本文選題：RNA + 聚合酶鏈反應(yīng)��； 參考：《重慶醫(yī)學(xué)》2017年01期

【摘要】：目的研究在缺氧環(huán)境下靶向針對解聚素-金屬蛋白酶17(ADAM17)的短發(fā)夾狀RNA(shRNA)對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的影響。方法針對ADAM17設(shè)計4個特異性的ADAM17-shRNA,經(jīng)電穿孔法轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞。缺氧條件下培養(yǎng)細(xì)胞。試驗(yàn)分為:對照組(空白磷酸鹽緩沖液)、無義序列組(轉(zhuǎn)染無義序列ADAM17-shRNA)和shRNA轉(zhuǎn)染組(轉(zhuǎn)染ADAM17-shRNA,選擇沉默ADAM17基因效率最高的shRNA用于后續(xù)試驗(yàn))。分別采用實(shí)時熒光定量PCR、iCELLigence、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞ADAM17mRNA的表達(dá)水平、細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞周期變化。結(jié)果 4個shRNA轉(zhuǎn)染組對MCF-7細(xì)胞的ADAM17基因表達(dá)均有沉默作用,與對照組及無義序列組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),尤以shRNA1219抑制率最高(F=5.11,P0.01)。shRNA轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞生長速度和增殖活性較對照組和無義序列組顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。shRNA轉(zhuǎn)染組的絕大多數(shù)細(xì)胞停留在G0/G1期(73.35±2.45),與對照組(62.56±2.35)、無義序列組(62.68±1.20)相比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),細(xì)胞周期進(jìn)展明顯延緩。結(jié)論 ADAM17-shRNA在缺氧條件下抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖。
[Abstract]:Objective to study the effects of short hairpin RNA-shRNAs targeting depolymerin-metalloproteinase-17 (ADAM17) on the proliferation of human breast cancer MCF-7 cells under hypoxia. Methods four specific ADAM17-shRNAs were designed for ADAM17 and transfected into MCF-7 cells by electroporation. Cells were cultured under anoxic conditions. The experiment was divided into three groups: control group (blank phosphate buffer solution), nonsense sequence group (transfected with ADAM17-shRNAs) and shRNA transfection group (transfected with ADAM17-shRNAs). The shRNA with the highest efficiency of silencing ADAM17 gene was selected for further experiment. The expression of ADAM17 mRNA, cell proliferation activity and cell cycle were measured by flow cytometry. Results the expression of ADAM17 gene in MCF-7 cells was silenced in the four shRNA transfection groups, compared with the control group and the nonsense sequence group. The difference was statistically significant (P 0.05). The cell growth rate and proliferation activity of shRNA1219 group were significantly lower than those of control group and nonsense sequence group. The difference was statistically significant in the majority of cells in the G _ 0 / G _ 1 phase (73.35 鹵2.45), compared with the control group (62.56 鹵2.35) and the nonsense sequence group (62.68 鹵1.20). The difference was statistically significant (P 0.05), and the progress of cell cycle was significantly delayed. Conclusion ADAM17-shRNA inhibits the proliferation of breast cancer cell line MCF-7 under hypoxia.
【作者單位】： 華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤外科;
【基金】：河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(C2010001767) 唐山市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計劃項(xiàng)目(14130256B)
【分類號】：R737.9

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本文編號：1993291