發(fā)布時間：2018-05-20 18:04

  本文選題：肝癌 + 轉移　； 參考：《天津醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：目的:在世界范圍內,原發(fā)性肝癌(Hepatocellular caicinoma,HCC)是最常見的惡性腫瘤之一,而且其中半數(shù)以上的原發(fā)性肝癌新發(fā)和死亡病例在我國發(fā)生。目前,越來越多的研究發(fā)現(xiàn),在原發(fā)性肝癌中表達水平失調的microRNA與增殖、轉移、血管生成、凋亡、上皮-間質轉化等多個原發(fā)性肝癌的發(fā)生發(fā)展過程相關。因此,本研究的目的主要為在眾多的microRNA中,找出原發(fā)性肝癌中表達水平失調的microRNA,并研究表達水平失調的microRNA在原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展過程中對增殖、粘附、遷移、侵襲、凋亡、血管生成等重要生物學功能的影響,并對microRNA發(fā)揮作用的直接靶基因進行預測和驗證,來探究micro RNA在原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮作用的具體機制。方法:1、使用多種分析方法對美國國立生物技術信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)GEO數(shù)據(jù)庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)中公開發(fā)布的microRNA高通量芯片數(shù)據(jù)進行分析,初步篩選在原發(fā)性肝癌組織中表達水平失調的microRNA,并通過查閱分析文獻和具體分析microRNA芯片數(shù)據(jù)確定進一步研究的目標microRNA。2、用收集的原發(fā)性肝癌組織樣本和癌旁組織樣本,六種肝癌細胞系BEL-7402、SMMC-7721、SK-HEP-1、HuH-7、Hep G2、Li7以及人正常胎肝細胞系L02進行實時定量PCR實驗,驗證mi R-214-3p是否的確在原發(fā)性肝癌組織和細胞系中表達水平降低。3、對原發(fā)性肝癌組織的miR-214-3p表達水平和臨床病理信息進行相關性分析。4、將miR-214-3p mimics轉染入BEL-7402、SMMC-7721、SK-HEP-1三種肝癌細胞系,上調miR-214-3p的表達水平,并進行MTS增殖實驗、transwell遷移實驗和transwell侵襲實驗,來研究mi R-214-3p在原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展過程中對增殖、遷移、侵襲等重要生物學功能的影響。5、建立人肝癌裸鼠經(jīng)血途徑肺轉移模型,將預先用miR-214-3p agomir孵育的SK-HEP-1細胞經(jīng)尾靜脈注射接種入裸鼠體內,動物整體活體成像觀察后再取裸鼠肺進行成像觀察和HE病理染色,計數(shù)分析轉移灶。6、通過使用TargetScan等軟件預測miR-214-3p發(fā)揮作用的直接靶基因。7、通過臨床標本的miR-214-3p熒光原位雜交和HMGA1免疫熒光實驗分析HMGA1和miR-214-3p的共表達情況,并通過雙熒光素酶報告實驗來確定miR-214-3p是否特異性結合HMGA1基因的3’-UTR區(qū)。8、進行miR-214-3p的拯救實驗,即構建缺失3’-UTR的HMGA1過表達載體,與mi R-214-3p mimics共轉染入BEL-7402、SMMC-7721、SK-HEP-1三種肝癌細胞系,進行MTS增殖、transwell遷移和transwell侵襲實驗,來探究miR-214-3p多大程度上是通過HMGA1來影響下游的生物學功能。結果:1、分析GSE36915芯片數(shù)據(jù)后我們發(fā)現(xiàn):和非腫瘤肝臟組織相比,有49個較高豐度microRNA在原發(fā)性肝癌組織中的表達水平明顯降低,其中,miR-199a-2/214簇中的三個microRNA成熟體miR-214-3p、199a-5p、199a-3p均明顯下調,其中miR-214-3p降低幅度最大;與非腫瘤肝臟組織相比,85%(58/68)原發(fā)性肝癌組織中miR-214-3p的表達水平都明顯下調。2、芯片分析結果的驗證實驗證實了肝癌組織樣本中miR-214-3p的表達水平明顯低于癌旁組織樣本,此外六種人肝癌細胞系中miR-214-3p的表達水平也均明顯低于人正常胎肝細胞系L02。3、miR-214-3p的表達水平降低與原發(fā)性肝癌TNM分期(P=0.0002)、遠端轉移(P=0.0046)密切相關,但與年齡、性別、甲胎蛋白水平、腫瘤大小、肝硬化沒有明顯相關性。4、與對照組相比,BEL-7402、SMMC-7721和SK-HEP-1三種細胞在轉染miR-214-3p mimics 48小時后,增殖受到明顯抑制;遷移過transwell小室的細胞數(shù)量明顯減少;侵襲過transwell小室的細胞數(shù)量也明顯減少。5、miR-214-3p agomir組的動物整體活體成像熒光信號、肺成像熒光信號和肺轉移灶數(shù)量均顯著低于或少于miRcontrol agomir組(P值情況分別為P0.01、P0.05、P0.05)。6、在TargetScan和mi Randa兩大數(shù)據(jù)庫均顯示HMGA1為miR-214-3p的預測靶基因。7、肝癌臨床標本的miR-214-3p熒光原位雜交和HMGA1免疫熒光實驗結果顯示,miR-214-3p和HMGA1的表達呈負相關。雙熒光素酶報告基因實驗顯示miR-214-3p mimics對HMGA1 3’-UTR野生型報告載體組熒光素酶活性產(chǎn)生了明顯抑制作用(P0.01),而對3’-UTR突變型報告載體組熒光素酶活性則沒有明顯影響。8、拯救實驗表明過表達HMGA1可以減弱轉染miR-214-3p mimics對BEL-7402、SMMC-7721和SK-HEP-1三種肝癌細胞增殖、遷移及侵襲能力的抑制作用并接近對照細胞水平。結論:miR-199a-2/214簇中的三個microRNA成熟體miR-214-3p、199a-5p、199a-3p在肝癌中的表達均明顯下調;miR-214-3p通過靶向結合并下調HMGA1的表達來抑制肝癌細胞的增殖、遷移和侵襲。
[Abstract]:Objective : To investigate the role of micro RNA in the development of primary liver cancer . The expression level of miR - 214 - 3P was significantly lower than that of non - tumor liver tissues . Conclusion : The expression of miR - 214 - 3P , 199a - 5p , 199a - 3P in human hepatocellular carcinoma ( HCC ) is significantly lower than that of control cells .
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 遲寧;喝咖啡可降低肝癌的發(fā)病率[J];日本醫(yī)學介紹;2005年05期

