發(fā)布時(shí)間：2018-05-13 23:21

  本文選題：ADAM基因 + Notch信號(hào)通路��； 參考：《中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志》2017年04期

【摘要】：目的:探討干擾ADAM10基因?qū)Χ喟l(fā)性骨髓瘤MM.1S細(xì)胞增殖與凋亡的影響及其作用機(jī)制。方法:設(shè)計(jì)4對(duì)針對(duì)ADAM10 mRNA不同位點(diǎn)的shRNA編碼序列,分別連接到慢病毒載體質(zhì)粒p LVshRNA-EGFP(2A)Puro中去,構(gòu)建sh/ADAM10-1,sh/ADAM10-2,sh/ADAM10-3,sh/ADAM10-4和sh/Con;將重組質(zhì)粒與慢病毒包裝質(zhì)粒及包膜質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞,收獲病毒顆粒,濃縮后測(cè)定病毒滴度,感染MM.1S細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)分選GFP+細(xì)胞。利用實(shí)時(shí)定量PCR及Westem blot檢測(cè)慢病毒載體介導(dǎo)的shRNA干擾ADAM10基因的作用。選取ADAM10下調(diào)最顯著的細(xì)胞株,CCK-8法檢測(cè)干擾ADAM10后細(xì)胞的增殖,Annexin V/7-AAD雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞存活與凋亡,定量PCR檢測(cè)促凋亡基因BAD、BAK、BIK抑凋亡基因BCL-2、c-Myc以及Notch1及其下游靶基因Hes-1的轉(zhuǎn)錄變化。結(jié)果:成功構(gòu)建了特異性干擾ADAM10表達(dá)的慢病毒載體,干擾ADAM10基因?qū)M.1S細(xì)胞的增殖具有抑制作用,并能誘導(dǎo)MM.1S細(xì)胞的凋亡,且促凋亡基因BAD、BAK表達(dá)升高,抑凋亡基因BCL-2、c-Myc表達(dá)降低。Q-PCR結(jié)果顯示,干擾ADAM10后Notch1水平升高,Hes-1水平降低。結(jié)論:干擾ADAM10基因可顯著抑制MM.1S細(xì)胞的增殖,促進(jìn)其凋亡,其機(jī)制與Notch1信號(hào)通路有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect and mechanism of interfering ADAM10 gene on proliferation and apoptosis of multiple myeloma MM.1S cells. Methods: four pairs of shRNA coding sequences aimed at different sites of ADAM10 mRNA were designed and ligated into lentivirus vector p LVshRNA-EGFP(2A)Puro, respectively, to construct sh/ ADAM10-1 / ADAM10-2 / ADAM10-3shr / ADAM10-4 and shrCon.Recombinant plasmids were co-transfected with lentivirus packaging plasmids and encapsulated plasmids into 293FT cells to harvest viral particles. After concentration, virus titers were detected, MM.1S cells were infected, and GFP cells were sorted by flow cytometry. The effect of shRNA mediated by lentivirus vector on ADAM10 gene was detected by real time quantitative PCR and Westem blot. ADAM10 down-regulated cell line (CCK-8) was selected to detect cell proliferation after interfering with ADAM10 by Annexin V/7-AAD double staining flow cytometry to detect cell survival and apoptosis. Quantitative PCR was used to detect the transcription changes of BCL-2BIK, BCL-2c-Myc, Notch1 and its downstream target gene Hes-1. Results: the lentivirus vector which specifically interfered with the expression of ADAM10 was successfully constructed. Interfering ADAM10 gene could inhibit the proliferation of MM.1S cells and induce the apoptosis of MM.1S cells. The results of Q-PCR showed that the level of Notch1 increased after interfering with ADAM10 and decreased the level of Hes-1. Conclusion: interfering with ADAM10 gene can significantly inhibit the proliferation and promote the apoptosis of MM.1S cells, and its mechanism is related to the Notch1 signaling pathway.
【作者單位】： 徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81570183)
【分類(lèi)號(hào)】：R733.3

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本文編號(hào)：1885282