本文選題：髓系來源抑制細胞 + 酸敏感離子通道　； 參考：《中南民族大學》2015年碩士論文

【摘要】：髓系來源抑制細胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)是分化異常的、具有免疫抑制活性的髓系衍生細胞群體,包括髓系祖細胞、形態(tài)幼稚的未成熟單核細胞、粒細胞和樹突狀細胞等。它是導致腫瘤免疫治療失敗的重要原因。因此,人們試圖通過清除MDSCs或抑制其功能來減輕或消除機體免疫抑制狀態(tài)。酸敏感離子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)是由H+激活的門控陽離子通道,可以感知細胞內外H+梯度變化。MDSCs是否表達ASICs?腫瘤微環(huán)境酸化是否激活ASICs?ASICs是否參與了MDSCs的免疫抑制功能?迄今尚不清楚。本課題以小鼠來源MDSCs為研究對象,觀察其ASICs功能亞單位的表達,并在此基礎上,探討腫瘤微環(huán)境的酸化對MDSCs的功能影響以及ASICs在其中的作用及其機制。研究的內容和結果如下:1、荷瘤宿主來源MDSCs中ASICs表達增強構建荷瘤小鼠模型,分離正常小鼠和荷瘤小鼠MDSCs,反轉錄PCR和Western blot研究結果證實:正常小鼠和荷瘤小鼠MDSCs均能表達ASIC1、ASIC2和ASIC3mRNA和蛋白質,且腫瘤MDSCs表達ASICs水平高于正常小鼠。免疫雙標法檢測ASICs在MDSCs內亞細胞定位結果顯示:ASIC1和ASIC3表達于MDSCs細胞質內,ASIC2表達于MDSCs胞膜。2、腫瘤微環(huán)境酸化對MDSCs功能的影響(1)微環(huán)境酸化可促進MDSCs分泌ROS,當pH降低到5.5之后,其活性氧顯著增加,約為正常小鼠的2.6倍(p0.001)。而微環(huán)境酸化對MDSCs的NO表達則無影響。表明粒細胞樣MDSC亞群(PMN-MDSC)活化,增加ROS的產生,從而增強其免疫抑制活性,而單核細胞樣MDSC亞群(Mo-MDSCs)活化不明顯,因此產生NO較少。(2)微環(huán)境酸化可促進MDSCs表達TGF-β1,當pH降低至5.5時,荷瘤小鼠表達TGF-β1明顯高于正常小鼠(3倍),用ASICs阻斷劑阿米洛利阻斷之后,TGF-b1顯著降低(p0.001)。而微環(huán)境酸化對MDSCs表達IL-10無顯著影響。提示荷瘤小鼠MDSCs可能通過分泌TGF-b1等抑制性細胞因子抑制機體的免疫功能。(3)微環(huán)境酸化可促進MDSCs抑制T細胞增殖:利用流式細胞術檢測T細胞增殖顯示,當T細胞與pH5.5的MDSCs細胞共培養(yǎng)后,T細胞的增殖從32.6%降低到20.4%(p0.01)。表明微環(huán)境酸化促進腫瘤小鼠MDSCs細胞對T細胞增殖抑制作用。3、腫瘤微環(huán)境酸化對MDSCs功能影響的細胞信號途徑借助Western Blotting檢測p38MAPK和NF-κB信號通路關鍵蛋白磷酸化結果顯示:腫瘤來源MDSCs中ASICs表達增強,并通過誘導p38磷酸化,進而促進p65磷酸化水平提高,來促進MDSCs的免疫抑制功能。而用ASICs抑制劑阿米洛利預先阻斷ASICs后,p38和p65的磷酸化水平明顯降低。提示:在酸化條件下MDSCs免疫抑制功能強化可能是通過促進ASICs表達,并由p38MAPK和NF-κB信號通路所介導的。結論:1.首次發(fā)現(xiàn)MDSCs表達ASIC1、ASIC2和ASIC3mRNA及其蛋白質,ASIC1和ASIC3定位于細胞質內,ASIC2定位于細胞膜。荷瘤小鼠MDSCs的ASICs各亞基表達均顯著高于對照組正常小鼠。2.腫瘤酸化微環(huán)境促進MDSCs分泌ROS和TGF-β1,抑制T細胞增殖。3.腫瘤MDSCs中ASICs表達增強,推測腫瘤微環(huán)境酸化信號通過ASICs傳導,激活p38磷酸化,進而激活細胞核內p65磷酸化,調控MDSCs相關基因的表達,強化MDSCs免疫抑制功能。
[Abstract]:Proliferation of MDSCs ( MDSCs ) is an important reason for the failure of MDSCs . (3)寰幆澧冮吀鍖栧彲淇冭繘MDSCs鎶戝埗T緇嗚優(yōu)澧炴畺:鍒╃敤嫻佸紡緇嗚優(yōu)鏈嫻婽緇嗚優(yōu)澧炴畺鏄劇ず,褰揟緇嗚優(yōu)涓巔H5.5鐨凪DSCs緇嗚優(yōu)鍏卞煿鍏誨悗,T緇嗚優(yōu)鐨勫孌栦粠32.6%闄嶄綆鍒，

本文編號：1942483