本文選題：TGF-β + HLA-G��； 參考：《山東大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：研究背景：胃癌(Gastric cancer, GC)患者早期其癥狀無(wú)一定特異性,近一半的胃癌患者在就診時(shí)病情已進(jìn)展到晚期。雖然胃癌相關(guān)的治療進(jìn)展較快,但該疾病預(yù)后仍較差。目前科學(xué)家研究表明細(xì)胞因子在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起了一定作用,尤其是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子家族,其中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transform ing growth factor,TGF))-p是其中的一個(gè)重要組成部分。TGF-β是一種目前發(fā)現(xiàn)的較新的細(xì)胞因子,具有廣泛的生物學(xué)活性。目前的研究表明,TGF-β產(chǎn)生的丁細(xì)胞已被證明是在抗腫瘤免疫反應(yīng)的研究的一個(gè)重要因素。胃癌的發(fā)病機(jī)制實(shí)際上受多種因素的影響,其機(jī)制與免疫系統(tǒng)的發(fā)展有關(guān)。除了常見的癌細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的固有影響,也包括腫瘤微環(huán)境使得胃癌形成免疫細(xì)胞。在過(guò)去的十年,胃癌的診斷和治療研究發(fā)現(xiàn),雖然患者較過(guò)去有相對(duì)較長(zhǎng)的生存時(shí)間,但相對(duì)于其他疾病,胃癌的高轉(zhuǎn)移率影響了胃癌患者更長(zhǎng)生存時(shí)間。到目前為止,對(duì)胃癌的臨床病理特點(diǎn),腫瘤組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移研究仍然有限,且有相當(dāng)大的爭(zhēng)議。常用的胃癌診斷方法,雖然有病理診斷、物理診斷(影像診斷)、腫瘤相關(guān)標(biāo)志物的血清學(xué)檢查及其他先進(jìn)的診斷方法,但是這些方法或操作是復(fù)雜的,昂貴的,或需要執(zhí)行的操作對(duì)身體常常造成損害。研究證實(shí)胃癌疾病發(fā)生發(fā)展乃至轉(zhuǎn)移由多因素,包括遺傳、腫瘤抑制基因、癌基因、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞粘附分子多因素相互作用而成的。因此,研究分析并尋找胃癌發(fā)生發(fā)展分子機(jī)制在目前胃癌的治療中具有重要的臨床價(jià)值。以往研究表明,在胃癌研究中發(fā)現(xiàn)TGF-β產(chǎn)生T細(xì)胞以抑制抗腫瘤免疫反應(yīng),提示TGF-β在胃癌免疫逃避監(jiān)視中是一個(gè)重要的因素。雖然TGF-β免疫逃逸機(jī)制目前還不清楚,但是有研究已經(jīng)表明TGF-β免疫逃逸與人類白細(xì)胞抗原(HLA-G)有關(guān)。通過(guò)計(jì)算機(jī)分析HLA-G3'-UTR等位基因,HLA-G,miR-152變化對(duì)于預(yù)測(cè)microRNA的等位基因有一定作用[8-10]。我們研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者HLA-G水平與TGF-β呈正相關(guān)。此外,miR-152在TGF-β誘導(dǎo)調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)與腫瘤免疫逃逸有一定關(guān)系。實(shí)驗(yàn)研究表明在胃癌中miR-152可能有抑制HLA-G過(guò)度表達(dá)作用。miR-152可以導(dǎo)致增加NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞溶解,表明miR-152可能有作為免疫系統(tǒng)增強(qiáng)劑的功能。不過(guò)尚未探明miR-152如何在胃癌細(xì)胞HLA-G表達(dá)改變的機(jī)制,也未探明miR-152如何在TGF-β誘導(dǎo)的免疫逃逸機(jī)制中與HLA-G關(guān)系�；谝陨蠁�(wèn)題尚未解決,因此,我們進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究探討HLA-G水平是否受miR-152在胃癌細(xì)胞中表達(dá)的影響,miR-152與TGF-β、HLA-G關(guān)系以及研究潛在的TGF-β誘導(dǎo)的腫瘤免疫逃逸機(jī)制。本研究是從腫瘤免疫學(xué)以及細(xì)胞分子生物學(xué)角度去探索它們之間新的分子機(jī)制,具有重要科研臨床意義。具有下面我們分兩部分進(jìn)行探討。首先我們采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assays)技術(shù)檢測(cè)了我們?cè)卺t(yī)院收集的20例胃癌患者術(shù)前留外周血樣中TGF-β的表達(dá)水平,并與人白細(xì)胞抗原-G(HLA-G)做了相關(guān)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),TGF-β在胃癌組織中顯著高表達(dá),其水平與外周血中的HLA-G水平高度相關(guān)。