2 吳孟超;;肝癌外科治療的近期進展[J];中國普外基礎與臨床雜志;2006年02期

3 張志敏;;肝癌會遺傳嗎?[J];肝博士;2006年03期

4 徐連根;周晶;雷偉;沈志祥;;瘦素及其受體在肝癌組織中的表達及意義[J];胃腸病學和肝病學雜志;2006年05期

5 魏麗珍;李勝棉;張楠;溫登瑰;周燁;王士杰;;688例肝癌患者發(fā)病特點及診療狀況分析[J];肝臟;2010年02期

6 ;我國科研人員發(fā)現(xiàn)促進肝癌生長和轉移的相關基因[J];臨床薈萃;2010年10期

7 吳生;;盤點誘發(fā)肝癌的7大元兇[J];肝博士;2012年01期

8 鄧慶華;一家四例肝癌報道[J];中國廠礦醫(yī)學;1995年06期

9 王定珠;;觥籌交錯 過度疲勞 肝癌乘機而入[J];健康博覽;2005年11期

10 笑山,吳蓉蓉;喝咖啡可以減少肝癌發(fā)生率[J];健康之路;2005年04期

相關會議論文 前10條

1 俞順章;穆麗娜;;飲水中藻類毒素與肝癌關系和控制的研究(摘要)[A];全國腫瘤流行病學和腫瘤病因學學術會議論文集[C];2007年

2 楊秉輝;;肝癌預防的新話題-非酒精性脂肪性肝病與肝癌[A];第十二屆全國肝癌學術會議論文匯編[C];2009年

3 丁光偉;楊玉秀;徐秋霞;徐存拴;;肝癌多基因表達異常初步研究[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學術會議論文匯編[C];2006年

