本文選題：miR-18a增殖 + 胰腺祖細胞��； 參考：《東北林業(yè)大學》2015年碩士論文

【摘要】：糖尿病是由于胰島B細胞破壞或胰島素抵抗導致的胰島素相對或絕對缺乏而引起,十分具有前景的治療糖尿病的策略是通過胰腺干／祖細胞、胚胎干細胞、骨髓干細胞、臍血干細胞等定向誘導分化為胰島p細胞,或者通過藥物的作用胰島p細胞的再生。目前,干細胞治療糖尿病方面已經(jīng)取得一定進展,但仍需進一步研究干／祖細胞增殖、分化和發(fā)育機制,才能獲得更高效治療效果。另外,研究表明胰腺癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢,其早期癥狀不明顯,至今尚無有效的早期診斷方法,而且胰腺癌侵襲性強,惡性程度高,手術(shù)切除率低,預后極差,死亡率接近100%,因此研究胰腺癌細胞的增殖、侵襲等機制極為重要,為胰腺癌的早期診斷及治療提供理論基礎(chǔ)。microRNA (miRNA)是一類重要的小分子RNA,其在轉(zhuǎn)錄后階段調(diào)控靶標基因的表達,識別miRNA的靶標基因是認識其調(diào)節(jié)功能的關(guān)鍵。在胰腺發(fā)育早期階段,低水平Ptf1a促進胰腺祖細胞向內(nèi)分泌方向分化,相反,高水平Ptf1a促進胰腺祖細胞向外分泌方向分化。研究表明,Ptf1a是miR-18a的直接靶基因,miR-18a通過調(diào)控Ptf1a的表達調(diào)控胰腺祖細胞的命運。此外,研究表明miR-18a在結(jié)腸癌細胞系中,miR-18a和miR-17-92的其他成員作用相反,尤其是和miR-19的作用相反,是作為抑制細胞增殖的miRNA發(fā)揮作用的。在miR-17-92成員中,miR-18a是唯一一個在形成成熟IniRNA過程中需要hnRNPA1處理的miRNA。miR-17-92的末端折疊結(jié)構(gòu)也降低了miR-18a在形成成熟miRNA的過程中的編輯效率。miR-18a可能是作為一個平衡miR-17-92家族促進癌癥發(fā)生的作用而存在的。然而關(guān)于miR-18a調(diào)控胰腺祖細胞和胰腺癌細胞的增殖的作用還沒有相關(guān)報道。本課題通過在分離的胰腺祖細胞過表達miR-18a,發(fā)現(xiàn)可以明顯抑制胰腺祖細胞的增殖,抑制PI3K/AKT信號通路和ERK信號通路,但后者作用并不明顯。通過靶基因的篩選、鑒定和功能研究,發(fā)現(xiàn)CTGF、NEDD9、IGF1和CDK19是miR-18a的靶基因,但只有干涉CTGF、NEDD9和CDK19才會抑制胰腺祖細胞的增殖,同時影響PI3K/AKT和ERK信號通路。miR-18a通過調(diào)控CTGF、NEDD9和CDK19而調(diào)控胰腺祖細胞的增殖。對于胰腺癌細胞系BXPC3而不是PANC-1,過表達miR-18a明顯抑制癌細胞的增殖及ERK的信號通路,但抑制內(nèi)源性miR-18a的表達則無明顯作用。干涉miR-18a其中一個靶基因NEDD9抑制胰腺癌細胞系BXPC3的增殖,對PANC-1細胞系無作用,同時對ERK信號通路影響不大。在胰腺癌細胞系中,miRNA-18a的作用有待進一步的研究。
[Abstract]:Diabetes is caused by the relative or absolute deficiency of insulin caused by the destruction of islet B cells or insulin resistance, and a promising strategy for the treatment of diabetes is through pancreatic stem / progenitor cells, embryonic stem cells, bone marrow stem cells. Umbilical cord blood stem cells were induced to differentiate into islet p cells or to regenerate islet p cells by drugs. At present, some progress has been made in the treatment of diabetes by stem cells, but the mechanism of stem / progenitor cell proliferation, differentiation and development need to be further studied in order to obtain a more effective therapeutic effect. In addition, studies show that the incidence of pancreatic cancer is increasing year by year, its early symptoms are not obvious, so far there is no effective early diagnosis method, and pancreatic cancer has strong invasion, high degree of malignancy, low resection rate and poor prognosis. The mortality rate is close to 100%, so it is very important to study the mechanism of pancreatic cancer cell proliferation and invasion, which provides the theoretical basis for early diagnosis and treatment of pancreatic cancer. MicroRNA miRNAs are a kind of important small molecule RNAs, which regulate the expression of target gene in posttranscriptional stage. Recognizing the target gene of miRNA is the key to understand its regulatory function. At the early stage of pancreatic development, low level Ptf1a promoted pancreatic progenitor cells to differentiate into endocrine direction, whereas high level Ptf1a promoted pancreatic progenitor cells to differentiate into exocrine direction. It is suggested that Ptf1a is a direct target gene of miR-18a, which regulates the fate of pancreatic progenitor cells by regulating the expression of Ptf1a. In addition, it has been shown that miR-18a plays an opposite role in colon cancer cell lines, especially miRNA, which inhibits the proliferation of human colon cancer cells, especially miR-19. Among miR-17-92 members, miR-18a is the only miRNA.miR-17-92 terminal folding structure that requires hnRNPA1 processing in the process of forming a mature IniRNA, which also reduces the editing efficiency of miR-18a during the formation of a mature miRNA. MiR-18a may act as a balanced miR-17-92 family to promote cancer. The effect of the occurrence of the disease. However, the role of miR-18a in regulating the proliferation of pancreatic progenitor cells and pancreatic cancer cells has not been reported. By overexpression of miR-18a in isolated pancreatic progenitor cells, we found that miR-18a could significantly inhibit the proliferation of pancreatic progenitor cells, PI3K/AKT signaling pathway and ERK signaling pathway, but the latter had no obvious effect. Through screening, identification and functional study of target genes, it was found that CTGF- NEDD9 IGF1 and CDK19 were target genes of miR-18a, but only interference with CTGF- NEDD9 and CDK19 could inhibit the proliferation of pancreatic progenitor cells. Both PI3K/AKT and ERK signaling pathway. MiR-18a regulated the proliferation of pancreatic progenitor cells by regulating CTGFN NEDD9 and CDK19. In pancreatic cancer cell line BXPC3 but not PANC-1, overexpression of miR-18a significantly inhibited the proliferation of cancer cells and the signal pathway of ERK, but did not inhibit the expression of endogenous miR-18a. NEDD9, one of the target genes of interference miR-18a, inhibited the proliferation of pancreatic cancer cell line BXPC3, but had no effect on PANC-1 cell line, but had little effect on ERK signaling pathway. The role of miRNA-18 a in pancreatic cancer cell line needs further study.
【學位授予單位】：東北林業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9

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本文編號：1921190