發(fā)布時間：2018-05-18 21:34

  本文選題：多發(fā)性骨髓瘤 + GANT61��； 參考：《承德醫(yī)學院》2017年碩士論文

【摘要】：目的:探索GANT61對體外培養(yǎng)的人多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226及U266中Notch信號通路的影響,并初步探討在多發(fā)性骨髓瘤細胞中Notch信號通路與Hedgehog信號通路之間的關(guān)系,為多發(fā)性骨髓瘤的基礎(chǔ)研究和靶向藥物的研制及開發(fā)提供實驗數(shù)據(jù)。方法:1細胞培養(yǎng):人多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226和U266,本實驗共分以下組別:空白對照組,2.5、5、10umol/L GANT61組。2采用CCK-8法檢測不同濃度的GANT61(2.5、5、10、20、30、40、50umol/L)處理RPMI8226和U266細胞株不同時間(18h、24h、36h)后細胞的增殖抑制率變化。3采用實時熒光定量PCR(RT-q PCR)檢測不同濃度的GANT61(2.5、5、10umol/L)處理上述MM細胞株不同時間(18h、24h、36h)后對于Notch信號通路中受體Notch1,配體Jagged1、Jagged2和靶基因Hes1的m RNA表達的影響。4采用蛋白免疫印跡(Western Blot)法檢測不同濃度的GANT61(2.5、5、10umol/L)處理上述MM細胞株不同時間(18h、24h、36h)后對于Notch信號通路中受體Notch1,配體Jagged1、Jagged2和靶基因Hes1蛋白表達的影響。結(jié)果:1采用CCK-8法檢測GANT61對MM細胞株的增殖抑制率不同濃度的GANT61(2.5、5、10、20、30、40、50umol/L)處理RPMI8226和U266細胞株18h、24h、36h后的增殖抑制率見圖1、2和表1、2,結(jié)果可見隨著GANT61濃度的增加及處理時間的延長,細胞的增殖抑制率逐漸增高,呈時間和濃度依賴性。同一時間,不同濃度GANT61的抑制率與空白對照組相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),組內(nèi)比較情況見表1、2,以24h為例,在RPMI8226細胞株中,2.5、5、10、20、30、40、50umol/L GANT61的抑制率分別為(0.13±0.02)%、(0.19±0.04)%、(0.30±0.01)%、(0.45±0.00)%、(0.58±0.02)%、(0.63±0.02)%、(0.70±0.02)%,而U266相對應的抑制率分別為(0.16±0.04)%、(0.25±0.02)%、(0.42±0.02)%、(0.53±0.01)%、(0.63±0.01)%、(0.71±0.05)%、(0.73±0.01)%;同一濃度不同時間的比較見表1、2,以5umol/LGANT61為例,18h、24h、36h的抑制率在RPMI8226中分別為(0.15±0.03)%、(0.19±0.04)%、(0.22±0.04)%,在U266中,分別為(0.23±0.00)%、(0.25±0.02)%、(0.36±0.04)%。根據(jù)該實驗結(jié)果,選取GANT61的濃度為2.5、5、10umol/L,時間選定18h、24h、36h進行后期實驗。2 GANT61對MM細胞株RPMI8226和U266中Notch1 m RNA和蛋白表達的影響2.1經(jīng)RT-q PCR分析,GANT61下調(diào)RPMI8226和U266細胞Notch1的m RNA表達。不同濃度的GANT61(2.5、5、10umol/L)處理MM細胞株24h后,與空白對照組比較,Notch1m RNA表達量隨GANT61濃度的增加逐漸減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);5umol/L GANT61處理MM細胞株不同時間(18h、24h、36h)后,與空白對照組相比,Notch1 m RNA的表達量隨處理時間的延長逐漸減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.2經(jīng)Western Blot分析,GANT61下調(diào)RPMI8226和U266細胞Notch1蛋白的表達。不同濃度的GANT61(2.5、5、10umol/L)處理MM細胞株24h后,與空白對照組比較,Notch1蛋白表達量隨GANT61濃度的增加逐漸減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);5umol/L GANT61處理MM細胞株不同時間(18h、24h、36h)后,與空白對照組相比,Notch1蛋白的表達量隨處理時間的延長逐漸減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3 GANT61對MM細胞株RPMI8226和U266中Jagged1、Jagged2m RNA和蛋白表達的影響3.1經(jīng)RT-q PCR分析,GANT61下調(diào)RPMI8226和U266細胞Jagged1、Jagged2的m RNA表達。