4 吳孟超;;肝癌外科治療的近期進展[A];第三屆全國重型肝病及人工肝血液凈化學術年會論文集（上冊）[C];2007年

5 劉耕陶;孫華北;方亞南;;肝癌發(fā)生的化學預防[A];第十次中國生物物理學術大會論文摘要集[C];2006年

6 阮秀花;田蔥;張效本;張喜梅;;肝癌患者乙型肝炎病毒感染血清流行病學分析[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學術會議論文匯編[C];2006年

7 阮秀花;田蔥;張效本;張喜梅;;肝癌患者乙型肝炎病毒感染血清流行病學分析[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學術會議論文匯編[C];2006年

8 呂巖;韓學鋒;;肝癌患者需求的評估[A];中華醫(yī)學會醫(yī)學工程學分會第八次學術年會暨《醫(yī)療設備信息》創(chuàng)刊20周年慶祝會論文集[C];2006年

9 孫華;魏懷玲;劉耕陶;;雙環(huán)醇對化學毒物促發(fā)肝癌的防治作用及作用機制研究[A];2009醫(yī)學前沿論壇暨第十一屆全國腫瘤藥理與化療學術會議論文集[C];2009年

10 謝靜媛;戴煒;涂愛民;趙文高;符花;胡應龍;;深圳地區(qū)53例肝癌發(fā)生的相關因素探討[A];全國第2屆中西醫(yī)結合傳染病學術會議暨國家中醫(yī)藥管理局第1屆傳染病協(xié)作組會議論文匯編[C];2008年

相關重要報紙文章 前10條

1 湖北宜昌 胡獻國;吸煙與肝癌[N];上海中醫(yī)藥報;2013年

2 四川成都 孫清廉;遠離肝癌 謹防四大危險因素[N];上海中醫(yī)藥報;2013年

3 特約撰稿 北京朝陽醫(yī)院京西院區(qū)肝膽外科主任 孫文兵;警惕肝癌的過度治療[N];醫(yī)藥導報;2007年

4 健康時報特約記者 孫理;三招不得肝癌[N];健康時報;2008年

5 葉建平;專家提醒肝癌患者保護生命 重在“三早”防治[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

6 通訊員 韋夏 本報記者 鄧宏鷹 鐘少鴻;不良飲食習慣易誘發(fā)肝癌[N];中國食品報;2009年

7 記者 顧泳;我國肝癌患者占全球55%[N];解放日報;2010年

8 解放軍302醫(yī)院 劉士敬;四成肝癌酒精泡出來的[N];健康時報;2010年

9 記者 顏維琦 曹繼軍;我科學家揭示肝癌發(fā)生早期分子機制[N];光明日報;2012年

10 記者 胡德榮;肝癌發(fā)生早期階段分子機制被揭示[N];健康報;2012年

相關博士學位論文 前10條

1 于洋;miR-214-3p在肝癌中的功能及其機制研究[D];天津醫(yī)科大學;2017年

2 陳放;TOPK蛋白和肝癌發(fā)生以及相關調控機制的研究[D];復旦大學;2011年

3 張怡安;中樞神經(jīng)特異性RNA結合蛋白NOVA1在肝癌中的表達及其促進腫瘤發(fā)展的潛在分子機制探究[D];復旦大學;2014年

4 殷杰;E3泛素連接酶Prp19對肝癌侵襲的影響及其機制研究[D];復旦大學;2014年

5 周宇紅;分化抑制因子ID1在調控化療誘導的肝癌細胞“干性”改變中的作用研究[D];復旦大學;2014年

6 王盛;FOXA1基因變異和調控異常促，

本文編號：1915680