端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶線粒體轉(zhuǎn)位促進(jìn)肝癌細(xì)胞干性及耐藥的研究
本文選題:端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶 + 線粒體 ; 參考:《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年08期
【摘要】:目的探討人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse enzyme,hTERT)線粒體轉(zhuǎn)位對(duì)肝癌細(xì)胞干性及耐藥的影響。方法采用大劑量順鉑(CDDP)沖擊、間歇誘導(dǎo)的方法誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2、Huh7耐藥,構(gòu)建耐藥細(xì)胞株HepG2/CDDP、Huh7/CDDP,CCK-8檢測(cè)細(xì)胞耐藥能力;Western blot檢測(cè)細(xì)胞線粒體hTERT表達(dá)情況;激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞線粒體膜電位;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)耐藥細(xì)胞干性相關(guān)蛋白CD133、EpCAM表達(dá)情況;克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆形成能力;Western blot檢測(cè)耐藥細(xì)胞干性相關(guān)因子OCT-4蛋白表達(dá)水平變化。結(jié)果與親本細(xì)胞HepG2[耐藥指數(shù)(7.69±0.86)μg/m L及Huh7(7.18±0.35)μg/m L]相比,耐藥細(xì)胞株對(duì)CDDP耐藥指數(shù)明顯增加[HepG2(41.16±0.42)μg/m L,Huh7(33.48±0.33)μg/m L,P0.01],經(jīng)順鉑(CDDP)誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞線粒體hTERT表達(dá)顯著升高,線粒體膜電位增強(qiáng),CD133~+細(xì)胞比例[HepG2(1.44±0.41),HepG2/CDDP(23.15±1.55),P0.01]及EpCAM~+細(xì)胞比例[HepG2(0.85±0.10),HepG2/CDDP(3.96±0.10),P0.01]增加,克隆形成能力增強(qiáng),干性相關(guān)因子OCT-4蛋白表達(dá)水平增加。結(jié)論經(jīng)順鉑誘導(dǎo)的肝癌耐藥細(xì)胞線粒體hTERT轉(zhuǎn)位顯著增加,且具有明顯的腫瘤干細(xì)胞特征。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of mitochondrial translocation of human telomerase reverse transcriptase (telomerase reverse) enzyme hTERT on the dryness and drug resistance of hepatocellular carcinoma cells. Methods HepG _ 2 / CDDPH _ 7 cell line was induced by high dose of cisplatin (CDDP) shock and intermittent induction. The resistant cell line HepG2 / CDDPH7 / CDDPH7 / CDDPCCK-8 was constructed to detect the drug resistance ability of HepG2 / CDDPH7 / CDDPCCK-8 cells. Western blot was used to detect the expression of mitochondrial hTERT. The membrane potential of mitochondria was observed by laser confocal microscopy and the expression of CD133 / EpCAM was detected by flow cytometry. The expression of dry-related factor (OCT-4) protein in drug-resistant cells was detected by Western blot. Results compared with parental cell line HepG2 [drug resistance index 7.69 鹵0.86 渭 g / mL and Huh7(7.18 鹵0.35 渭 g / mL], the drug resistance index of drug resistant cell line to CDDP increased significantly [HepG2(41.16 鹵0.42 渭 g / m L Huh7H7H7 (33.48 鹵0.33) 渭 g / m L P0.01], and the expression of mitochondrial hTERT was significantly increased by cisplatin CDDP. The percentage of CD133~ cells increased by mitochondrial membrane potential [HepG2(1.44 鹵0.41 + HepG2 / CDDPN 23.15 鹵1.55 + P0.01] and the percentage of EpCAM~ cells [HepG2(0.85 鹵0.10Hep _ 2 / CDDPN _ (3.96 鹵0.10) P _ (0.01)], the clone formation ability was enhanced and the expression of OCT-4 protein was increased. Conclusion the mitochondrial hTERT translocation of drug-resistant hepatoma cells induced by cisplatin is significantly increased and has the characteristics of tumor stem cells.
【作者單位】: 第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院消化內(nèi)科;
【分類號(hào)】:R735.7
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,本文編號(hào):1917690
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