然后,我們對(duì)TGF-β進(jìn)行了獲得性和失活性功能研究,結(jié)果表明,TGF-β能在實(shí)驗(yàn)中能上調(diào)HLA-G的mRNA水平和蛋白水平。另一方面,生物信息學(xué)分析表明TGF-β與miR-152之間存在相互作用關(guān)系,提示miR-152可能會(huì)參與HLA-G的表達(dá)調(diào)節(jié)。我們的研究數(shù)據(jù)提示,在一定環(huán)境與刺激下胃癌組織中miR-152的表達(dá)發(fā)生了一定的變化,結(jié)果顯示miR-152的表達(dá)與TGF-β的表達(dá)呈負(fù)性相關(guān)。我們的體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-152對(duì)胃癌細(xì)胞的HLA-G表達(dá)存在負(fù)性調(diào)節(jié)作用,突變實(shí)驗(yàn)研究表明TGF-β的過(guò)表達(dá)能夠消除miR-152誘導(dǎo)的HLA-G 3'UTR活性降低。因此,我們認(rèn)為：高表達(dá)的胃癌TGF-β有可能通過(guò)抑制miR-152來(lái)上調(diào)HLA-G表達(dá)從而參與胃癌的免疫逃逸。不僅如此,本研究也表明了將TGF-β用于胃癌免疫治療以改善患者的預(yù)后、提高生存率的潛在可能性。第一部分TGF-β誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞HLA-G表達(dá)機(jī)制的研究研究目的研究TGF-β誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞HLA-G的表達(dá)及可能作用機(jī)制。研究方法通過(guò)臨床工作獲取山東大學(xué)齊魯醫(yī)院20例胃癌患者胃癌組織及癌旁組織標(biāo)本,同時(shí)采集術(shù)前1天相應(yīng)患者的外周血標(biāo)本。所有患者術(shù)前檢查均未發(fā)現(xiàn)其他臟器腫瘤病變,均接受根治性胃癌切除手術(shù),術(shù)前均未接受針對(duì)腫瘤的放療、化療及免疫治療,所有腫瘤標(biāo)本均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)。經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有納入實(shí)驗(yàn)的胃癌患者均在術(shù)前簽署病情及實(shí)驗(yàn)知情同意書。1.研究數(shù)據(jù)來(lái)源：臨床資料：選取2012年9月至2013年7月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院胃腸外科病區(qū)住院治療的胃癌患者。收集選取符合條件的胃癌患者(15男性,5例女性)。實(shí)驗(yàn)分組見正文。診斷以及分期按照國(guó)際分類標(biāo)準(zhǔn)(TNM)。2.組織標(biāo)本以及特殊器械準(zhǔn)備我們?cè)谖赴┗颊呤中g(shù)后就收集腫瘤組織和癌旁組織進(jìn)行冷凍保存,之后常規(guī)使用石蠟包埋,福爾馬林液固定所取腫瘤切片。制作成標(biāo)本以用于做PCR技術(shù)分離以及后續(xù)操作。從這些病人中術(shù)前1天收集外周血樣,為將來(lái)使用應(yīng)用EDTA血漿進(jìn)行制備。組織以及血樣需立即凍結(jié)在-80。液氮環(huán)境下。EDTA血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液。通過(guò)使用TGF-β kit以及sHLA-G試劑盒測(cè)定TGF-β水平與可溶性HLA-G濃度。3.組織病理學(xué)制備通過(guò)手術(shù)后就收集的腫瘤組織和以及癌旁組織在-80。液氮冷凍保存,做病理學(xué)制備時(shí)取出新鮮胃癌組織后立即放入在10%福爾馬林溶液中固定2-3天后按標(biāo)準(zhǔn)病理學(xué)所需程序進(jìn)行洗滌,浸臘,包埋以及防脫片的制作,切片與制片等常規(guī)程序。4.相應(yīng)外周血標(biāo)本中可溶性HLA-G (sHLA-G)濃度檢測(cè)將患者的外周血標(biāo)本用乙二胺四乙酸(EDTA)血漿做處理后存放入-80℃液氮罐冷凍備用。使用預(yù)先準(zhǔn)備好的sHLA-G試劑盒并按說(shuō)明書使用檢測(cè)外周血中可溶性HLA-G的濃度計(jì)算統(tǒng)計(jì)結(jié)果。5.通過(guò)ELISA對(duì)TGF-p和HLA-G的檢測(cè)操作前準(zhǔn)備：操作前首先根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)選定較適合的酶標(biāo)抗體稀釋度。用PBS液稀釋特異性抗體或免疫球蛋白部分,配置捕獲抗體溶液(最終濃度為0.2-10 μ g/m1)。確定待測(cè)抗體濃度所需的捕獲抗體和結(jié)合物的濃度,用PBS液配置此濃度的捕獲抗體溶液。在室溫下收集胃癌患者細(xì)胞上清并按照人類白細(xì)胞抗原(HLA-G) ELISA試劑盒說(shuō)明書,各試劑在使用前平衡至室溫。包被：包被后需要PBS液充分洗滌滴定板各包被孔等。然后封閉。再洗滌。稀釋標(biāo)準(zhǔn)抗原。加樣。溫育。最后洗滌：洗滌的次數(shù)掌握在為3-4次。