本文選題：hsa-miR-888-5p + miRNA��； 參考：《吉林大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是臨床上常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,肝細(xì)胞癌發(fā)病率和病死率均較高。多年來(lái)的研究證實(shí)雖然影像學(xué)檢測(cè)水平的不斷提高增加了肝細(xì)胞癌的發(fā)現(xiàn)率,但是對(duì)肝細(xì)胞癌仍缺乏有效的早期診斷及預(yù)后判斷指標(biāo)。盡管手術(shù)和肝移植是首選的治療策略,但其適應(yīng)癥范圍有限,且根據(jù)不同的腫瘤分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)其術(shù)后5年復(fù)發(fā)率仍大于70%。肝細(xì)胞癌對(duì)化療、放療、免疫治療效果不佳,目前臨床上應(yīng)用的化療藥物與靶向治療藥物雖能有效殺傷肝癌細(xì)胞,但均存在副作用較大與長(zhǎng)期應(yīng)用后腫瘤耐藥的問(wèn)題。因此,目前在臨床和科研中應(yīng)更深層次的探索肝癌的發(fā)病機(jī)制,做到早診斷、早治療并能夠及時(shí)控制腫瘤進(jìn)展。因此目前亟待解決的醫(yī)學(xué)難題之一就是尋找HCC的早期診斷指標(biāo)和藥物治療的新靶點(diǎn)。MicroRNA(miRNA)廣泛存在于真核細(xì)胞生物及病毒中,近年來(lái)其作為調(diào)控基因所發(fā)揮的重要生物學(xué)作用被逐步確認(rèn)。MiRNA研究不斷取得的重大進(jìn)展也為了解和研究疾病的分子發(fā)病機(jī)制和設(shè)計(jì)新的治療策略提供了全新的視角,目前miRNA己經(jīng)成為分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的重要熱點(diǎn)領(lǐng)域。Hsa-miR-888-5p最近已在乳腺癌和前列腺癌的研究中有所報(bào)導(dǎo),但是hsa-miR-888-5p在肝細(xì)胞癌中的具體生物學(xué)行為經(jīng)文獻(xiàn)檢索并沒(méi)有相關(guān)的研究報(bào)道。本論文研究的主要目的是闡明hsa-miR-888-5p在HCC中的作用并初步探討其生物學(xué)作用機(jī)制。本論文首先檢測(cè)了hsa-miR-888-5p在HCC細(xì)胞株、組織中表達(dá)水平。其次,利用miRNA擬似物轉(zhuǎn)染SMMC-7721細(xì)胞株,進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),檢測(cè)hsa-miR-888-5p在HCC的發(fā)生和進(jìn)展等生物學(xué)行為中的作用;繼而闡明hsa-miR-888-5p在HCC的增殖、分化、侵襲和遷移中的作用機(jī)制。并進(jìn)一步檢測(cè)MMP 9,MMP 2及p53在高表達(dá)hsa-miR-888-5p的細(xì)胞中的表達(dá)改變,從基因水平探討hsa-miR-888-5p在HCC中可能的作用機(jī)制。一、肝癌細(xì)胞中hsa-miR-888-5p的表達(dá)研究:利用qRT-PCR的方法檢測(cè)hsa-miR-888-5p在正常肝細(xì)胞株HHL-05、L02及肝癌細(xì)胞株HepG2、SMMC-7721、BEL7402、Hu-7中的表達(dá);并檢測(cè)了HCC患者癌組織及癌旁健康組織中hsa-miR-888-5p的表達(dá)差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)肝癌細(xì)胞株相對(duì)正常肝細(xì)胞株的hsa-miR-888-5p表達(dá)均明顯上調(diào)。Hsa-miR-888-5p在肝細(xì)胞癌手術(shù)切除相關(guān)標(biāo)本中的表達(dá)與腫瘤的組織學(xué)分化程度和腫瘤分期及術(shù)后三年的生存率有關(guān)(P0.05)。分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)我們得出以下結(jié)論:hsa-miR-888-5p在HCC細(xì)胞株、臨床切除肝癌組織中均表達(dá)上調(diào)。二、Hsa-miR-888-5p對(duì)肝癌細(xì)胞株生物學(xué)性狀的影響:利用hsa-miR-888-5p mimics轉(zhuǎn)染SMMC-7721細(xì)胞之后,獲得過(guò)表達(dá)hsa-miR-888-5p的肝癌細(xì)胞株。