本文選題：神經(jīng)心理應(yīng)激 + 細胞凋亡　； 參考：《吉林大學》2016年博士論文

【摘要】：目的:有研究證實神經(jīng)心理應(yīng)激(NPS)和環(huán)腺苷酸反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)信號傳導通路與某些惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),但NPS和CREB與非小細胞肺癌(NSCLC)的相關(guān)研究鮮有報道。本研究擬通過建立肺腺癌荷瘤裸鼠模型,觀察NPS對肺腺癌荷瘤鼠腫瘤細胞生長和凋亡的影響,同時檢測NPS刺激作用下肺腺癌荷瘤鼠血清和腫瘤組織中一些重要神經(jīng)遞質(zhì)及受體的表達變化,研究NPS刺激作用下與CREB信號傳導通路相關(guān)的某些關(guān)鍵信號因子表達狀況,初步探討NPS對NSCLC腫瘤細胞生長、凋亡以及血清和腫瘤組織中重要神經(jīng)遞質(zhì)的影響,以及NPS對NCSLC中CREB信號傳導通路的作用機制,為今后NSCLC治療和預(yù)防提供新的策略和理論依據(jù)。材料與方法:選取雄性、6周齡、無胸腺裸鼠(Harlan Sprague Dawley Inc)64只,細胞株為人肺腺癌NCI-H441(濃度為3X106/0.2ml)。肺腺癌荷瘤裸鼠模型的建立:裸鼠腋窩皮下接種人肺腺癌NCI-H441細胞株0.2ml(濃度為3X106/0.2ml)。NPS暴露建立方法:每兩天一次定期更換各個籠具中裸鼠組成,使更換后每個籠具中各只裸鼠來自更換前不同的籠具,避免各個裸鼠之間重復(fù)出現(xiàn)在同一籠具,造成裸鼠持續(xù)處于NPS狀態(tài)。根據(jù)不同實驗條件,把荷瘤裸鼠分為四個實驗組、每組各16只;無NPS刺激組(CON組);有NPS刺激組(NPS組);NPS刺激同時應(yīng)用NPS抑制劑(GABA)組(N+G組);應(yīng)用NPS抑制劑GABA組但無NPS刺激(GABA組)。荷瘤裸鼠模型建立后NPS組和N+G組暴露于NPS條件下飼養(yǎng)四周,CON組和GABA組于正常條件下飼養(yǎng)四周。所有裸鼠均采用高壓滅菌嚙齒類動物專用飼料和無菌飲用水喂養(yǎng)。觀察每組荷瘤裸鼠一般狀態(tài)、腫瘤生長的體積及重量變化;腫瘤體積測量:腫瘤體積(mm3)=(長度/2)×(寬度2);四周后將實驗動物脫頸處死,摘除眼球取血清,完整剝離移植瘤并稱重;采用ELISA方法檢測血清中腎上腺素、去甲腎上腺素、考地松及環(huán)磷酸腺苷(c AMP)的濃度(ng/ml);采用Tunnel方法測定移植瘤腫瘤細胞凋亡狀況:采用原位細胞凋亡檢測試劑盒,用熒光素標記;凋亡細胞判定標準:鏡下見部分腫瘤細胞體積縮小,核質(zhì)濃縮,核膜核仁破碎;凋亡細胞染色主要定位于細胞核,呈黃褐色,少量可見細胞漿彌散;凋亡指數(shù)(A1):=凋亡細胞數(shù)/(凋亡細胞數(shù)十正常細胞數(shù))。Western blotting檢測腫瘤組織中β1、β2腎上腺受體、煙堿型乙酰膽堿受體3、5、7(n ACh R3、5、7)、及CREB信號傳導中通路CREB、磷酸化環(huán)腺苷酸反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(p-CREB)、蛋白激酶A(PKA)的表達;結(jié)果應(yīng)用Phoretix ID軟件灰度掃描,其數(shù)值為相應(yīng)蛋白與內(nèi)參蛋白(GAPDH)相除得到的相對光密度值。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示,四個實驗組組間比較采用方差分析,組內(nèi)兩兩比較采用q檢驗,百分率差異檢驗采用x2檢驗,P0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。