本文選題：Kiss-1 + SW480　； 參考：《南華大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)通過將p EGFP-N1-Kiss-1重組真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至結(jié)腸癌SW480細(xì)胞,擬探討Kiss-1基因高表達(dá)抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的侵襲能力及機(jī)制的初步研究。方法:將質(zhì)粒p EGFP-N1-Kiss-1及空載體質(zhì)粒p EGFP-N1通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方式瞬時(shí)導(dǎo)入結(jié)腸癌SW480細(xì)胞,轉(zhuǎn)染48h后檢測轉(zhuǎn)染效率,然后采用Transwell侵襲小室實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的侵襲能力,Realtime PCR和Western-blot方法分別從基因和蛋白水平檢測Kiss-1基因?qū)|(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基質(zhì)金屬蛋白-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表達(dá)的影響。結(jié)果:1)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白細(xì)胞數(shù),計(jì)算轉(zhuǎn)染效率在70%-85%。2)Transwell侵襲小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí):實(shí)驗(yàn)組穿過基質(zhì)膠細(xì)胞數(shù)較空白對照組和陰性對照組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3)Real-time PCR結(jié)果證實(shí):與陰性對照組相比較,Kiss-1基因相對表達(dá)量在實(shí)驗(yàn)組中增高,MMP-9和MMP-2基因相對表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4)Western-blot結(jié)果證實(shí):相對于空白對照組和陰性對照組,在實(shí)驗(yàn)組中Kiss-1高表達(dá),MMP-9和MMP-2蛋白的表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:Kiss-1高表達(dá)能明顯降低結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的侵襲能力和下調(diào)MMP-9與MMP-2表達(dá)。
[Abstract]:Aim: in this study, pEGFP-N1-Kiss-1 recombinant eukaryotic plasmid was transfected into colon cancer cell line SW480, and the mechanism of overexpression of Kiss-1 gene against invasion of colon cancer cell SW480 was studied. Methods: pEGFP-N1-Kiss-1 and pEGFP-N1 were transiently transfected into colon cancer SW480 cells by liposome transfection, and the transfection efficiency was determined after 48 h transfection of pEGFP-N1-Kiss-1 and pEGFP-N1. Then the effect of Kiss-1 gene on the expression of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) and matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) was detected by transwell invasive chamber assay. Results after 48 hours of transient transfection, the number of green fluorescent protein cells was observed under fluorescence microscope, and the transfection efficiency was calculated in 70-85.2Transwell invasion chamber. The results showed that the number of GFP cells passing through the matrix in the experimental group was lower than that in the blank control group and the negative control group. The results of real-time PCR showed that compared with the negative control group, the relative expression of Kiss-1 gene increased in the experimental group and decreased the relative expression of MMP-9 and MMP-2 genes in the experimental group. The results of Western-blot showed that Kiss-1 overexpression of MMP-9 and MMP-2 was down-regulated in the experimental group compared with the blank control group and the negative control group, and the difference was statistically significant (P 0.05). Conclusion the high expression of Kiss-1 can significantly reduce the invasion ability of SW480 cells and down-regulate the expression of MMP-9 and MMP-2.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.35

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本文編號：1992375