加酶標(biāo)抗體：接著在常溫下在各反應(yīng)孔中加入預(yù)先備好的酶標(biāo)抗體化學(xué)發(fā)光辣根過(guò)氧化物酶底物約0.1ml,在37℃溫度下孵育2小時(shí),然后再常溫下小心洗滌。對(duì)于臨床外周血樣本,預(yù)先EDTA抗凝處理后,按照ELISA試劑盒說(shuō)明,進(jìn)行TGF-β和HLA-G水平檢測(cè)。之后顯色。顯色后終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。結(jié)果判斷：在三次重復(fù)該試驗(yàn)后得出結(jié)果。按照制造商要求將試劑應(yīng)用ELISA Kit以及sHLA-G試劑盒進(jìn)行測(cè)定。也應(yīng)用比色法計(jì)算結(jié)果判斷(酶標(biāo)儀檢測(cè)OD值).吸收測(cè)定：TGF-β水平以及HLA-G濃度可應(yīng)用TGF-β ELISA kit以及sHLA-G kit根據(jù)不同濃度用來(lái)檢測(cè)其量的變化。6應(yīng)用TGF-β kit、sHLA-Gkit檢測(cè)胃癌細(xì)胞TGF-β與HLA-G的濃度。在經(jīng)培養(yǎng)BGC823和SGC7901細(xì)胞株配制不同濃度TGF-β,然后在不同濃度TGF-β(2.5,5或10ng/ml)24或48小時(shí)處理后檢測(cè)上清液HLA-G的表達(dá)水平,應(yīng)用TGF-βkit、sHLA-G kit檢測(cè)胃癌細(xì)胞TGF-β與HLA-G的濃度。結(jié)果見圖2。7.統(tǒng)計(jì)分析所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示。用Pearson's correlation法進(jìn)行相關(guān)分析。單因素方差分析或χ2檢驗(yàn)法分析組間的差異。用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P0.05被認(rèn)為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果1.在實(shí)驗(yàn)中對(duì)TGF-β及HLA-G的濃度進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)通過(guò)皮爾森的回歸分析出一個(gè)強(qiáng)烈的正相關(guān)關(guān)系(R2=0.5455；P0.001)。2.ELISA實(shí)驗(yàn)分析表明TGF-β處理后48小時(shí),HLA-G水平增高(*P0.05**P0.01)。3.實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)隨著TGF-β逐步升高的濃度和處理時(shí)間的增加,結(jié)果顯示,HLA-G表達(dá)逐漸上調(diào)。結(jié)論：1.在胃癌細(xì)胞以及組織中TGF-β及HLA-G呈高表達(dá)水平,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示兩者的表達(dá)呈相關(guān)性。2.在胃癌中不同濃度TGF-β刺激能上調(diào)HLA-G不同程度表達(dá)。TGF-β表達(dá)和HLA-G的表達(dá)在胃癌組織中及外周血中的濃度呈顯著正相關(guān)。3.TGF-β參與了胃癌組織中HLA-G的表達(dá)上調(diào)說(shuō)明TGF-β和HLA-G在胃癌組織及外周血中的蛋白水平呈正相關(guān)；進(jìn)一步闡明TGF-β不僅與胃癌的活化和轉(zhuǎn)移相關(guān),而且在普通外科領(lǐng)域可能成為判斷胃癌患者預(yù)后的指標(biāo)之一應(yīng)用于臨床實(shí)踐。第二部分通過(guò)抑制miR-152研究TGF-β在胃癌免疫逃逸作用及機(jī)制研究目的：通過(guò)抑制胃癌細(xì)胞miR-152研究TGF-β及HLA-G之間的關(guān)系,進(jìn)一步探討胃癌TGF-β參與腫瘤免疫逃逸可能作用及機(jī)制。研究方法：在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前首先對(duì)待檢測(cè)細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇,細(xì)胞消化等處理,達(dá)到一定要求方可進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)以及下一步操作1.常規(guī)細(xì)胞復(fù)蘇以及細(xì)胞培養(yǎng),傳代首先在液氮儲(chǔ)存罐中小心取出SGC7901和MGC823細(xì)胞株凍存試管,按照細(xì)胞復(fù)蘇程序待細(xì)胞復(fù)蘇后放入37℃水浴中,所備用的兩種人胃癌細(xì)胞株SGC7901和MGC-823用含10%胎牛血清(fetalbovineserum,FBS)和抗生素(1%鏈霉素/青霉素)的RMPI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng),通常培養(yǎng)在37℃、含5% CO2的飽和濕度恒溫培養(yǎng)箱中。然后取出細(xì)胞。然后在儀器中進(jìn)行離心,離心之后棄去上層液注意保留底層細(xì)胞并慢慢再加入培養(yǎng)液,之后在準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿繼續(xù)進(jìn)行接種。