結(jié)果:(1)不同實驗條件下移植瘤體積及重量:NPS組、CON組、N+G組和GABA組移植瘤體積分別為105.60±24.53mm3、80.21±21.84mm3、65.02±17.96mm3、49.61±15.74 mm 3,四組比較差異有統(tǒng)計學意義(P=0.031),NPS組體積明顯大于CON、N+G和GABA組(P=0.046,P=0.039,P=0.021,P=0.008);NPS組、CON組、N+G組、GABA組移植瘤的重量分別為0.17±0.09g、0.12±0.10g、0.11±0.06g、0.10±0.07g,四組重量明顯不同且差異有統(tǒng)計學意義(P=0.011):NPS組重量明顯大于CON、N+G、GABA組(P=0.027,P=0.023,P=0.003)。(2)不同實驗條件下肺腺癌荷瘤鼠血清中神經(jīng)遞質(zhì)的表達:腎上腺素濃度在NPS組、CON組、N+G組和GABA組分別為2.37±0.72 ng/ml、1.96±0.84 ng/ml、1.83±1.07 ng/ml、1.20±0.58 ng/ml,四組比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.344)。去甲腎上腺素濃度在NPS組、CON組、N+G組和GABA組分別為15.61±3.94ng/ml、9.98±1.76ng/ml、10.28±2.41ng/ml、8.00±1.21ng/ml,四組相比NPS組濃度增高且具有統(tǒng)計學意義(P=0.026),NPS組分別與CON組、N+G組、GABA組比較濃度明顯增高(P=0.026,P=0.015,P=0.011)�？嫉厮蓾舛仍贜PS組、CON組、N+G組和GABA組分別為5.71±0.94ng/ml、4.03±1.20ng/ml、3.20±0.83 ng/ml、2.63±0.58ng/ml,四組數(shù)值差異明顯且有統(tǒng)計學意義(P=0.000),NPS組分別與CON組、N+G組、GABA組比較濃度明顯增高(P=0.001,P=0.000,P=0.000)。環(huán)磷酸腺苷濃度在NPS組、CON組、N+G組、GABA組分別為29.56±3.90ng/ml、4.75±1.06ng/ml、14.31±2.50ng/ml、10.71±2.74ng/ml,各組之間相比具有統(tǒng)計學意義(P=0.003),NPS組分別與CON組、N+G組、GABA組相比濃度明顯增高(P=0.000,P=0.020,P=0.009)。(3)不同實驗條件下肺腺癌荷瘤鼠腫瘤細胞凋亡:NPS組移植瘤組織中細胞凋亡率為26.2%;N+G組凋亡率為52.4%;GABA組凋亡率為58.6%;CON組凋亡率為41.8%。四組凋亡率比較差異明顯且有統(tǒng)計學意義(P=0.028);NPS組細胞凋亡率明顯低于CON組、N+G組、GABA組(P=0.034,P=0.021,P=0.026)。(4)Western blotting檢測不同實驗條件下肺腺癌荷瘤鼠β1、2腎上腺受體、n ACh R3、5、7及CREB、p-CREB和PKA的表達結(jié)果:移植瘤腫瘤組織中β1腎上腺受體的表達在NPS組、CON組、N+G組和GABA組分別為0.54±0.28、0.26±0.14、0.27±0.11、0.20±0.14,四組差異具有明顯的統(tǒng)計學意義(P=0.004),NPS組與CON組、N+G組、GABA組相比β1腎上腺受體表達明顯增高(P=0.003,P=0.005,P=0.001)。移植瘤腫瘤組織中β2腎上腺受體的表達在NPS組、CON組、N+G組和GABA組分別為0.83±0.33、0.378±0.17、0.41±0.19、0.38±0.15,四組比較差異明顯(P=0.001),NPS組與CON組、N+G組、GABA組相比表達明顯增高(P=0.001,P=0.002,P=0.001)。CREB蛋白表達在NPS組、CON組、N+G組和GABA組分別為0.39±0.09、0.31±0.20、0.36±0.11、0.32±0.18,四組比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.971)。P-CREB蛋白表達在NPS、CON、N+G、GABA組分別為0.39±0.17、0.21±0.11、0.16±0.08、0.09±0.06,四組比較有明顯差異且有統(tǒng)計學意義(P=0.011),NPS組P-CREB水平與CON組、N+G組、GABA組比較表達明顯增高(P=0.043,P=0.013,P=0.001)。