本文選題：肺腫瘤 + 腫瘤干細胞��； 參考：《腫瘤》2017年03期

【摘要】：目的:研究谷胱甘肽過氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)在調(diào)控肺腺癌A549微球體細胞增殖和凋亡中的作用,并探討其可能的機制。方法:采用無血清懸浮法培養(yǎng)A549微球體細胞,應用FCM法檢測A549微球體細胞中CD133~+CD44~+細胞所占的比例,蛋白質(zhì)印跡法檢測A549微球體細胞中干細胞標志物Sox2和Nanog蛋白的表達情況,以及GPx1蛋白的表達水平。采用質(zhì)量濃度為5 mg/m L的順鉑(cisplatin,DDP)分別處理A549微球體細胞和親本A549細胞,CCK-8法檢測48 h內(nèi)細胞的存活率;利用比色法檢測A549微球體細胞和親本A549細胞中谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量和GPx1的活性,蛋白質(zhì)印跡法檢測GPx1蛋白的表達情況;FCM法檢測A549微球體細胞和親本A549細胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平。將特異性針對GPx1基因的GPx1-si RNA轉(zhuǎn)入A549微球體細胞中,分別采用實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測GPx1 m RNA及蛋白的表達水平;FCM法、蛋白質(zhì)印跡法和細胞成球?qū)嶒灧謩e檢測沉默GPx1基因表達后對A549微球體細胞中ROS水平、Sox2和Nanog蛋白表達水平以及A549微球體細胞成球能力的影響。應用FCM法、CCK-8法以及蛋白質(zhì)印跡法檢測轉(zhuǎn)入GPx1-si RNA并聯(lián)合DDP(5mg/m L)干預后,對細胞的生存率和凋亡水平以及磷酸化p38(phospho-p38,p-p38)、磷酸化激活轉(zhuǎn)錄因子2(phospho-activating transcription factor 2,p-ATF2)、p53和Bax蛋白表達水平的影響。結(jié)果:培養(yǎng)獲得A549微球體細胞,A549微球體細胞中CD133+CD44+細胞所占比例為(11.7±0.6)%,明顯高于親本A549細胞的(2.2±0.3)%。Sox2和Nanog蛋白在A549微球體細胞中的表達水平明顯高于在親本A549細胞中的表達水平(P值均0.05);DDP(5 mg/mL)處理48 h后,對A549微球體細胞的生存率無明顯影響(P0.05)。A549微球體細胞中GSH含量、GPx1的活性和蛋白的表達水平均明顯高于親本A549細胞(P值均0.05),而ROS含量在A549微球體細胞中明顯低于親本A549細胞(P0.05)。轉(zhuǎn)入GPx1-siRNA可明顯下調(diào)A549微球體細胞中GPx1 mRNA和蛋白的表達水平、并抑制Sox2蛋白的表達水平和微球體的形成(P值均0.05)。下調(diào)GPx1表達并聯(lián)合DDP處理后,A549微球體細胞的存活率明顯下調(diào)(P0.05),而細胞凋亡率明顯升高(P0.05)。此外,下調(diào)GPx1表達并聯(lián)合DDP處理后,A549微球體細胞中p-p38、p-ATF2、p53和Bax蛋白的表達水平均明顯上調(diào)(P值均0.05)。結(jié)論:下調(diào)GPx1可能通過抑制Sox2、上調(diào)ROS和激活p38-p53通路發(fā)揮抑制細胞增殖、促進凋亡等作用,其可成為肺癌治療的潛在靶點。
[Abstract]:Aim: to investigate the role of glutathione peroxidase (1(glutathione peroxidase 1G x 1) in regulating the proliferation and apoptosis of lung adenocarcinoma A549 microsphere cells and its possible mechanism. Methods: A549 microspheres were cultured by serum-free suspension method. The percentage of CD133 ~ CD44 ~ cells in A549 microspheres was detected by FCM assay. The expression of Sox2 and Nanog protein in A549 microspheres was detected by Western blot. And the expression level of GPx1 protein. The survival rate of A549 microsphere cells and parent A549 cells was measured by CCK-8 method with 5 mg/m / L cisplatin DDP. The content of glutathione (GSH) and the activity of GPx1 in A549 microsphere cells and parent A549 cells were detected by colorimetry. The expression of GPx1 protein was detected by Western blot and the level of reactive oxygen speciesROSs in A549 microspheres and parent A549 cells was detected by FCM. The specific GPx1-si RNA targeting GPx1 gene was transferred into A549 microsphere cells. The expression level of GPx1 m RNA and protein were detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting, respectively. The effects of silencing GPx1 gene expression on the expression of ROS, Sox2 and Nanog protein in A549 microspheres were detected by Western blot and cell spheroidization respectively. FCM assay and Western blot were used to detect the effects of GPx1-si RNA and DDP(5mg/m L on cell survival and apoptosis, and the expression of phosphorylated p38phospho-p38 p-p38, phosphorylated activator 2(phospho-activating transcription factor _ 2, p-ATF _ 2, p53 and Bax protein. Results: the percentage of CD133 CD44 cells in cultured A549 microsphere cells was 11.7 鹵0.6g, which was significantly higher than that in parental A549 cells (2.2 鹵0.3)%.Sox2 and Nanog). After 48 h treatment, the expression level of P was 0.05 mg / mL, and the level of P was 0.05 mg / mL. after treatment with DDP (5 mg / mL) for 48 h, There was no significant effect on the survival rate of A549 microsphere cells. The activity of GSH and the expression of protein in A549 microspheres were significantly higher than those in the parent A549 cells (P < 0.05), but the ROS content in A549 microspheres was significantly lower than that in the parent A549 cells. The expression of GPx1 mRNA and protein in A549 microspheres was significantly down-regulated by GPx1-siRNA, and the expression of Sox2 protein and the formation of microspheres were inhibited by 0.05 P value. After down-regulation of GPx1 expression and combined with DDP treatment, the survival rate of A549 microspheres cells decreased significantly, while the apoptosis rate of A549 cells increased significantly. In addition, after down-regulation of GPx1 expression combined with DDP treatment, the expression levels of p-p38, p-ATF2, p53 and Bax proteins in A549 microspheres were significantly up-regulated (P < 0.05). Conclusion: down-regulation of GPx1 may play a role in inhibiting cell proliferation and promoting apoptosis by inhibiting Sox2, upregulating ROS and activating p38-p53 pathway, which may be a potential target for lung cancer therapy.
【作者單位】： 南昌大學第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科;江西省新鋼中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科;江西省井岡山大學附屬醫(yī)院呼吸科;
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

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【二級參考文獻】

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本文編號：1922193