本文選題：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 + micro�。� 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景:膠質(zhì)瘤,又稱神經(jīng)膠質(zhì)瘤,發(fā)病率高,治療困難,其中惡性膠質(zhì)瘤和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)腦腫瘤,惡性程度極高,患者預(yù)后差,是僅次于胰腺癌和肺癌的對人類健康造成巨大影響的惡性疾病。目前膠質(zhì)瘤的發(fā)病原因尚不清楚,遺傳因素、病毒感染、頭部外傷、放射照射、免疫抑制劑、內(nèi)分泌和代謝紊亂等均可增加其發(fā)病率。關(guān)于膠質(zhì)瘤的分子遺傳學(xué)研究證實(shí),7號染色體出現(xiàn)原癌基因增多和10號染色體出現(xiàn)抑癌基因缺失以及一些基因如EGFR、c-erb B1、H-ras、gli、N-myc等基因的異常擴(kuò)增或表達(dá),以及一些抑癌基因的丟失或者表達(dá)下調(diào)等,都是膠質(zhì)瘤潛在的高危因素。mi RNA是一類長18-25個(gè)核苷酸的非編碼RNA小分子,通過靶向沉默靶基因發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后調(diào)控功能。mi RNA在機(jī)體幾乎無處不在,具有廣泛的生物學(xué)功能,尤其是在腫瘤發(fā)生發(fā)展以及腫瘤耐藥中mi RNA是機(jī)體不可或缺的調(diào)控分子,其調(diào)控機(jī)制和具體作用方式也是復(fù)雜的。依據(jù)mi RNA在腫瘤中的作用可簡單的劃分為抑癌mi RNA和癌mi RNA,而mi R-124和mi R-137均屬于抑癌mi RNA。雖然通過生物信息分析和一些實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)其抑癌功能,但是具體作用機(jī)制尚不清楚。本文擬尋找mi R-124和mi R-137新的作用靶點(diǎn),豐富其抑癌作用機(jī)制,同時(shí)為增強(qiáng)膠質(zhì)瘤化療耐藥敏感性提供新的候選策略。第一部分:mi R-124在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)細(xì)胞中的抑癌作用及機(jī)制研究目的:闡明mi R-124在GBM細(xì)胞中的抑癌機(jī)制及其在TMZ化療耐藥中的作用。方法:首先在GBM細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mi R-124 mimics過表達(dá)mi R-124然后給TMZ,檢測了細(xì)胞的凋亡情況。隨后構(gòu)建了RAD51-3'UTR表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行mi R-124與RAD51的雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)。通過q RT-PCR和Western blot檢測mi R-124過表達(dá)后RAD51在m RNA和蛋白水平的變化。瞬轉(zhuǎn)mi R-124 mimics后給予TMZ處理,通過對γH2AX和RAD51的間接免疫熒光染色,進(jìn)一步驗(yàn)證mi R-124與RAD51的靶標(biāo)關(guān)系。最后通過RAD51干涉驗(yàn)證RAD51在TMZ治療中的作用,并下載GEO數(shù)據(jù)分析RAD51表達(dá)量與GBM患者總體生存時(shí)間之間的關(guān)系。結(jié)果:Annexin V/PI檢測證實(shí)過表達(dá)mi R-124能促進(jìn)GBM細(xì)胞對TMZ的化療敏感性。DLR、q RT-PCR、Western blot以及間接免疫熒光染色等一系列實(shí)驗(yàn)證實(shí)RAD51是mi R-124的直接靶基因。凋亡結(jié)果顯示干涉RAD51同過表達(dá)mi R-124具有相似的生物學(xué)效應(yīng),均能夠增強(qiáng)GBM細(xì)胞對TMZ化療的敏感性。GEO數(shù)據(jù)生存分析證實(shí)RAD51表達(dá)量與GBM患者預(yù)后生存時(shí)間密切相關(guān),RAD51表達(dá)量低的患者生存時(shí)間較長。結(jié)論:mi R-124直接靶向沉默RAD51,提高了GBM細(xì)胞對TMZ的化療敏感性,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。第二部分:mi R-137在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)細(xì)胞中的抑癌作用及機(jī)制研究目的:闡明mi R-137在GBM細(xì)胞中的抑癌機(jī)制及其在TRAIL治療中的增敏作用。方法:首先在GBM細(xì)胞中瞬轉(zhuǎn)mi R-137 mimics過表達(dá)mi R-137然后給TRAIL,檢測了細(xì)胞的凋亡情況。隨后通過q RT-PCR和Western blot檢測從6個(gè)mi R-137潛在的靶分子中篩選出了XIAP基因,其在m RNA和蛋白水平均顯著下調(diào)。進(jìn)一步構(gòu)建了XIAP-3'UTR表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行mi R-137與XIAP的雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)。通過q RT-PCR檢測了15例臨床GBM標(biāo)本中mi R-137與XIAP表達(dá)水平的相關(guān)性。構(gòu)建mi R-137穩(wěn)定表達(dá)的慢病毒細(xì)胞株,并檢測其功能。在mi R-137穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株中恢復(fù)XIAP表達(dá)檢測凋亡比率。最后建立裸鼠皮下荷瘤模型驗(yàn)證mi R-137是否通過沉默XIAP增強(qiáng)TRAIL對GBM的治療效果。結(jié)果:過表達(dá)mi R-137后能促進(jìn)TRAIL對GBM細(xì)胞的殺傷作用,細(xì)胞凋亡率明顯增加。q RT-PCR和Western blot檢測證實(shí)過表達(dá)mi R-137后XIAP在m RNA和蛋白水平均顯著下調(diào)。DLR實(shí)驗(yàn)證實(shí)了mi R-137直接結(jié)合于XIAP的3'UTR。15例臨床標(biāo)本中mi R-137和XIAP基因表達(dá)量的Pearson's相關(guān)性分析顯示二者呈負(fù)相關(guān)。mi R-137穩(wěn)定表達(dá)的慢病毒細(xì)胞株構(gòu)建成功,“恢復(fù)”實(shí)驗(yàn)證實(shí)過表達(dá)mi R-137的細(xì)胞株中再次過表達(dá)XIAP后,mi R-137對TRAIL增敏的作用發(fā)生逆轉(zhuǎn)。體外裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)mi R-137通過直接靶向XIAP基因增強(qiáng)TRAIL敏感性,抑制裸鼠皮下腫瘤生長。結(jié)論:mi R-137直接靶向沉默XIAP,提高了GBM細(xì)胞對TRAIL的化療敏感性,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:This paper studies the role of mi R - 124 and mi R - 137 as an indispensable regulator for human health . 媯，

本文編號：1915924