本文選題：胃癌 + DLC1��； 參考：《南方醫(yī)科大學》2015年碩士論文

【摘要】：1研究背景：胃癌已經(jīng)成為全世界第四大常見的惡性腫瘤和第二大癌癥相關(guān)死亡原因。雖然傳統(tǒng)的組織病理學分類可以較好地預(yù)測胃癌的治療結(jié)果和預(yù)后,但具有相同病理組織類型的患者常由于個體差異而具有不同的預(yù)后,這可能是歸因于遺傳異質(zhì)性的差異。廣泛根治性切除術(shù)是局限期胃癌的標準治療方式。然而,術(shù)后復(fù)發(fā)仍然是治療失敗的主要原因。不同的胃癌患者對治療的反應(yīng)不同,目前還沒有已知明確的生物學標志物可準確預(yù)測胃癌輔助化療的療效。氟尿嘧啶類和奧沙利鉑聯(lián)合方案被廣泛的用于胃癌的輔助化療,但是至今也沒有可靠的分子標志物能準確預(yù)測氟尿嘧啶類(氟尿嘧啶注射液或卡培他濱)和奧沙利鉑組合(FP-LOHP)在胃癌輔助化療中的療效。肝癌缺失基因.-1 (deleted in liver cancer 1, DLC1)作為GTP酶激活蛋白(G TPase activated protein, GAP)在腫瘤中發(fā)揮抑制腫瘤活性。起初,D LC1是在肝細胞癌中發(fā)現(xiàn)下調(diào),其下調(diào)在肝細胞癌中的發(fā)生率約50%。此后,研究陸續(xù)報道了DLC1 mRNA在諸如淋巴瘤、結(jié)直腸癌和胃癌等多種惡性腫瘤中下調(diào)。研究表明,沉默DLC1可促進細胞增殖和遷移,而恢復(fù)DLC1的表達能抑制細胞遷移、增殖等惡性生物學行為。雖然DLC1基因的下調(diào)在胃癌細胞系中已被證實,但DLC1蛋白在胃癌中的表達狀態(tài)及其預(yù)后意義仍不明確,尤其是其在胃癌輔助化療中的作用仍未知。另一方面,DLC1的下調(diào)和尿路上皮癌、口腔鱗狀細胞癌、肺癌、皮膚黑色素瘤、卵巢癌的不良預(yù)后關(guān)系密切。此外,有研究表明DLC1的低表達與依托泊苷、卡鉑在肺癌中的化療敏感性有關(guān)。因此我們推測,胃癌中DLC1的表達狀態(tài)可能通過影響某些化療藥物的療效而影響預(yù)后�；诋斍暗难芯拷Y(jié)果,我們推測DLC1在胃癌中的低表達與其不良預(yù)后有關(guān)。此外,我們還嘗試著就DLC1是否會影響某些化療藥物的療效進行探索。因此,我們用免疫組化染色方法檢測了DLC1蛋白在胃癌和相應(yīng)的正常粘膜樣本中的表達水平,并分析了胃癌中DLC1蛋白表達水平與臨床病理特征、生存、復(fù)發(fā)及輔助化療療效的關(guān)系。2.材料和方法2.1病人隨訪所有納入研究的患者都于2000-2011年在南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院(中國廣州)行組織病理學檢查,并被確診為胃癌。所有患者都根據(jù)AJCC癌癥分期手冊(第7版,2010)分期標準進行分期。我們還隨訪了各個患者的術(shù)后復(fù)發(fā)時間(time to relapse,TTR)和／或總生存時間(overall survival,OS), TTR為手術(shù)切除到復(fù)發(fā)(磁共振成像或CT檢查發(fā)現(xiàn))的時間段,OS則為手術(shù)到胃癌相關(guān)死亡的時間段,因其他原因死亡的情況則定義為刪失。所有數(shù)據(jù)均源自醫(yī)院病歷系統(tǒng)記錄或電話隨訪。共收集288對胃癌樣本和相應(yīng)的癌旁組織。用福爾馬林固定所有樣品,并進行石蠟包埋。2.2免疫組化染色評分兩個未接觸過患者臨床病理資料的病理學專家對DLC1蛋白的免疫組化染色結(jié)果進行評分。免疫組化染色的總分等于染色面積和染色強度得分的乘積。于10倍鏡的視野下進行觀察并評分,基于每100個腫瘤細胞中陽性染色細胞的平均百分比計算染色面積,染色面積評分具體標準如下：0分(0%-10%),1分(11%-25%),2分(26%-50%),3分(51%-75%),和4分(大于75%)。染色強度具體評分標準如下：0分(陰性),1分(弱黃色),2分(黃色或深黃)和3分(褐色或深褐色)。所有患者根據(jù)染色總分分為兩組：DLCl蛋白低表達組(總分0-5)和DLC1蛋白高表達組(總分6-12)。2.3統(tǒng)計分析我們用統(tǒng)計軟件SPSS19.0對結(jié)果進行分析。用卡方檢驗評估DLC1蛋白表達與臨床病理指標的相關(guān)性。采用one-way ANOVA或Student's t-test檢驗對DLC1蛋白免疫組化染色總分進行分析比較。