需要注意的是需要等待培養(yǎng)的細(xì)胞密度較高時(shí)才傳代。用于我們實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞需是復(fù)蘇后的第三代細(xì)胞。2.細(xì)胞轉(zhuǎn)染,質(zhì)粒轉(zhuǎn)染等待細(xì)胞復(fù)蘇后常溫下小心將SGC7901細(xì)胞系和BGC-823細(xì)胞系以1x105/ml密度種至六孔板,并分別給予不同濃度TGF-β刺激(濃度分別為2.5 ng/ml, 5 ng/ml或l0ng/ml),并在24h或48h后進(jìn)行檢測(cè)細(xì)胞中HLA-G mRNA表達(dá)和細(xì)胞上清中HLA-G表達(dá)。主要方法采取陽(yáng)離子脂質(zhì)體法進(jìn)行轉(zhuǎn)染。細(xì)胞轉(zhuǎn)染約70%時(shí)在Opti-MEM介質(zhì)(Invitrogen)用脂質(zhì)體2000 (Invitrogen)匯合。我們經(jīng)檢索選定在Kpnl和Xhol酶切位點(diǎn)(Invitrogen方法)使用PCR技術(shù)片段在常溫下克隆到熒光素酶基因載體以備用。然后使用定點(diǎn)誘變法對(duì)miR-152結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)突變誘導(dǎo)從而構(gòu)建Mut-HLA-G質(zhì)粒,構(gòu)建后備用。所有用于轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒載體經(jīng)擴(kuò)增后由DNA Midiprep kit提取。siRNAs及對(duì)照siRNA(si-NC)購(gòu)買于Invitrogen公司。孵育24小時(shí)后,將在Opti-MEM培養(yǎng)液中將miR-152 mimics、inhibitor miR-152的高表達(dá)質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染入胃癌細(xì)胞中。3.熒光素酶檢測(cè)在螢光素酶檢測(cè)前首先在常溫下使用PGL3載體構(gòu)建含有HLA-G 3'UTR的螢光素酶報(bào)告質(zhì)粒。引物見正文。將PGL3-HLA-G和PRL-TK熒光素酶經(jīng)轉(zhuǎn)染后與miR-152 mimics, miR-152 inhibitor以及relative negative control RNA共轉(zhuǎn)染,進(jìn)行熒光素酶分析。在常溫下以上分子共轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,然后應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告1000分析系統(tǒng)檢測(cè)螢光素酶活性。所有的實(shí)驗(yàn)都進(jìn)行至少三次以論證結(jié)果。4.RNA分離,qRT-PCR以檢測(cè)HLA-G mRNA和TGF-β在本實(shí)驗(yàn)中我們采用Trizol法提取胃癌細(xì)胞中的總RNA,為了檢測(cè)HLA-G mRNA和TGF-β,按產(chǎn)品說(shuō)明書使用SuperScript III Reverse Transcriptase將oligo-dT primers標(biāo)定的RNA反轉(zhuǎn)錄入cDNA,在本實(shí)驗(yàn)中經(jīng)對(duì)比以及檢索我們最終選用磷酸甘油酸脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)參。為了檢測(cè)成熟的miR-152,用mirVana miRNA Isolation kit提取小RNA,用小核RNA U6作為內(nèi)參。然后在實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)中,ABI 7300 SYBR預(yù)混料應(yīng)用ExTaq酶來(lái)作為中介。之后按照Takara公司的ABI 7300實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)以及整理結(jié)果,統(tǒng)計(jì)并分析。采用比較閾值法對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行相對(duì)定量分析。5.分別對(duì)不同濃度以及時(shí)間的TGF-β及HLA-G濃度檢測(cè)以及miR-152表達(dá)的檢測(cè).用ELISA法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞株培養(yǎng)上清液,使用TGF-βELISA kit檢測(cè)不同濃度的TGF-β,采用s HLA-G儀器檢測(cè)可溶性HLA-G的濃度。然后檢測(cè)miR-152濃度并分析之間關(guān)系。6統(tǒng)計(jì)分析以上所統(tǒng)計(jì)結(jié)果我們所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示來(lái)進(jìn)行。單因素方差分析或χ2檢驗(yàn)法分析組間的差異。