本文選題：胃癌 + 唾液�。� 參考：《西北大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景:國際癌癥研究機構(gòu)的最新資料表明,胃癌是全球最常見的五種惡性腫瘤之一,據(jù)《Cancer Statistics in China,2015》統(tǒng)計結(jié)果顯示,胃癌發(fā)病率和死亡率在惡性腫瘤中位列第二。在我國,2015年新增胃癌病例67.9萬人,因胃癌死亡人數(shù)為49.8萬人,胃癌的患病率和死亡率均是世界平均水平的兩倍多。目前胃癌的診斷還缺乏特異性標(biāo)志物。本實驗通過比較健康志愿者(Healthy volunteers,HV),萎縮性胃炎(Atrophic gastritis patients,AG)和胃癌患者(Gastric cancer patients,GC)的唾液糖蛋白糖型差異,評估唾液糖蛋白糖型作為胃癌診斷潛在標(biāo)志物的可行性。實驗方法:本實驗總計收集了 201例唾液樣本,分為實驗組與驗證組。首先利用凝集素芯片分析了實驗組124例唾液樣本(30例HV,30例AG,64例GC),比較HV,AG和GC之間的唾液糖蛋白糖型差異。并且利用唾液芯片和凝集素印跡實驗對凝集素芯片結(jié)果進(jìn)行驗證。其次,對實驗組凝集素芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行逐步邏輯回歸分析,構(gòu)建AG和GC診斷模型(Model AG和Model GC),利用驗證組(30例HV,24例AG,23例GC)的凝集素芯片數(shù)據(jù)對模型進(jìn)行評估。最后,利用凝集素AAL-磁粒復(fù)合體分離AAL識別的巖藻糖基化糖蛋白,通過PNGaseF酶切法和次氯酸鈉(NaClO)氧化法分別釋放糖蛋白上的N-糖鏈與O-糖鏈,純化和除鹽后用MALDI-TOF/TOF-MS鑒定糖鏈的完整結(jié)構(gòu)。實驗結(jié)果:凝集素芯片結(jié)果顯示有15種凝集素識別的糖鏈結(jié)構(gòu)在HV、AG和GC之間存在顯著差異。相較于HV,識別α-D-Man和Fuccα-1,6GlcNAc糖鏈結(jié)構(gòu)的PSA以及識別 Bisecting GlcNAc 和 Complex-type N-glycan with outer Gal 糖鏈結(jié)構(gòu)的 PHA-E的歸一化后熒光強度(Normalized fluorescent intensities,NFIs)在 AG 和 GC 中低表達(dá)(p0.05);而識別 Galβ-1,4GlcNAc(type Ⅱ)和 Galβ 1-3GlcNAc(type Ⅰ)糖鏈結(jié)構(gòu)的 ECA、識別 High-Mannose,Manα1-3Man 和 Manα1-6Man 糖鏈結(jié)構(gòu)的 HHL、識別Ga1β1-3GalNAcα-Ser/Thr(T)糖鏈結(jié)構(gòu)的 PNA、識別 Galα1-3(Fucα1-2)Gal(blood group B antigen)糖鏈結(jié)構(gòu)的EEL、識別Ga1β1-3GalNAc和GalNAc糖鏈結(jié)構(gòu)的MPL以及識別αGalNAc和αGal糖鏈結(jié)構(gòu)的GSL-I的NFIs在AG和GC中高表達(dá)(p0.05);識別 β-D-GlcNA,(GlcNAcβ1-4)n 和 Ga1β1-4GlcNAc 糖鏈結(jié)構(gòu)的 DSA、識別(GlcNAc)n和 High Mannose-type N-glycan 糖鏈結(jié)構(gòu)的 LEL 的 NFIs 在 AG 中顯著上調(diào)(p0.01);識別 Fucα1-2Ga1β1-4GlcNAc 和 Fucα1-3(Galβ1-4)GlcNAc 糖鏈結(jié)構(gòu)的 LTL 的 NFIs在 AG 中顯著下調(diào)(p0.01);識別 terminal GalNAc,GalNAcα-Ser/Thr(Tn)和GalNAcα1-3Gal 識別的 VVA,識別 α-Gal,α-GalNAc,Galα-1,3Gal 以及與 Galα-1,6Glc的 BS-I,識別 α-or β-linked terminal GalNAc,(GalNAc)n 和 GalNAcα1-3Gal 的 SBA 的NFIs 在 GC 中顯著上調(diào)(P0.01);識別 Fucoα1-6GlcNAc(core fucose)和Fucα1-3(Ga1β1-4)GlcNAc 的 AAL 的 NFIs 在 GC 中顯著下調(diào)(p≤0.001)。利用唾液芯片以及凝集素印跡技術(shù)驗證凝集素芯片結(jié)果,唾液芯片與凝集素印跡實驗結(jié)果均與凝集素芯片的結(jié)果一致。從整體糖鏈水平著手,聚類分析以及主成分分析共同顯示了唾液糖蛋白糖型能夠用于區(qū)分HV、AG和GC。Model GC診斷模型在驗證組中達(dá)到的較好的診斷效果(AUC:0.89,敏感度:0.96,特異性:0.80),能夠成功區(qū)分出23例GC中的22例,24例AG中的19例,30例HV中的24例;Model AG診斷模型同樣獲得了較好的診斷效果(AUC:0.83,敏感度:0.92,特異性:0.72),能夠成功區(qū)分出24例AG中的22例,23例GC中的13例,30例HV中的25例。此外,利用MALDI-TOF/TOF-MS鑒定了凝集素AAL分離的糖蛋白上糖鏈的完整結(jié)構(gòu),結(jié)果顯示了 AAL分離的糖蛋白的巖藻糖基化糖鏈類型在HV、AG和GC中存在顯著的差異,巖藻糖基化O-糖鏈種類的數(shù)量在胃癌的發(fā)展過程中呈現(xiàn)出減少的趨勢。值的關(guān)注的是,m/z 1776.629是HV和AG質(zhì)譜圖中最高強度的糖鏈峰(巖藻糖基化),在GC中則成為一個低強度的糖鏈峰。而GC中2個最高強度的糖鏈峰m/z 1730.636和1752.610指示為同一種糖鏈(二者離子不同,分別為[M+H]+和[M+Na]+),在HV和AG中則是中等豐度的糖鏈。由此可見,唾液糖蛋白糖型具有成為胃癌診斷標(biāo)志物的潛能。
[Abstract]:In this experiment , we collected 201 saliva samples ( 30 HV , 30 AG , 64 GC ) . The results showed that there were no specific markers in the diagnosis of gastric cancer . The results showed that there were significant differences in the sugar chain structure between healthy volunteers ( healthy volunteers , HV ) , atrophic gastritis patients ( AG ) and gastric cancer patients ( GC ) . In AG and GC , it was recognized that there was a significant down - regulation in the structure of 偽 - D - Man and Fucc 偽 - 1 - 3 GalN偽 - Ser / Thr ( T ) sugar chain . The recognition of the structure of Gal & beta ; 1 - 3 ( type II ) and Gal & beta . 1 - 3Glcnac ( type I ) sugar chain structure HHL , identified high - expression in AG and GC of Gal & beta ; 1 - 3 ( Fuc.alpha . 1 - 2 ) Gal ( blood group B antigen ) sugar chain structure . The results of detection of 偽 - Gal , 偽 - GalN , Gal 偽 - 1 , 3Gal and AAL of GalN偽 1 - 3Gal were significantly downregulated in GC ( p 鈮，

本文編號：2014181