本文選題：直腸癌 + miR-a�。� 參考：《中國病理生理雜志》2017年05期

【摘要】：目的:研究miR-23a和上皮剪接調(diào)節(jié)蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)在直腸癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá),以及對體外直腸癌細(xì)胞活力和凋亡的作用。方法:采用RT-q PCR分析miR-23a在36例直腸癌組織和癌旁組織中的表達(dá),免疫組化檢測ESRP1在直腸癌組織中的表達(dá),分析miR-23a和ESRPl在直腸癌組織中的相關(guān)性;利用RT-q PCR檢測miR-23a在直腸癌Caco-2和SW480細(xì)胞及人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞株NCM460中的表達(dá);合成miR-23a inhibitor和inhibitor陰性對照(inhibitor NC),并將其分別轉(zhuǎn)染至SW480細(xì)胞后,通過CCK-8法檢測miR-23a inhibitor轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞后對細(xì)胞活力的影響,流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡率,Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲;通過Western blot技術(shù)檢測SW480細(xì)胞中ESRPl蛋白的表達(dá);構(gòu)建野生型pGL3-ESRP1-3’UTR(wt-pGL3-ESRP1-3’UTR)或突變型pGL3-ESRP1-3’UTR(mut-pGL3-ESRP1-3’UTR)質(zhì)粒,并分別與miR-23a inhibitor或inhibitor NC共轉(zhuǎn)染至HEK293和SW480細(xì)胞中,利用雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒說明檢測雙螢光素酶活性;將ESRP1 mimic或mimic NC瞬時轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞后,CCK-8法和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測細(xì)胞活力和凋亡;Western blot法檢測瞬轉(zhuǎn)ESRP1 mimic后對ESRP1、caspase-3、Smac和XIAP蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:miR-23a和ESRP1在直腸癌組織的表達(dá)較癌旁正常組織分別上調(diào)和下調(diào),兩者呈明顯負(fù)相關(guān)(P0.01);miR-23a的表達(dá)與直腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤浸潤深度相關(guān);與NCM460細(xì)胞相比較,miR-23a在SW480細(xì)胞中的表達(dá)量顯著上調(diào)(P0.01);轉(zhuǎn)染miR-23a inhibitor后,SW480細(xì)胞活力較inhibitor NC組顯著下降(P0.01);轉(zhuǎn)染miR-23a inhibitor后SW480細(xì)胞早期凋亡率明顯升高,同時細(xì)胞體外侵襲能力受到抑制;螢光素酶報告基因結(jié)果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;轉(zhuǎn)染miR-23a inhibitor至SW480細(xì)胞后ESRP1蛋白表達(dá)水平明顯升高;ESRP1 mimic轉(zhuǎn)染SW480細(xì)胞后可抑制細(xì)胞活力并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,同時上調(diào)caspase-3和Smac的表達(dá),下調(diào)XIAP的表達(dá)。結(jié)論:miR-23a可通過負(fù)向調(diào)控下游靶基因ESRP1從而影響直腸癌細(xì)胞生長和凋亡。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of miR-23a and ESRP1 in rectal cancer tissues and cell lines, and the effects of ESRP1 on the viability and apoptosis of rectal cancer cells in vitro. Methods: RT-q PCR was used to analyze the expression of miR-23a in 36 cases of rectal cancer and adjacent tissues. Immunohistochemical staining was used to detect the expression of ESRP1 in rectal cancer. The correlation between miR-23a and ESRPl in rectal carcinoma was analyzed. RT-q PCR was used to detect the expression of miR-23a in Caco-2 and SW480 cells and normal colonic epithelial cell line NCM460, miR-23a inhibitor and inhibitor negative control inhibitor NCX were synthesized and transfected into SW480 cells, respectively. The effect of miR-23a inhibitor transfection on the viability of SW480 cells was detected by CCK-8, apoptosis rate was detected by flow cytometry and cell invasion was detected by transwell chamber assay, and the expression of ESRPl protein in SW480 cells was detected by Western blot technique. The wild-type pGL3-ESRP1-3 UTR-wt-pGL3-ESRP1-3UTR) or mutant pGL3-ESRP1-3USRP1-3UTR) plasmid were constructed and cotransfected with miR-23a inhibitor or inhibitor NC into HEK293 and SW480 cells. After transient transfection of ESRP1 mimic or mimic NC into SW480 cells, CCK-8 assay and flow cytometry were used to detect the cell viability and apoptosis. Western blot assay was used to detect the effect of ESRP1 mimic on the expression of ESRP1caspase-3 and XIAP protein. Results the expression of miR-23a and ESRP1 were up-regulated and down-regulated in rectal cancer tissues, respectively. There was a significant negative correlation between the expression of MR-23a and lymph node metastasis and depth of tumor invasion. Compared with NCM460 cells, the expression of miR-23a in SW480 cells was significantly up-regulated, and the viability of SW480 cells was significantly lower than that of inhibitor NC group. The early apoptotic rate of SW480 cells was significantly increased after miR-23a inhibitor transfection, and the invasion ability of SW480 cells was inhibited in vitro. The results of luciferase reporter gene showed that ESRP1 was the direct target gene of miR-23a, and the expression of ESRP1 protein increased significantly after transfection of miR-23a inhibitor to SW480 cells. ESRP1 protein expression in SW480 cells was inhibited and apoptosis induced by ESRP1 mimic, and the expression of caspase-3 and Smac was up-regulated. The expression of XIAP was down-regulated. Conclusion the growth and apoptosis of rectal cancer cells can be affected by the negative regulation of downstream target gene ESRP1.
【作者單位】： 紹興第二醫(yī)院肛腸外科;岳陽市一人民醫(yī)院胃腸外科;
【基金】：岳陽市2014年第三批科技資助項目
【分類號】：R363;;R735.3+7

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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