞克隆形成能力的影響。MUC1基因過表達后應(yīng)用細胞粘附實驗檢測NSCLC細胞粘附于纖維連接蛋白的能力;應(yīng)用碘化丙啶染色法結(jié)合流式細胞術(shù)檢測NSCLC細胞細胞周期分布情況。酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)研究轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)上清中的血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表達。通過慢病毒載體系統(tǒng)建立穩(wěn)定MUC1基因過表達的A549細胞,通過MTT實驗和裸鼠荷瘤實驗分析MUC1對細胞增殖的影響。采用蛋白質(zhì)印跡法檢測過表達MUC1基因?qū)偟囊约傲姿峄牡鞍准っ窧(PKB或AKT)、胞外信號調(diào)控激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)信號通路、p38以及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)表達的影響。同時,應(yīng)用ERK和AKT抑制劑PD9859和SH-5預(yù)處理NSCLC細胞,觀察抑制ERK或者AKT的活化對血管形成的影響。結(jié)果MUC1和VEGF m RNA在NSCLC癌組織中的表達明顯高于癌旁組織。MUC1的表達與NSCLC腫瘤大小、組織學(xué)類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期都有統(tǒng)計學(xué)意義,但其陽性率與患者的年齡、性別、是否吸煙之間無統(tǒng)計學(xué)意義。VEGF的表達與NSCLC腫瘤大小、組織學(xué)類型、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和都有統(tǒng)計學(xué)意義,但其陽性率與患者的年齡、分化程度、是否吸煙、TNM分期之間無統(tǒng)計學(xué)意義。MUC1與VEGF的表達呈顯著正相關(guān)(r=0.380,p0.01)。RT-PCR結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染MUC1基因?qū)е翧549和NCI-H460細胞MUC1m RNA表達增強。蛋白質(zhì)印跡法顯示,在轉(zhuǎn)染MUC1基因的A549和NCI-H460細胞中MUC1蛋白的表達量顯著增加。同時,RT-PCR和酶聯(lián)免疫吸附試驗則顯示,在A549和NCI-H460細胞中過表達MUC1能夠顯著增強VEGF的表達和分泌。在A549和NCI-H460細胞中過表達MUC1能夠顯著增強依賴于血管內(nèi)皮細胞生長因子的內(nèi)皮細胞的遷移和小管的形成,應(yīng)用VEGF中和性抗體可顯著逆轉(zhuǎn)MUC1誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞遷移和血管形成作用。過表達MUC1對A549和NCI-H460細胞周期分布以及粘附能力都沒有顯著影響。MUC1基因過表達能夠明顯促進細胞增殖和細胞克隆能力。動物實驗結(jié)果顯示MUC1基因過表達后能夠顯著促進A549細胞移植瘤的生長,瘤重和瘤體積都明顯高于對照組。蛋白質(zhì)印跡法檢測在過表達MUC1基因的A549和NCI-H460細胞中總AKT、ERK、p38及JNK均沒有明顯的變化。但是,過表達MUC1基因能夠顯著增強AKT和ERK的磷酸化,但是對p38和JNK的磷酸化均沒有明顯的影響。應(yīng)用ERK和AKT抑制劑PD9859和SH-5預(yù)處理NSCLC細胞可以顯著逆轉(zhuǎn)MUC1介導(dǎo)的促血管生成作用。結(jié)論MUC1和VEGF在NSCLC組織中的表達明顯增高與NSCLC發(fā)生發(fā)展密切有關(guān),且MUC1與VEGF的表達呈顯著正相關(guān)。在NSCLC細胞中,過表達MUC1基因可以誘導(dǎo)VEGF的表達和分泌,進而明顯增強依賴于VEGF的內(nèi)皮細胞遷移和血管狀結(jié)構(gòu)的形成。過表達MUC1有利于肺癌細胞克隆形成和增殖。在NSCLC細胞中過表達MUC1基因能夠顯著提高AKT和ERK磷酸化和活性,進而增強NSCLC細胞促血管生成能力。
[Abstract]:Objective Mucin - 1 ( MUC1 ) is a transmembrane glycoprotein , and MUC1 protein is abnormally high in a variety of cancer tissues , including non - small cell lung cancer ( NSCLC ) . The effects of MUC1 and VEGF on the proliferation of NSCLC cells were investigated by MTT assay . p0.01). The expression of MUC1 gene in A549 and NCI - H460 cells was significantly higher than that of control group .
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

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本文編號：2014682