PKA蛋白表達在NPS、CON、N+G、GABA組分別為0.73±0.32、0.17±0.06、0.28±0.16、0.19±0.10,有顯著的統(tǒng)計學差異(P=0.042),NPS組分別與CON組、N+G組、GABA組比較表達明顯增高(P=0.010,P=0.034,P=0.026)。n ACh R3蛋白表達在NPS組、CON組、N+G組和GABA組分別為0.27±0.11、0.15±0.06、0.17±0.05、0.10±0.03,差異無統(tǒng)計學意義(P=0.344)。n ACh R5蛋白在NPS、CON、N+G、GABA組分別為0.39±0.12、0.17±0.07、0.17±0.06、0.08±0.05,四組比較有明顯差異(P=0.014),NPS組分別與CON組、N+G組、GABA組比較表達明顯增高(P=0.026,P=0.024,P=0.002)。n ACh R7蛋白在NPS、CON、N+G、GABA組分別為0.32±0.11、0.08±0.01、0.03±0.02、0.12±0.10,四組之間差異明顯,有統(tǒng)計學意義(P=0.019),NPS組分別與CON組、N+G組、GABA組比較表達明顯增高(P=0.013,P=0.003,P=0.035)。結(jié)論:神經(jīng)心理應(yīng)激可促進肺腺癌荷瘤裸鼠腫瘤的生長、增殖及抑制腫瘤細胞的凋亡,同時可引起肺腺癌荷瘤鼠血清中神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素、考地松的釋放以及部分β腎上腺素能受體和乙酰膽堿受體明顯增高;神經(jīng)心理應(yīng)激對肺腺癌荷瘤裸鼠腫瘤的影響與神經(jīng)遞質(zhì)釋放和激活CREB信號通路相關(guān);抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ氨基丁酸能夠抑制NPS引起的神經(jīng)遞質(zhì)(去甲腎上腺素、考地松)的釋放、β腎上腺素能受體和乙酰膽堿受體的表達并影響肺腺癌荷瘤裸鼠腫瘤的生長及增殖。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of NPS on tumor cell growth and apoptosis in lung adenocarcinoma , and to investigate the effect of NPS on tumor cell growth and apoptosis in lung adenocarcinoma . The results were as follows : ( 1 ) The volume and weight of the transplanted tumor were 105.60 鹵 24.53 mm3 , 80.21 鹵 21.84mm3 , 65.02 鹵 17.96mm3 , 49.61 鹵 15.74 mm 3 , 65.02 鹵 17.96mm3 , 49.61 鹵 15.74 mm respectively . The concentrations of norepinephrine in NPS , CON , N + G and GABA were 15.61 鹵 3.94ng / ml , 9.98 鹵 1.76ng / ml , 9.98 鹵 1.76ng / ml , 10.28 鹵 2.41ng / ml , 8.00 鹵 1.21 ng / ml , respectively . In the group of NPS , CON group , N + G group and GABA group were 5.71 鹵 0.94 ng / ml , 4.03 鹵 1.20 ng / ml , 3.20 鹵 0.83 ng / ml , 2.63 鹵 0.58 ng / ml , respectively . The expressions of 尾 - 1 , 2 - adrenoceptors , n , R3 , 5 , 7 , CREB , p - CREB in the group of N + G and GABA were significantly higher than those in the CON group , the CON group , the N + G group and the GABA group ( P = 0.021 , P = 0.026 ) .

