本文選題：黏蛋白-1 + 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子�。� 參考：《鄭州大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的黏蛋白-1(Mucin 1,MUC1)是一種跨膜的糖蛋白,MUC1蛋白在多種癌癥組織中都異常高表達(dá),其中包括非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。已知新生血管的形成在腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移四個(gè)過(guò)程中都具有非常重要的意義,腫瘤組織中內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是主要的促進(jìn)新生血管形成機(jī)制。本課題旨在研究MUC1和VEGF在NSCLC組織中表達(dá)的相關(guān)性,進(jìn)一步研究過(guò)表達(dá)MUC1基因?qū)SCLC細(xì)胞生物學(xué)特征影響及其分子機(jī)制。方法定量PCR檢測(cè)MUC1和VEGF m RNA在NSCLC癌組織和癌旁組織中的表達(dá);免疫組化法檢測(cè)MUC1和VEGF在100例NSCLC組織中的表達(dá),分析二者的相關(guān)性。通過(guò)在A549和NCI-H460細(xì)胞中轉(zhuǎn)染MUC1基因進(jìn)而觀察過(guò)表達(dá)MUC1對(duì)NSCLC促血管生成的影響。逆轉(zhuǎn)錄PCR和蛋白質(zhì)印跡法用于檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中MUC1 m RNA和蛋白表達(dá)的情況。收集轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)上清,并與人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞孵育,應(yīng)用內(nèi)皮細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)和血管形成實(shí)驗(yàn)研究過(guò)表達(dá)MUC1對(duì)于NSCLC細(xì)胞促內(nèi)皮細(xì)胞遷移和形成血管樣結(jié)構(gòu)的能力的影響。通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)分析過(guò)表達(dá)MUC1對(duì)NSCLC細(xì)胞增殖的影響。應(yīng)用克隆形成實(shí)驗(yàn)分析分析MUC1基因過(guò)表達(dá)后NSCLC細(xì)胞克隆形成能力的影響。MUC1基因過(guò)表達(dá)后應(yīng)用細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NSCLC細(xì)胞粘附于纖維連接蛋白的能力;應(yīng)用碘化丙啶染色法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)NSCLC細(xì)胞細(xì)胞周期分布情況。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)研究轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)上清中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表達(dá)。通過(guò)慢病毒載體系統(tǒng)建立穩(wěn)定MUC1基因過(guò)表達(dá)的A549細(xì)胞,通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)和裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)分析MUC1對(duì)細(xì)胞增殖的影響。采用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)過(guò)表達(dá)MUC1基因?qū)偟囊约傲姿峄牡鞍准っ窧(PKB或AKT)、胞外信號(hào)調(diào)控激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)信號(hào)通路、p38以及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)表達(dá)的影響。同時(shí),應(yīng)用ERK和AKT抑制劑PD9859和SH-5預(yù)處理NSCLC細(xì)胞,觀察抑制ERK或者AKT的活化對(duì)血管形成的影響。結(jié)果MUC1和VEGF m RNA在NSCLC癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織。MUC1的表達(dá)與NSCLC腫瘤大小、組織學(xué)類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但其陽(yáng)性率與患者的年齡、性別、是否吸煙之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。VEGF的表達(dá)與NSCLC腫瘤大小、組織學(xué)類型、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但其陽(yáng)性率與患者的年齡、分化程度、是否吸煙、TNM分期之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MUC1與VEGF的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.380,p0.01)。RT-PCR結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染MUC1基因?qū)е翧549和NCI-H460細(xì)胞MUC1m RNA表達(dá)增強(qiáng)。蛋白質(zhì)印跡法顯示,在轉(zhuǎn)染MUC1基因的A549和NCI-H460細(xì)胞中MUC1蛋白的表達(dá)量顯著增加。同時(shí),RT-PCR和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)則顯示,在A549和NCI-H460細(xì)胞中過(guò)表達(dá)MUC1能夠顯著增強(qiáng)VEGF的表達(dá)和分泌。在A549和NCI-H460細(xì)胞中過(guò)表達(dá)MUC1能夠顯著增強(qiáng)依賴于血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和小管的形成,應(yīng)用VEGF中和性抗體可顯著逆轉(zhuǎn)MUC1誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移和血管形成作用。過(guò)表達(dá)MUC1對(duì)A549和NCI-H460細(xì)胞周期分布以及粘附能力都沒(méi)有顯著影響。MUC1基因過(guò)表達(dá)能夠明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖和細(xì)胞克隆能力。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MUC1基因過(guò)表達(dá)后能夠顯著促進(jìn)A549細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng),瘤重和瘤體積都明顯高于對(duì)照組。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)在過(guò)表達(dá)MUC1基因的A549和NCI-H460細(xì)胞中總AKT、ERK、p38及JNK均沒(méi)有明顯的變化。但是,過(guò)表達(dá)MUC1基因能夠顯著增強(qiáng)AKT和ERK的磷酸化,但是對(duì)p38和JNK的磷酸化均沒(méi)有明顯的影響。應(yīng)用ERK和AKT抑制劑PD9859和SH-5預(yù)處理NSCLC細(xì)胞可以顯著逆轉(zhuǎn)MUC1介導(dǎo)的促血管生成作用。結(jié)論MUC1和VEGF在NSCLC組織中的表達(dá)明顯增高與NSCLC發(fā)生發(fā)展密切有關(guān),且MUC1與VEGF的表達(dá)呈顯著正相關(guān)。在NSCLC細(xì)胞中,過(guò)表達(dá)MUC1基因可以誘導(dǎo)VEGF的表達(dá)和分泌,進(jìn)而明顯增強(qiáng)依賴于VEGF的內(nèi)皮細(xì)胞遷移和血管狀結(jié)構(gòu)的形成。過(guò)表達(dá)MUC1有利于肺癌細(xì)胞克隆形成和增殖。在NSCLC細(xì)胞中過(guò)表達(dá)MUC1基因能夠顯著提高AKT和ERK磷酸化和活性,進(jìn)而增強(qiáng)NSCLC細(xì)胞促血管生成能力。
[Abstract]:Objective Mucin - 1 ( MUC1 ) is a transmembrane glycoprotein , and MUC1 protein is abnormally high in a variety of cancer tissues , including non - small cell lung cancer ( NSCLC ) . The effects of MUC1 and VEGF on the proliferation of NSCLC cells were investigated by MTT assay . p0.01). The expression of MUC1 gene in A549 and NCI - H460 cells was significantly higher than that of control group .
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2014682