用Kaplan-Meier法作生存曲線,并采用對數(shù)秩檢驗(log-rank)檢測生存曲線之間的差異。用Cox比例風險回歸進行單因素和多因素的分析以研究死亡和復(fù)發(fā)的危險因素。本研究中所有P值都為雙向,且P0.05表示有統(tǒng)計學意義。3研究結(jié)果3.1患者臨床病理特征及治療情況總結(jié)我們對288例患者的總生存時間(OS)進行了隨訪(IB-III期251例,IV期37例)。其中,251例IB-III期患者行D2胃大部切除術(shù),術(shù)后接受了輔助化療,但均未接受過放化療或術(shù)前化療。此外,對所有IB-III期患者還進行了至復(fù)發(fā)時間(TTR)的隨訪。在接受過輔助化療的患者中,有104例接受了奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶類(FP-LOHP)輔助化療,而其他147例則接受了不包含F(xiàn)P-LOHP的化療方案治療。所有患者年齡均處于25～85歲不等(中位年齡52歲)。隨訪時間為0.5～79.0月不等(中位隨訪時間為26.3月)。3.2 I)LCl蛋白在胃癌和周圍正常胃黏膜組織中的考我們用免疫組織化學染色方法檢測了所有石蠟包埋胃癌樣品和相應(yīng)癌旁正常組織中DLC1蛋白的表達狀態(tài)。結(jié)果顯示,DLC1蛋白主要表達于細胞質(zhì)中,且大多數(shù)胃癌樣品中DLC1蛋白的免疫組化染色評分低于相應(yīng)的癌旁組織[73.61%(212/288對)](P0.001)。DLC1蛋白低表達在胃癌組織樣本中的發(fā)生率[75.69%(218/288對)]較正常黏膜高[21.18%(61/288)](P0.001)。3.3 DLC1蛋白表達水平與胃癌臨床病理特征的關(guān)系為了進一步探索DLC1蛋白在胃癌進展過程中的作用,我們分析了DLC1蛋白表達水平與患者臨床病理指標之間的關(guān)系�？ǚ綑z驗結(jié)果顯示,DLC1蛋白表達高低與胃癌的TMN分期(P0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況(N)(P0.001)、腫瘤浸潤深度(T)(P=0.004)、腫瘤大小(P0.001)和遠處轉(zhuǎn)移情況(P=0.040)有關(guān)。但是DLC1蛋白表達水平與如下病理特征無明顯關(guān)系：腫瘤的分化程度(P=0.098),年齡(P=0.814)及性別(P=0.260)。同時,DLC1蛋白在胃癌中表達的總體水平顯著低于相對應(yīng)的正常黏膜組織(P0.001)。此外,TNM分期較晚(P0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較多(P0.001)、浸潤深度較深(P0.001)、腫瘤體積較大(P0.001)以及遠處轉(zhuǎn)移率較高(P0.001)的胃癌組織樣本中DLC1蛋白染色評分往往較低。然而,不同分化程度的腫瘤之間免疫組化染色評分沒有統(tǒng)計學差異(P=0.116)。這些結(jié)果提示,DLC1蛋白表達水平在胃癌進展過程中降低。此外,我們還對胃癌中DLC1蛋白表達水平與某些化療療效之間的關(guān)系進行了研究。3.4胃癌中DLCl蛋白水平與預(yù)后的關(guān)系我們進行了單因素和多因素回歸分析以探索胃癌中DLC1蛋白的預(yù)后意義。單因素分析結(jié)果顯示,腫瘤大小(P0.001)、腫瘤分化程度(P0.001)、TNM分期(P0.001)、腫瘤侵襲深度(T)(P0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(N)(P0.001)和DLC1蛋白表達水平(P0.001)均與胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)。且腫瘤大小(P0.001)、腫瘤分化程度(P0.001)、TNM分期(P0.001)、腫瘤侵襲深度(T)(P0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(N)(P0.001)及DLC1蛋白表達水平(P0.001)也與胃癌患者的生存相關(guān)。與此同時,對這些參數(shù)進行多變量分析,我們發(fā)現(xiàn)DLC1蛋白表達水平是復(fù)發(fā)(P=0.004)和生存(P=0.001)的獨立危險因素。且DLC1蛋白低表達患者的復(fù)發(fā)(HR,2.232；95%CI,1.295-3.847)和死亡(HR,2.910；95%CI,1.543-5.488)風險是高表達者2倍以上。