【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 高永娟,曹根濤,殷剛,王鑫,季朝能,顧少華,倪曉華;CREB4基因的表達譜分析和功能初步研究(英文)[J];遺傳學報;2005年09期

2 陳志斌;管強;曹學兵;徐巖;王嵐;孫圣剛;;Effect of Antisense FosB and CREB on the Expression of Prodynor- phin Gene in Rats with Levodopa-induced Dyskinesias[J];華中科技大學學報(醫(yī)學英德文版);2006年05期

3 耿義群;蘇敏;徐小虎;田東萍;關(guān)計添;王艷;;低硒飲食對發(fā)育期大鼠腦氧化代謝及CREB表達的影響[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2006年06期

4 毛鳳霞;姚梅玲;;CREB與學習記憶及情緒關(guān)系[J];醫(yī)藥論壇雜志;2008年22期

5 劉明月;胡園;穆麗華;黃志雄;余冰穎;劉屏;;基于CREB通路研究3,6'-二芥子酰基蔗糖的神經(jīng)保護分子機制[J];中國藥理學與毒理學雜志;2012年03期

6 張正洪;曲鵬;方秀斌;;降鈣素基因相關(guān)肽對局灶性腦缺血再灌注大鼠海馬CREB和磷酸化CREB的上調(diào)作用[J];解剖學雜志;2007年02期

7 暢曉燕,方家椿,王耐勤,劉彤,蘇虹;8-氯腺苷通過磷酸化修飾提高轉(zhuǎn)錄因子CREB的活性[J];癌癥;2003年04期

8 張廣輝;王超峰;;CREB依賴的突觸長時程增強[J];中國醫(yī)學物理學雜志;2011年04期

9 宋海龍;鄭焱;王曉民;;CREB信號通路在神經(jīng)系統(tǒng)中的調(diào)控及功能[J];中國生物化學與分子生物學報;2013年09期

10 張瑞新,聶紅,祁金順,喬健天;單側(cè)外周傷害性刺激誘發(fā)大鼠脊髓中轉(zhuǎn)錄因子CREB的雙側(cè)磷酸化(英文)[J];神經(jīng)解剖學雜志;2002年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 毛鳳霞;;CREB與學習記憶及情緒關(guān)系[A];經(jīng)濟策論（下）[C];2011年

2 劉明月;胡園;穆麗華;黃志雄;余冰穎;劉屏;;基于CREB通路研究3,6′-二芥子�；崽堑纳窠�(jīng)保護分子機制[A];第十五屆中國神經(jīng)精神藥理學學術(shù)會議論文摘要[C];2012年

3 劉健;張濤;何秀娟;許蜀閩;王培勇;;主動脈平滑肌細胞鈣信號與CREB活性的關(guān)系[A];第八次全國動脈硬化性疾病學術(shù)會議論文集[C];2005年

4 Shuaishuai Huang;Ren Yu;Ping Wang;Xue Wang;Rong Fang;Jeff X.Zhou;;CaSR-increased[Ca~(2+)]i,modulates cytoskeletal subtype genes through transcriptional regulation of CREB in cancer cells[A];華東六省一市第22屆解剖與組織胚胎學學術(shù)年會暨山東解剖學會成立60周年紀念大會論文匯編[C];2013年

5 李軍;曹紅;李國政;連慶泉;;CREB與缺血性腦損傷[A];2008年第七次華東六省一市麻醉學學術(shù)會議暨浙江省麻醉學術(shù)年會論文匯編（上冊）[C];2008年

6 Yu-xian Yan;Yong Guo;Yuan Zhang;Yue-ying Song;Yuan-wei Gong;Qi Lv;Chen-yan Wang;Xi-zheng Zhang;;Mechanical Strain regulates osteoblast proliferation through Ca~(2+)-CaMK-CREB Signal Pathway[A];第十屆全國生物力學學術(shù)會議暨第十二屆全國生物流變學學術(shù)會議論文摘要匯編[C];2012年

7 高亞南;高歌;龍彩瑕;李俊發(fā);;重復(fù)性低氧對小鼠腦內(nèi)CREB磷酸化及蛋白表達的影響[A];中國神經(jīng)科學學會第六屆學術(shù)會議暨學會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