用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P0.05被認(rèn)為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果1.經(jīng)應(yīng)用不同濃度TGF-β(2.5,5或10ng/ml) 24h刺激下,發(fā)現(xiàn)同時(shí)HLA-G mRNA表達(dá)不同程度上升(圖2B)。2.經(jīng)實(shí)驗(yàn)在TGF-β高表達(dá)的細(xì)胞和干擾細(xì)胞株中檢測(cè)到了不同濃度的miR-152。而在試管(體外)中TGF-B能誘導(dǎo)miR-152顯著下調(diào)(P0.01；圖3),說(shuō)明在胃癌細(xì)胞TGF-β可能抑制miR-152。3.在轉(zhuǎn)染48h后觀察,抑制的miR-152與HLA-G有較一致上升趨勢(shì),這說(shuō)明在胃癌BGC823和SGC7901細(xì)胞株中miR-152改變并調(diào)節(jié)了HLA-G的表達(dá)(圖4G)。4.通過(guò)比較分析不同濃度miR-152和不同濃度的TGF-β對(duì)HLA-G表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果顯示：miR-152下調(diào)HLA-G,TGF-β上調(diào)HLA-G(如圖4)。經(jīng)過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染24 h后,從熒光素酶檢測(cè)結(jié)果顯示HLA-G3'非翻譯區(qū)呈現(xiàn)負(fù)調(diào)節(jié)(圖4c),同時(shí)觀察到M ut-HLA-G 3'UTR沒(méi)有明顯的規(guī)律(圖4E、F)。5.經(jīng)處理應(yīng)用不同的miR-152 mimics,miR-152 inhibitor以及negative controlRNA與miR-152 mimics control不同水平檢測(cè)發(fā)現(xiàn)抑制miR-152可以向上調(diào)節(jié)HLA-G表達(dá),同時(shí)抑制TGF-β誘導(dǎo)HLA-G表達(dá)的改變(’P0.05,”P0.01)。6.經(jīng)過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),在上調(diào)TGF-β濃度時(shí),加入miR-152 mimics后則部分下調(diào),間接說(shuō)明HLA-G表達(dá)與miR-152成反比例關(guān)系(圖7A、B)(’P0.05,”P0.01)。作線形圖發(fā)現(xiàn)HLA-G濃度與miR-152成反比例關(guān)系(R2=0.5267；P0.001)。同時(shí)TGF-β濃度與miR-152成反比例關(guān)系(R2=0.5944；P0.001)結(jié)論1.研究發(fā)現(xiàn)不同濃度的胃癌細(xì)胞TGF-β刺激可產(chǎn)生不同濃度的miR-152,反之亦然,說(shuō)明兩者之間有交互影響。2.通過(guò)分析以上結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)通過(guò)抑制miR-152可促進(jìn)胃癌細(xì)胞TGF-β的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在胃癌組織miR-152表達(dá)水平與TGF-β表現(xiàn)成反比。3.HLA-G表達(dá)和miR-152濃度之間存在顯著負(fù)性相關(guān)。在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞株中miR-152呈低表達(dá)；實(shí)驗(yàn)表明具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4.結(jié)果顯示抑制miR-152轉(zhuǎn)錄活性后,胃癌細(xì)胞中TGF-β可以誘導(dǎo)HLA-G的表達(dá)。這對(duì)胃癌細(xì)胞的活化起著重要作用并對(duì)進(jìn)一步研究胃癌TGF-β免疫逃逸機(jī)制有重要的意義。意義：經(jīng)以上研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)抑制miR-152轉(zhuǎn)錄活性可以增加胃癌TGF-β和HLA-G表達(dá)水平,該發(fā)現(xiàn)可能揭示胃癌TGF-β免疫逃逸機(jī)制。本次實(shí)驗(yàn)在國(guó)內(nèi)外已發(fā)表的實(shí)驗(yàn)以及臨床研究中未見有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)揭示miR-152通過(guò)抑制胃癌TGF-β誘導(dǎo)HLA-G表達(dá)的新機(jī)制。本研究也從miRNA層次揭示與TGF-βp,HLA-G之間關(guān)系,對(duì)于遠(yuǎn)期尋找治療胃癌新靶點(diǎn)、新的生物技術(shù)具有重要的理論以及臨床意義。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫衍昶;郭t$t$;賽克;王翦;王潔;陳芙蓉;張宗平;陳忠平;;MicroRNA-181b提高U87細(xì)胞對(duì)VM-26的敏感性研究[J];中國(guó)神經(jīng)腫瘤雜志;2013年02期