應(yīng)用MTT檢測(cè)hsa-miR-888-5p對(duì)SMMC-7721細(xì)胞增殖的影響;應(yīng)用平板克隆形成方法檢測(cè)hsa-miR-888-5p對(duì)SMMC-7721細(xì)胞克隆形成能力的影響;應(yīng)用transwell方法檢測(cè)hsa-miR-888-5p對(duì)SMMC-7721細(xì)胞遷移及侵襲的影響。MTT實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn)均證實(shí)hsa-miR-888-5p有促進(jìn)SMMC-7721增殖的趨勢(shì),經(jīng)分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Transwell遷移/侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)hsa-miR-888-5p可以在體外提高SMMC-7721細(xì)胞株的遷移及侵襲能力。依據(jù)第二部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出以下結(jié)論:hsa-miR-888-5p具有在體外提高SMMC-7721細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲的生物學(xué)特性。三、高表達(dá)hsa-miR-888-5p對(duì)MMP 9、MMP 2和p53基因表達(dá)的影響:基于上述實(shí)驗(yàn),設(shè)計(jì)或購(gòu)買MMP 9,MMP 2及p53的相關(guān)引物,應(yīng)用q RT-PCR檢測(cè)hsa-miR-888-5p對(duì)于SMMC-7721肝癌細(xì)胞株MMP 9,MMP 2及p53基因表達(dá)的影響。應(yīng)用明膠酶譜法檢測(cè)MMP9,MMP 2在SMMC-7721肝癌細(xì)胞外液中的表達(dá)變化。然后分別提取蛋白,進(jìn)行Western blot反應(yīng)檢驗(yàn)MMP 9,MMP 2及p53蛋白產(chǎn)物改變。經(jīng)q RT-PCR檢驗(yàn)結(jié)果顯示SMMC-7721細(xì)胞轉(zhuǎn)染hsa-miR-888-5p后,MMP 9,MMP-2的基因表達(dá)明顯升高,而p53表達(dá)則明顯降低。而作為內(nèi)參對(duì)照的β-actin或GAPDH的數(shù)值在兩組當(dāng)中都非常穩(wěn)定。明膠酶譜法檢測(cè)MMP 9,MMP 2在細(xì)胞外液中的表達(dá)結(jié)果顯示:在mimics組MMP 9,MMP 2的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高且差別顯著。通過(guò)分析Western blot的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)hsa-miR-888-5p的表達(dá)水平對(duì)于MMP 9,MMP 2及p53的蛋白表達(dá)水平具有調(diào)控作用。高表達(dá)hsa-miR-888-5p組與對(duì)照組間比較,上述蛋白中MMP 9,MMP 2的表達(dá)量顯著升高,而p53的蛋白表達(dá)水平則正好相反,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。經(jīng)由上述研究,本文首次初步闡明hsa-miR-888-5p在HCC中表達(dá)上調(diào),并與肝癌組織學(xué)分化程度和腫瘤分期及術(shù)后三年的生存率有關(guān)。其表達(dá)水平的改變?cè)诖龠M(jìn)HCC的形成和發(fā)展中起著重要的作用;hsa-miR-888-5p可能通過(guò)調(diào)節(jié)MMP 9,MMP 2和p53基因的表達(dá)改變了HCC的生物學(xué)行為。通過(guò)高表達(dá)hsa-miR-888-5p在HCC腫瘤細(xì)胞中所發(fā)揮的作用也進(jìn)一步揭示了其應(yīng)用于臨床診療的可行性。然而hsa-miR-888-5p的臨床實(shí)用性與應(yīng)用范圍的擴(kuò)展則有賴后續(xù)的進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1931600