以上數(shù)據(jù)表明,通過免疫組化檢測DLC1蛋白表達可以預(yù)測胃癌的復(fù)發(fā)和死亡風險。為進一步探索DLC1蛋白低表達對胃癌復(fù)發(fā)和總生存的影響,我們使用Kaplan-Meier生存分析法對至復(fù)發(fā)時間(TTR)和總生存時間(OS)進行分析。在251例IB-Ⅲ期患者中,DLC1蛋白低表達者比高表達者具有更短的TTR(3年無復(fù)發(fā)生存率分別為30.1%和73.4%)。另外,在288例IB-Ⅳ期患者中DLC1蛋白低表達患者相對于高表達者表現(xiàn)出更短的總生存時間(5年生存率率是21.2%和62.8%)。我們還分別分析了DLC1蛋白表達對IB-Ⅲ期患者(均接受根治性切除術(shù))和Ⅳ期患者(均行姑息性手術(shù))總生存時間的影響。結(jié)果表明,無論是IB-Ⅲ期還是IV期患者,DLC1低表達患者生存時間相對較短。其中IB-Ⅲ期DLC1低表達胃癌患者的中位TTR為26.0個月,而IB-Ⅳ期患者的中位OS為36.0個月。同時,在IB-Ⅲ期患者中超過半數(shù)的DLC1陽性患者至隨訪結(jié)束也未復(fù)發(fā)。3.5 DLCl蛋白表達水平與胃癌術(shù)后輔助化療療效的關(guān)系FP-LOHP被廣泛的用于胃癌輔助化療中。然而,不同患者對FP-LOHP反應(yīng)差別很大,且目前沒有可靠的生物標記物可準確預(yù)測該化療組合的臨床治療效果。因此,我們迫切希望了解DLC1蛋白表達水平是否會影響FP-LOHP的臨床治療效果。在此,我們對251例接受過輔助化療的IB-III期胃癌患者進行了分析。結(jié)果顯示,在接受過FP-LOHP輔助化療的DLC1蛋白高表達患者[DLC-1 (+)/FP-LOHP(+)]中,一半以上復(fù)發(fā)時間超過3年(89.6%),且總生存時間超過5年(69.0%)。因此中位無復(fù)發(fā)時間或中位總生存時間未給出。Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示,接受了FP-LOHP作為輔助化療的胃癌患者復(fù)發(fā)率和死亡率比接受其他化療方案者相對較低。但是,只有在DLC1蛋白高表達組中接受了FP-LOHP輔助化療者[DLC1(+)/FP-LOHP(+)]相對于接受其他化療方案者[DLC1(+)/FP-LOHP(-)]顯示出更長的TTR和OS,而在DLC1低表達組中接受FP-LOHP方案化療患者相對接受其他化療方案患者無明顯獲益。4.研究結(jié)論(1).DLC1蛋白在胃癌中表達降低。(2).DLC1蛋白表達降低與胃癌進展有關(guān),且預(yù)示著不良預(yù)后。(3).DLC1蛋白高表達胃癌患者可從氟尿嘧啶和奧沙利鉑聯(lián)合輔助化療中獲益。
[Abstract]:Although the downregulation of DLC1 in gastric cancer has been confirmed , it is suggested that the expression of DLC1 can promote cell proliferation and metastasis . Total survival time ( OS ) and total survival time ( OS ) of DLC1 protein were analyzed by using Kaplan - Meier method . The results were as follows : 0 ( 0 % -10 % ) , 1 ( 11 % -25 % ) , 2 ( 26 % -50 % ) , 3 ( 51 % -75 % ) , and 4 ( > 75 % ) . The expression of DLC1 protein in gastric cancer was significantly lower than that in normal mucosa ( P = 0 . 001 ) . The expression level of DLC1 protein was significantly lower than that of normal mucosa ( P = 0 . 001 ) .
95 % CI , 1.295 - 3.847 ) and death ( HR , 2.910 ;
The results showed that the expression level of DLC1 in patients with stage IB - 鈪，

本文編號：2010362