發(fā)布時間：2018-06-12 23:54

  本文選題：腫瘤相關(guān)巨噬細胞 + 食管癌　； 參考：《鄭州大學》2016年碩士論文

【摘要】：研究背景與目的食管癌發(fā)病率居惡性腫瘤第四位。我國食管癌發(fā)病率一直位于前列,全世界近50%的食管癌發(fā)生在中國,截止2015年底,我國新發(fā)食管癌患者達到了47.79萬人,食管癌已然成為嚴重威脅人類健康的疾病之一。我國臨床上常見的食管癌類型為食管鱗狀細胞癌,浸潤和轉(zhuǎn)移是其高死亡率的原因。研究表明,食管癌的發(fā)生和浸潤、轉(zhuǎn)移是多項因子共同協(xié)同的結(jié)果,浸潤在腫瘤組織間質(zhì)中的巨噬細胞被稱為腫瘤相關(guān)巨噬細胞(tumour associated macrophages,TAMs),TAMs在不同的微環(huán)境下表現(xiàn)出不同的功能活化,一般分為兩種:一種是經(jīng)典活化的巨噬細胞,也稱為M1型巨噬細胞,在腫瘤進程中對瘤細胞具有抑制和殺傷的作用;另一種是替代性活化的巨噬細胞,稱為M2型巨噬細胞,具有促進腫瘤細胞增殖的作用。研究發(fā)現(xiàn)在胃癌、肝癌、卵巢癌等惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中都可見M2型巨噬細胞的出現(xiàn)。本實驗旨在探討M2型巨噬細胞參與食管癌脈管生成的可能機制,從而為進一步尋找抑制食管癌轉(zhuǎn)移的新靶點提供理論依據(jù)。方法1.將人淋巴瘤U937單核細胞進行培養(yǎng),采用免疫細胞化學標記該細胞中CD206、CD163的表達,鑒定其表型。2.采用pma及白介素-4(il-4)將人淋巴瘤u937單核細胞誘導為單核細胞來源的m2型巨噬細胞,與食管癌ec9706細胞共培養(yǎng)作為實驗組,將單獨培養(yǎng)的食管癌ec9706細胞作為對照組。3.運用酶聯(lián)免疫吸附測定法(elisa)分別檢測兩組細胞上清液中血管內(nèi)皮生長因子(vegf)、血管內(nèi)皮生長因子-c(vegf-c)的濃度。4.采用westernblot方法檢測兩組細胞的vegf、vegf-c蛋白的表達。5.運用rt-pcr法檢測各組細胞中vegf、vegf-cmrna的表達。6.采用免疫組織化學法(sp法)檢測實驗組與對照組移植瘤組織中vegf、vegf-c的表達,并運用cd206、cd163標記tams。7.利用原位雜交法檢測各組裸鼠移植瘤組織中vegfmrna、vegf-cmrna的表達。8.采用免疫組化對cd31染色,標記各組裸鼠移植瘤組織中的血管,計算mvd值。9.采用免疫組化對d2-40染色,標記各組裸鼠移植瘤組織中的淋巴管,計算lmvd值。10.實驗數(shù)據(jù)使用spss17.0統(tǒng)計軟件處理,符合正態(tài)分布的計量資料,統(tǒng)計分析采用均數(shù)±標準差(x±s);陽性率的比較采用χ2檢驗;計量資料均數(shù)間的比較采用t檢驗,檢驗水準α=0.05。結(jié)果:1.人淋巴瘤u937單核細胞cd163,cd206陽性表達率均為100%。說明人淋巴瘤u937單核細胞可作為tams細胞繼續(xù)后續(xù)實驗。2.人淋巴瘤u937細胞通過白介素-4誘導18h后,形態(tài)由球型逐漸變?yōu)槎噙呅?并開始貼壁生長。3.elisa方法檢測實驗組細胞上清液中vegf濃度為(104.33±0.79),對照組濃度為(99.81±0.63),兩組結(jié)果進行比較,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。實驗組vegf-c濃度為(224.85±29.33),對照組濃度為(208.40±24.59),實驗組對照組,具有統(tǒng)計學差異(p0.05)。4.westernblot檢測實驗組中vegf蛋白的表達量為(0.60±0.04),對照組vegf蛋白表達量為(0.19±0.02),二者比較,實驗組表達量對照組,差異具有顯著性(p0.05)。實驗組vegf-c蛋白的表達量為(1.13±0.23);對照組VEGF-C蛋白表達量為(0.75±0.12),兩者比較,實驗組表達量高于對照組,差異具有顯著性(P0.05)。5.經(jīng)過RT-PCR實驗檢測,實驗組中VEGF mRNA表達量(1.33±0.03)大于對照組(1.18±0.02),兩組比較有差異(P0.05);實驗組VEGF-C mRNA表達量(1.38±0.06)大于對照組(1.08±0.04),兩組比較有差異(P0.05)。6.免疫組織化學檢測實驗組移植瘤組織中VEGF蛋白表達率(52.41±15.26%)明顯高于對照組(45.19±18.63%),兩者比較具有統(tǒng)計學差異(P0.05);實驗組VEGF-C蛋白表達率(48.23±15.32%)大于對照組(40.69±12.78%),且具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。7.免疫組化檢測實驗組中CD206的計數(shù)(31.22±14.27個/HP)高于對照組(26.83±12.11個/HP),差異具有顯著性(P0.05)。實驗組中CD163的計數(shù)(29.78±12.36個/HP)高于對照組(22.53±10.38個/HP),兩組之間比較具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。8.原位雜交方法檢測VEGF mRNA的表達,結(jié)果實驗組陽性率(31.63±13.21%)明顯高于對照組,(P0.05)。實驗組中VEGF-C mRNA陽性率(37.51±3.59)明顯高于對照組(31.27±3.12%),兩組之間比較具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。9.實驗組MVD值為(29.21±5.78個/HP),對照組MVD值為(26.58±6.53個/HP),差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。10.實驗組LMVD值為(12.13±1.37個/HP),對照組LMVD值為(10.09±1.21個/HP),兩組比較,差異具有顯著性(P0.05)。結(jié)論1.人淋巴瘤U937單核細胞作為TAMs細胞,可以促進食管癌EC9706細胞分泌VEGF、VEGF-C因子。2.M2型巨噬細胞可通過VEGF、VEGF-C促進裸鼠食管癌移植瘤組織血管、淋巴管的生成。
[Abstract]:The expression of vascular endothelial growth factor ( vegf ) and vascular endothelial growth factor - c ( vegf - c ) in esophageal squamous cell carcinoma was detected by immunohistochemistry ( sp method ) . The expression of VEGF - C in the experimental group was significantly higher than that in the control group ( P < 0.05 ) . The expression of VEGF - C in the experimental group was significantly higher than that in the control group ( P < 0.05 ) .
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1

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本文編號：2011622