不同濃度的GANT61(2.5、5、10umol/L)處理MM細胞株24h后,與空白對照組比較,Notch1m RNA表達量隨GANT61濃度的增加逐漸減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);5umol/L GANT61處理MM細胞株不同時間(18h、24h、36h)后,與空白對照組相比,Jagged1、Jagged2 m RNA的表達量隨處理時間的延長逐漸減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.2經(jīng)Western Blot分析,GANT61下調(diào)RPMI8226和U266細胞Jagged1、Jagged2蛋白的表達。不同濃度的GANT61(2.5、5、10umol/L)處理MM細胞株24h后,與空白對照組比較,Jagged1、Jagged2蛋白表達量隨GANT61濃度的增加呈現(xiàn)逐漸減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);5umol/L GANT61處理MM細胞株不同時間(18h、24h、36h)后,與空白對照組相比,Jagged1、Jagged2蛋白的表達量隨處理時間的延長逐漸減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4 GANT61對MM細胞株RPMI8226和U266中Hes1 m RNA和蛋白表達的影響4.1經(jīng)RT-q PCR相對定量分析,GANT61下調(diào)RPMI8226和U266細胞Hes1的m RNA表達。不同濃度的GANT61(2.5、5、10umol/L)處理MM細胞株24h后,與空白對照組比較,Hes1m RNA表達量隨GANT61濃度的增加逐漸減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);5umol/L GANT61處理MM細胞株不同時間(18h、24h、36h)后,與空白對照組相比,Hes1m RNA的表達量隨處理時間的延長逐漸減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.2經(jīng)Western Blot分析,GANT61下調(diào)RPMI8226和U266細胞Hes1蛋白的表達。不同濃度的GANT61(2.5、5、10umol/L)處理MM細胞株24h后,與空白對照組比較,Hes1蛋白表達量隨GANT61濃度的增加逐漸減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);5umol/L GANT61處理MM細胞株不同時間(18h、24h、36h)后,與空白對照組相比,Hes1蛋白的表達量隨處理時間的延長逐漸減少,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1 GANT61能夠抑制多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226和U266的生長,且這種增殖抑制作用具有時間和濃度依賴性。2 GANT61可以下調(diào)RPMI8226和U266細胞Notch信號通路中受體Notch1、配體Jagged1、Jagged2以及靶基因Hes1的m RNA和蛋白的表達,該抑制作用具有時間和濃度依賴性。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of GANT61 ( 2.5 , 5 , 10 , 20 , 30 , 40 , 50 渭mol / L ) on the expression of Notch1 , Jagged1 , Jagged2 and Hes1 in human multiple myeloma cell line RPMI8226 and U266 in vitro . The effects of GANT61 ( 2.5 , 5 , 10渭mol / L ) on the expression of Notch1mRNA and protein in human MM cell line RPMI8226 and U266 were significantly decreased with the increase of the concentration of GANT61 ( P0.05 ) . Compared with blank control group , the expression of Hes1 protein decreased gradually with the increase of the concentration of GANT61 ( P0.05 ) .
【學位授予單位】：承德醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R733.3

【參考文獻】

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2 惠吳函;田丁;;CALR基因突變在經(jīng)典骨髓增殖性腫瘤中的生物學特征及臨床意義[J];白血病·淋巴瘤;2015年07期

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本文編號：1907300