發(fā)布時(shí)間：2018-05-13 15:22

  本文選題：膽管癌 + 光動(dòng)力��； 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：研究背景和目的膽管癌(CC)是僅次于原發(fā)性肝癌的肝膽原發(fā)性惡性腫瘤,也是膽道系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤。它起源于肝內(nèi)外膽管上皮細(xì)胞,約占所有消化系統(tǒng)腫瘤的3%左右。在過去幾年,內(nèi)鏡技術(shù)逐漸提高,人們對(duì)膽管癌的了解也越來越多,全世界該病的發(fā)病率和死亡率在逐年上升。膽管癌的預(yù)后非常差,死亡率很高。膽管癌最常見的危險(xiǎn)因素包括原發(fā)性硬化性膽管炎(伴有或不伴有潰瘍性結(jié)腸炎)、肝硬化以及乙肝、丙肝等病毒性肝炎。而膽管癌最常見的臨床表現(xiàn)就是膽道梗阻,例如梗阻性黃疸,白陶土色大便,橘黃色小便,皮膚瘙癢等等。外科手術(shù)切除是膽管癌的唯一根治性治療方法。但是由于診斷方法(CT,MRI,血液學(xué)檢測(cè))的不足,大部分膽管癌患者在診斷時(shí)已處于晚期階段。大約超過70%的膽管癌患者在診斷時(shí)已經(jīng)處于無法手術(shù)切除階段。同時(shí)手術(shù)治療還伴有較高的并發(fā)癥發(fā)生率和較高的復(fù)發(fā)率。因此,應(yīng)用其他姑息性治療方法緩解膽管癌的膽道梗阻癥狀對(duì)病人來說具有重要的意義,尤其是對(duì)于無法手術(shù)切除的膽管癌患者。內(nèi)鏡支架置入術(shù)作為一種被廣泛接受的姑息性治療方法,能有效地改善無法手術(shù)切除的膽管癌患者膽道梗阻癥狀,提高患者的生存質(zhì)量。而金屬支架相比塑料支架擁有更長的支架通暢期。但是膽道支架置入同時(shí)也伴有支架再次梗阻的問題,也無法延長膽管癌患者的生存期。而膽管癌對(duì)其他傳統(tǒng)治療方法(如放療、化療)也不敏感。因此尋找新型的膽管癌治療方法目前具有重要的臨床意義。光動(dòng)力治療(photodynamic therapy,PDT)作為一種新型微創(chuàng)治療方法,目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于膀胱癌、食管癌、前列腺癌、頭頸部腫瘤等多種實(shí)體腫瘤的治療,并取得了顯著的治療效果。PDT主要包括三個(gè)基本要素:光敏劑、激光、氧。大量體內(nèi)、體外和臨床研究已經(jīng)證實(shí)PDT對(duì)于緩解無法手術(shù)切除的膽管癌患者的膽道梗阻、提高患者生存質(zhì)量和延長患者生存期具有顯著的效果。但是PDT同樣伴有一定的副作用:嚴(yán)重的光毒性和較長的治療后避光時(shí)間,為了避免PDT這些不足之處,研發(fā)高效能和低毒性的新型光敏劑對(duì)于PDT治療膽管癌領(lǐng)域具有重要的意義。因此本實(shí)驗(yàn)的研究目的就是評(píng)估一種新型光敏劑HCE6對(duì)膽管癌的治療作用,并探討相關(guān)的作用機(jī)制。研究方法用含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)膽管癌細(xì)胞系FRH-0201和QBC-939。取對(duì)數(shù)期生長的細(xì)胞接種于96孔板中,接種數(shù)為1′104/孔。培養(yǎng)24h后分別以不同濃度的HCE6(0,0.5,1,2,4,8 ug/ml)孵育24h,以不同激光強(qiáng)度(2.5,5,10,15 J/cm2)的波長為652nm的激光照射。照射完后繼續(xù)避光培養(yǎng)24h,CCK8方法檢測(cè)細(xì)胞增殖率和增殖抑制率,探討HCE6介導(dǎo)的PDT的藥物濃度-療效、光照強(qiáng)度-療效關(guān)系。為了探討HCE6孵育時(shí)間對(duì)PDT作用結(jié)果的影響,我們分別將FRH-0201細(xì)胞以HCE6處理3h、6h、12h、24h,然后以10J/cm2的激光照射,同樣以CCK8法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖抑制率,評(píng)估最佳藥物作用時(shí)間。為了比較HCE6與傳統(tǒng)光敏劑喜泊分(HiPorfin)和Photofrin的PDT效果,我們將接種的細(xì)胞分為三組:HCE6介導(dǎo)PDT組;HiPorfin介導(dǎo)PDT組;Photofrin介導(dǎo)PDT組。各組細(xì)胞分別以2μg/ml的相應(yīng)光敏劑避光孵育24h,然后以10J/cm2的激光照射,CCK8法評(píng)估膽管癌細(xì)胞的增值抑制率。我們還用AO-EB染色法檢測(cè)HCE6介導(dǎo)PDT治療后膽管癌細(xì)胞凋亡壞死情況。通過Annexin V-FITC/PI雙染試劑盒對(duì)各組細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞檢測(cè),定量分析各組細(xì)胞凋亡壞死情況。我們還收集PDT處理后FRH-0201細(xì)胞蛋白,應(yīng)用western blot方法評(píng)估凋亡蛋白caspase-3和caspase-8的表達(dá)情況。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。以p0.05記為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次。研究結(jié)果CCK8結(jié)果顯示,HCE6介導(dǎo)的PDT可以明顯的抑制膽管癌細(xì)胞FRH-0201和QBC-939的增值,抑制效果與藥物濃度和光照強(qiáng)度相關(guān),隨著藥物濃度增加和光照強(qiáng)度增加,抑制效果逐漸增加,當(dāng)藥物濃度為2ug/ml和光照強(qiáng)度為10J/cm2的時(shí)候PDT對(duì)膽管癌細(xì)胞FRH-0201和QBC-939的抑制效果達(dá)到最大,分別為83.6%和84%,并且隨著藥物濃度和光照強(qiáng)度繼續(xù)增大抑制效果未發(fā)生明顯變化。HCE6孵育膽管癌細(xì)胞6h、12h、24h后行激光照射,其抑制殺傷效果明顯高于3h孵育時(shí)間的抑制效果(p0.05),而6h、12h和24h三組之間并無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。HCE6濃度為2ug/ml時(shí)其對(duì)膽管癌細(xì)胞的抑制效果明顯強(qiáng)于傳統(tǒng)光敏劑喜泊分和Photofrin的效果,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。AO-EB染色結(jié)果顯示,HCE6介導(dǎo)的PDT組細(xì)胞凋亡比例明顯高于對(duì)照組。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果也證實(shí)HCE6介導(dǎo)的PDT可以明顯的引起膽管癌細(xì)胞FRH-0201的凋亡。Western blotting結(jié)果分析顯示,HCE6介導(dǎo)的PDT組與其余三組對(duì)照組(空白對(duì)照組,單獨(dú)用藥組,單獨(dú)照光組)相比細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-3和caspase-8的表達(dá)明顯增加,單獨(dú)用藥或單獨(dú)照光并不能引起凋亡蛋白表達(dá)增加。結(jié)論新型光敏劑HCE6介導(dǎo)的光動(dòng)力治療對(duì)膽管癌具有明顯的抑制殺傷效果,而且與傳統(tǒng)光敏劑喜泊分和Photofrin相比具有更高的藥效和更短的藥物孵育時(shí)間。其介導(dǎo)的PDT作用機(jī)制主要是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-3和caspase-8的表達(dá)。
[Abstract]:Cholangiocarcinoma ( BDC ) has been widely used in the treatment of bile duct obstruction , such as biliary obstruction , esophageal cancer , prostate cancer , head and neck cancer . In order to investigate the effect of HCE6 - mediated PDT on the proliferation inhibition rate of cholangiocarcinoma cells and to evaluate the effect of HCE6 - mediated PDT on the apoptosis of cholangiocarcinoma cells , we also examined the effect of HCE6 - mediated PDT on the apoptosis of cholangiocarcinoma cells .

