本文選題：肝細(xì)胞癌 + 順鉑耐藥��； 參考：《山東大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景和目的：原發(fā)性肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一,惡性程度高,大部分患者就診時(shí)較晚,已出現(xiàn)播散轉(zhuǎn)移,失去手術(shù)機(jī)會(huì),即使手術(shù)切除,術(shù)后復(fù)發(fā)率也高達(dá)60%-70%。另外一個(gè)重要的治療手段是化療,但是治療期間出現(xiàn)的對(duì)化療藥物耐藥的問題非常突出。盡管目前原發(fā)性肝癌的臨床和基礎(chǔ)研究取得了較大的進(jìn)展,然而其耐藥機(jī)制尚未完全闡明。肝癌的耐藥是多基因參與、多步驟、多階段的復(fù)雜過程,個(gè)體差異大。因此,尋找一個(gè)有效的耐藥預(yù)測及干預(yù)靶點(diǎn)是目前研究的重心。骨橋蛋白(osteopontin, OPN)是一種親水性的分泌型鈣結(jié)合磷酸糖蛋白,因?yàn)閺墓腔|(zhì)中分離得到,故而得名。OPN是一種多功能的細(xì)胞因子,參與細(xì)胞的存活、遷移和黏附。越來越多的證據(jù)闡明了其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的作用。人類OPN基因定位4號(hào)染色體,q13位點(diǎn),OPN基因經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯,最終合成的蛋白包含314個(gè)氨基酸組成。OPN功能復(fù)雜,參與多種生理、病理過程：這些過程包括骨的重塑、血管生成、組織細(xì)胞的損傷修復(fù)、動(dòng)脈粥樣硬化等。研究發(fā)現(xiàn),OPN與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。其在前列腺癌、乳腺癌、肝癌等多種腫瘤中表達(dá)水平增高。OPN通過與自身受體整合素、CD44分子結(jié)合,參與腫瘤細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)過程,促進(jìn)細(xì)胞的趨化及遷移,介導(dǎo)癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移。因此,肝癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與OPN有關(guān)。然而,OPN對(duì)人肝細(xì)胞癌(HCC)化療產(chǎn)生耐藥性的影響尚未闡明。材料與方法：本研究納入原發(fā)性肝癌患者就診于華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)院,均行TACE治療,術(shù)前均未接受手術(shù)治療。搜集臨床資料包括患者的姓名、性別、年齡、肝炎病毒感染狀態(tài)等,臨床分期(TNM分期)按照2002年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)第六次修訂的TNM分期標(biāo)準(zhǔn),肝細(xì)胞肝癌病理分級(jí)依據(jù)Edmondson標(biāo)準(zhǔn)。本組8例患者均獲得TACE術(shù)前及術(shù)后的病理切片,通過HE染色和SP法免疫組化,進(jìn)行自身對(duì)照,比較OPN表達(dá)在TACE治療前后有無差異性。人肝癌細(xì)胞株HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5培養(yǎng)在含10%的胎牛血清、100 U/ml青霉素和100mg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中,細(xì)胞放置于37℃、5%二氧化碳和95%的空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。肝癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性利用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀分析。采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測順鉑處理前后三種肝癌細(xì)胞系的OPN mRNA表達(dá)水平。采用Western blot檢測順鉑處理前后三種肝癌細(xì)胞系的OPN蛋白表達(dá)水平。采用Western blot檢測磷酸化及總PI3K、磷酸化及總AKT、Caspase-3蛋白表達(dá)量。在培養(yǎng)基中添加OPN,檢測不同組細(xì)胞對(duì)于順鉑的敏感性,描繪順鉑毒性曲線,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況。通過CD44抗體、αvβ3抗體和PI3K/AKT通路抑制劑LY294002,阻斷OPN通路,觀察細(xì)胞凋亡比率,反應(yīng)順鉑耐藥情況。每組實(shí)驗(yàn)至少獨(dú)立進(jìn)行三次,結(jié)果采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述,采用方差檢驗(yàn)及t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)推斷,P0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1.結(jié)果表明,OPN在順鉑化療后的肝癌組織標(biāo)本中表達(dá)量明顯增加。2.順鉑處理后的HepG2、HuH-7及PLC/PRF/5細(xì)胞中OPN在轉(zhuǎn)錄水平得到顯著提高。與此相符,采用Western Blot法檢測OPN蛋白水平同樣發(fā)現(xiàn)OPN表達(dá)水平在順鉑處理后得到顯著提高。PI3K/AKT信號(hào)通路被順鉑激活并且這種效應(yīng)是通過依賴OPN通路實(shí)現(xiàn)的。觀察到OPN處理后的HepG2、HuH-7及PLC/PRF/5細(xì)胞的順鉑毒性曲線上移,表明其對(duì)順鉑的敏感性降低,耐藥性增強(qiáng)。OPN組細(xì)胞經(jīng)順鉑處理后顯著下調(diào)Caspase3的激活水平,提示凋亡水平顯著下調(diào)。3.與此相反,利用CD44抗體、αvβ3抗體和LY294002阻斷OPN通路則增加了肝癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。結(jié)論：綜上所述,OPN通過激活PI3K/AKT信號(hào)通路使肝癌細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性增強(qiáng),所以,阻斷OPN通路可能是克服肝癌化療耐藥的新方法。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : Primary liver cancer ( HCC ) is one of the most common malignant tumors in our country , with high degree of malignancy . Results : 1 . The results showed that the sensitivity of tumor cell line HepG2 , HuH - 7 and PLC / PRF / 5 was significantly increased by Western blot .
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

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8 周e，

本文編號(hào)：1954832