8 胡海燕;張瑞;張永芳;夏宗勤;胡雅兒;;CREB在知母皂苷元調(diào)節(jié)M1受體中的作用[A];第九屆中國中西醫(yī)結(jié)合實驗醫(yī)學學術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

9 胡海燕;張瑞;張永芳;夏宗勤;胡雅兒;;CREB在知母皂苷元調(diào)節(jié)M1受體中的作用[A];中國核科學技術(shù)進展報告——中國核學會2009年學術(shù)年會論文集（第一卷·第9冊）[C];2009年

10 涂海軍;許嬋娟;PHILIPPE RONDARD;JEAN-PHILIPPE PIN;劉劍峰;;GABA_BR介導的CREB信號轉(zhuǎn)導機制研究[A];中國藥理學會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學術(shù)會議論文集[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前3條

1 邁文;CREB1可致女性抑郁癥[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

2 日信;CREB基因活化可提高記憶力[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

3 余志平 編譯;尋找逝去的記憶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 應(yīng)達時;舒郁顆粒對抑郁模型大鼠行為學及海馬組織內(nèi)BDNF、CREB、Bcl-2表達的影響[D];長春中醫(yī)藥大學;2015年

2 張克劍;神經(jīng)心理應(yīng)激對肺腺癌荷瘤裸鼠CREB信號傳導通路作用研究[D];吉林大學;2016年

3 楊慧鵬;昆蟲CREB激活機制及Arrestin蛋白功能的研究[D];浙江大學;2013年

4 鄧亮;CREB-1在TGF-β3抗肝纖維化中的作用[D];華中科技大學;2013年

5 黃金明;CREB-1載體的構(gòu)建及其對HSC中內(nèi)源性TGF-β3分泌的影響[D];華中科技大學;2012年

6 譚蕾;CREB信號通路在氯胺酮致發(fā)育期大鼠海馬神經(jīng)毒性中的作用[D];華中科技大學;2009年

7 黃文晉;ERK1/2，CREB和aczonin在神經(jīng)系統(tǒng)中功能的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學;2000年

8 曹根濤;人類基因CREB4和4.10的克隆和功能研究[D];復(fù)旦大學;2004年

9 謝敏;NR2B介導的泛素-蛋白酶體系統(tǒng)成分的功能障礙對CREB活性的影響[D];華中師范大學;2014年

10 江雙紅;CREB在氧誘導小鼠視網(wǎng)膜新生血管的作用及機制研究[D];武漢大學;2013年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 王培軍;CREB在急性髓細胞白血病和骨髓增生異常綜合征中的表達及其臨床意義[D];華中科技大學;2011年

2 林浴坤;從氧化應(yīng)激及CREB信號轉(zhuǎn)導通路探討電針對局灶性腦缺血模型大鼠學習記憶的影響[D];福建中醫(yī)藥大學;2015年

3 馮利飛;CREB3L1和PTN在人腦膠質(zhì)瘤中的表達及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 宋娜娜;企鵝珍珠貝Creb基因克隆分析及黑色素合成抑制劑和增強劑對幼貝生長性狀影響的研究[D];廣東海洋大學;2015年

5 王雪;轉(zhuǎn)錄因子CREB在腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機制研究[D];寧波大學;2015年

6 肖慧;轉(zhuǎn)錄因子CREB對TNFAIP1基因調(diào)控作用的研究[D];湖南師范大學;2015年

7 高永娟;人類基因CREB4的功能初步研究[D];華東師范大學;2005年

8 劉永強;人CREB4轉(zhuǎn)核機制的初步研究[D];華東師范大學;2006年

9 劉明月;基于CREB-BDNF信號轉(zhuǎn)導通路研究開心散及其主要成分3，，6'-二芥子�；崽谴偕窠�(jīng)保護和抗抑郁的作用機制[D];河北北方學院;2013年

10 汪婷婷;開心散代表性成分激活CREB-BDNF信號轉(zhuǎn)導通路的藥物—網(wǎng)絡(luò)靶標研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2014年

本文編號：1894296