【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.8

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 Mahesh Kr Goenka;Usha Goenka;;Palliation:Hilar cholangiocarcinoma[J];World Journal of Hepatology;2014年08期

2 Takashi Sasaki;Hiroyuki Isayama;Yousuke Nakai;Naminatsu Takahara;Naoki Sasahira;Hirofumi Kogure;Suguru Mizuno;Hiroshi Yagioka;Yukiko Ito;Natsuyo Yamamoto;Kenji Hirano;Nobuo Toda;Minoru Tada;Masao Omata;Kazuhiko Koike;;Improvement of prognosis for unresectable biliary tract cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2013年01期

3 Tae Yoon Lee;Young Koog Cheon;Chan Sup Shim;Young Deok Cho;;Photodynamic therapy prolongs metal stent patency in patients with unresectable hilar cholangiocarcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2012年39期

4 Hiroyuki Isayama;Takeshi Tsujino;Yousuke Nakai;Takashi Sasaki;Keiichi Nakagawa;Hideomi Yamashita;Taku Aoki;Kazuhiko Koike;;Clinical benefit of radiation therapy and metallic stenting for unresectable hilar cholangiocarcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2012年19期

5 Yasuni Nakanuma;Yasunori Sato;Kenichi Harada;Mokoto Sasaski;Hiroko Ikeda;;Pathological classification of intrahepatic cholangiocarcinoma based on a new concept[J];World Journal of Hepatology;2010年12期

，

本文編號(hào)：1883748