2 汪章勛;周權(quán);孟慧敏;張軍;黃勃;;金龜子綠僵菌MicroRNA在蟬蛻和蠶血淋巴誘導(dǎo)下的差異表達(dá)分析[J];安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào);2013年05期

3 Wenwen Jia;Wen Chen;Jiuhong Kang;;The Functions of MicroRNAs and Long Non-coding RNAs in Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

4 安麗娜;董斐斐;王國(guó)坤;單冬凱;荊清;;MicroRNA與動(dòng)脈粥樣硬化[J];國(guó)際心血管病雜志;2013年04期

5 馮楠楠;孫品;夏昭林;;凋亡相關(guān)的microRNA分子研究進(jìn)展[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2013年05期

6 陳娟娟;艾劍剛;黃世峰;曹炬;張莉萍;;HBx介導(dǎo)miR-221上調(diào)-ERα下調(diào)致HepG2細(xì)胞惡性增殖[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年20期

7 張世芳;魏彩虹;陸健;張小寧;周鑫磊;張淑珍;王光凱;曹家雪;趙福平;張莉;杜立新;;深度測(cè)序鑒定綿羊microRNA轉(zhuǎn)錄組[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年09期

8 張義;李龍;岳信;田夫;;miRNA與腫瘤的研究進(jìn)展[J];長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版);2013年36期

9 Juan Liu;Chang-Ping Wu;Bin-Feng Lu;Jing-Ting Jiang;;Mechanism of T cell regulation by microRNAs[J];Cancer Biology & Medicine;2013年03期

