本文選題：肝細(xì)胞癌 + CRISPR/Cas技術(shù)�。� 參考：《中國病理生理雜志》2017年12期

【摘要】：目的:觀察fermitin家族同源蛋白2(FERMT2)在肝細(xì)胞癌(HCC)組織中的表達(dá),并以體外實(shí)驗(yàn)分析FERMT2基因敲除對(duì)肝癌細(xì)胞生長及相關(guān)調(diào)控分子表達(dá)的影響。方法:采用real-time PCR及免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測FERMT2在HCC及癌旁正常肝組織中的表達(dá)情況;采用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建FERMT2基因敲除的穩(wěn)定MHCC97H細(xì)胞系,通過WST-1法和流式細(xì)胞術(shù)比較其與野生型MHCC97H細(xì)胞活力、細(xì)胞周期和凋亡狀態(tài)的改變,并采用Western blot檢測相關(guān)調(diào)控蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:FERMT2在HCC組織中的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著高于癌旁組織,且FERMT2蛋白的高表達(dá)與HCC患者術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)(P0.05);成功構(gòu)建了FERMT2基因敲除的穩(wěn)定MHCC97H細(xì)胞系;與野生型細(xì)胞相比,FERMT2基因敲除后細(xì)胞活力明顯減弱,S期細(xì)胞數(shù)量明顯減少,細(xì)胞凋亡增加,且細(xì)胞內(nèi)增殖細(xì)胞核抗原、細(xì)胞周期蛋白及細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2的表達(dá)均顯著降低(P0.05);細(xì)胞凋亡抑制因子survivin及Bcl2的表達(dá)也明顯下降(P0.05),并可檢測到cleaved caspase-3。結(jié)論:FERMT2在肝癌組織中呈高表達(dá),它可能通過調(diào)控細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白及抗凋亡蛋白的表達(dá)影響肝癌細(xì)胞的活力、細(xì)胞周期及凋亡,進(jìn)而在肝癌形成及發(fā)展過程中發(fā)揮促癌作用。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of fermitin family homologous protein 2FERMT2 in human hepatocellular carcinoma (HCC) and to investigate the effect of FERMT2 knockout on the growth and expression of related regulatory molecules in hepatocellular carcinoma (HCC) cells in vitro. Methods: the expression of FERMT2 in HCC and adjacent normal liver tissues was detected by real-time PCR and immunohistochemistry, the stable MHCC97H cell line with FERMT2 gene knockout was constructed by CRISPRR Cas9 technique, and the activity of FERMT2 gene knockout MHCC97H cell line was compared with that of wild type MHCC97H cell line by WST-1 and flow cytometry. The changes of cell cycle and apoptosis were detected by Western blot. Results the expression of FERMT2 mRNA and protein in HCC was significantly higher than that in paracancerous tissues, and the high expression of FERMT2 was related to the recurrence of HCC patients (P 0.05), and a stable MHCC97H cell line with FERMT2 gene knockout was successfully constructed. Compared with wild-type cells, the cell viability of FERMT2 gene knockout decreased significantly, the number of S phase cells decreased, apoptosis increased, and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was found in the cells. The expression of cyclin and cyclin dependent kinase 2 decreased significantly, while the expression of apoptosis inhibitor survivin and Bcl-2 decreased significantly, and cleaved caspase-3 was detected. Conclusion the high expression of FERMT2 may affect the viability, cell cycle and apoptosis of HCC cells by regulating the expression of cell cycle regulatory proteins and antiapoptotic proteins, and thus play a role in the carcinogenesis and development of HCC.
【作者單位】： 福建省立醫(yī)院病理科 福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床醫(yī)學(xué)院;福建醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 福建省腫瘤醫(yī)院腫瘤免疫學(xué)研究室;福建醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 福建省轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：福建省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.2016J01510) 福建省衛(wèi)生計(jì)生委青年科研課題(No.2017-1-2)
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1994803