10 謝杏儀;黎毓光;韓澤平;呂鈺冰;陳順儀;何金花;;Hsa-miR-203聯(lián)合伊馬替尼對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病K562細(xì)胞的作用[J];安徽醫(yī)藥;2013年10期

相關(guān)會(huì)議論文 前8條

1 Ruiwen Fan;Shanshan Yang;Zhanquan Shi;Kaiyuan Ji;Xiaoyun Jia;Jianbo Yao;George W Smith;Changsheng Dong;;Identification of a novel miRNA important for melanogenesis in alpaca(Lama Pacos)[A];2013中國(guó)駝業(yè)進(jìn)展[C];2013年

2 曾清華;周箐;康秀華;;血清microRNA的檢測(cè)及在肺癌診斷中應(yīng)用的進(jìn)展[A];江西省第二次中西醫(yī)結(jié)合呼吸疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

3 秦燕;張玲云;張德玖;;核糖體展示技術(shù)在非編碼核酸研究中的應(yīng)用[A];生命科學(xué)——專題：RNA研究的新技術(shù)和新方法（第26卷第3期）[C];2014年

4 李文峰;鐘伯雄;蘇松坤;;蜜蜂級(jí)型分化機(jī)理[A];2014年全國(guó)蜂產(chǎn)品市場(chǎng)信息交流會(huì)暨中國(guó)（哈爾濱）蜂業(yè)博覽會(huì)論文集[C];2014年

5 宋毅;謝延風(fēng);張鈴鐺;馮清林;劉明冬;張鵬;范仕兵;杜江峰;;MiRNA在垂體泌乳素腺瘤中表達(dá)的初步研究[A];全國(guó)高血壓防治知識(shí)推廣培訓(xùn)班暨健康血壓中國(guó)行海南�？跁�(huì)論文綜合刊[C];2014年

6 陳軼;陳益耀;蔡曼妮;巫華志;;非酒精性脂肪性肝病患者血清miR-29b水平變化及臨床意義[A];中國(guó)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)和整合醫(yī)學(xué)研討會(huì)論文綜合刊[C];2015年

7 Junli Guo;Shaoping Zheng;Zhihong Weng;Keping Xie;Shaojiang Zheng;;Molecular Biomarkers of Pancreatic Intraepithelial Neoplasias and Implications in Early Diagnosis and Therapeutic Intervention[A];第七屆生命科學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2015年

8 Shaosheng Wang;Xiaohong Zhao;Jie Wang;Yingmei Wen;LinJing Zhang;Dezhu Wang;Huili Chen;Qiuxia Chen;Wei Xiang;;Upregulation of micro RNA-203 is associated with advanced tumor progression and poorprognosis in epithelial ovarian cancer[A];第七屆生命科學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2015年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 賈蓓;A型血友病人非整合誘導(dǎo)多能干細(xì)胞建系及其細(xì)胞疾病模型的建立[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

2 蔣一;Periostin在高糖條件下牙周組織中的表達(dá)及胰島素干預(yù)調(diào)控的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2013年

3 邵耘;MicroRNA-101與環(huán)氧化酶-2在胃癌組織中的表達(dá)及意義[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

4 佘笑梅;三氧化二砷對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病NB4細(xì)胞株Warburg效應(yīng)的影響和機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2013年

5 陳琦;慢病毒介導(dǎo)的FoxP2 knockdown蝙蝠模型建立與功能研究及長(zhǎng)翼蝠小RNA轉(zhuǎn)錄組的分析研究[D];華東師范大學(xué);2013年

6 盧一鳴;基于統(tǒng)計(jì)建模方法研究真核生物基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

7 鄢文;microRNA-19促進(jìn)人肺腺癌細(xì)胞株A549向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

8 茍麗娟;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為軟骨細(xì)胞過(guò)程中microRNA作用機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

9 李海霞;神經(jīng)病理性疼痛相關(guān)microRNAs在感覺(jué)神經(jīng)傳導(dǎo)通路中功能的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

10 賈曉健;以HDL受體SR-BI基因3'UTR為靶點(diǎn)的microRNA和小分子化合物的發(fā)現(xiàn)及作用機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李玉楓;黑色素瘤相關(guān)抗原-A3在肺癌中的表達(dá)及臨床意義的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：1934090