本文選題：FOXD3 + 結(jié)直腸癌�。� 參考：《浙江大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：結(jié)直腸癌是常見的消化道腫瘤之一,居惡性腫瘤第三位。近年來,腫瘤抑癌基因的表觀遺傳調(diào)控失調(diào)被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生與發(fā)展的重要機(jī)制,結(jié)直腸癌的表觀遺傳學(xué)研究也得到了廣泛的開展。目的：FOXD3,是FOX轉(zhuǎn)錄因子家族的重要成員之一,關(guān)于FOXD3在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的表達(dá)和功能尚不清楚,因此,我們希望通過相關(guān)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證該基因在結(jié)直腸癌的功能并闡明其在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中作用的可能機(jī)制。方法：通過MSP (methylation-specific PCR) 和 BGS (bisulfite genome sequencing)檢測F OXD3的甲基化狀態(tài)；通過RT-PCR和免疫組化檢測正常組織和腫瘤組織中FOXD3的表達(dá)水平；通過體外轉(zhuǎn)染,獲得穩(wěn)定表達(dá)FOXD3的結(jié)直腸癌細(xì)胞株,觀察體外FOXD3對細(xì)胞表型的影響,包括細(xì)胞的增殖能力和遷移能力等；通過建立裸鼠皮下種植模型進(jìn)一步觀察體內(nèi)FOXD3對腫瘤細(xì)胞生長的影響；通過Western Blot檢測相關(guān)通路蛋白的表達(dá),研究FOXD3在結(jié)直腸癌中可能的調(diào)控機(jī)制。結(jié)果：FOXD3在結(jié)直腸癌細(xì)胞株或組織中表達(dá)沉默或降低,并被檢測到高度甲基化,細(xì)胞株去甲基化后FOXD3的表達(dá)得到修復(fù)；而在正常成人腸粘膜組織中卻未發(fā)現(xiàn)FOXD3的甲基化。免疫組化研究發(fā)現(xiàn),FOXD3蛋白在所有正常成人腸粘膜組織呈高表達(dá)而在大部分腸癌組織中層低表達(dá)或表達(dá)沉默,FOXD3蛋白的低表達(dá)與結(jié)直腸癌患者較差的組織學(xué)分類、更高的Dukes分期以及較多的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。此外,FOXD3低表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者的較短的生存期顯著相關(guān)。細(xì)胞株轉(zhuǎn)染FOXD3后,通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)FOXD3能抑制腫瘤細(xì)胞的生長、遷移,并且通過介導(dǎo)內(nèi)源性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的細(xì)胞凋亡等通路途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。結(jié)論：FOXD3甲基化在結(jié)直腸腫瘤中是一個(gè)經(jīng)常發(fā)生的、腫瘤特異的分子事件,FOXD3通過甲基化在結(jié)直腸腫瘤組織中表達(dá)沉默或降低,過表達(dá)FOXD3具有明顯的抑制細(xì)胞增殖和遷移能力,并通過介導(dǎo)內(nèi)源性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的細(xì)胞凋亡等通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。這提示FOXD3做為一個(gè)新的結(jié)直腸癌抑癌基因,有望成為用于腫瘤的預(yù)后和風(fēng)險(xiǎn)評估的潛在的腫瘤標(biāo)記物。
[Abstract]:Colorectal cancer is one of the most common digestive tract tumors, ranking third in malignant tumors. In recent years, epigenetic regulation disorders of tumor suppressor genes have been considered as an important mechanism of tumor occurrence and development. Epigenetic studies of colorectal cancer have also been widely carried out. Objective: FOXD3 is an important member of the FOX transcription factor family. The expression and function of FOXD3 in colorectal cancer is not clear. We hope to further verify the function of the gene in colorectal cancer and elucidate the possible mechanism of its role in the development of colorectal cancer. Methods: the methylation status of F OXD3 was detected by MSP methylation-specific genome sequencing, the expression of FOXD3 in normal tissues and tumor tissues was detected by RT-PCR and immunohistochemistry, and the stable expression of FOXD3 was obtained by transfection in vitro. To observe the effect of FOXD3 on cell phenotype in vitro, including cell proliferation and migration ability; to further observe the effect of FOXD3 on tumor cell growth by establishing subcutaneous seeding model of nude mice; to detect the expression of related pathway proteins by Western Blot. To study the possible regulatory mechanism of FOXD3 in colorectal cancer. Results the expression of FOXD3 was silenced or decreased in human colorectal cancer cell lines or tissues, and hypermethylation was detected. The expression of FOXD3 was repaired after demethylation of the cells, but no methylation of FOXD3 was found in normal adult intestinal mucosa. Immunohistochemical study showed that the high expression of FOXD3 protein in all normal adult intestinal mucosa and the low or silent expression of FOXD3 protein in the middle layer of most colorectal cancer tissues were associated with poor histological classification in colorectal cancer patients. Higher Dukes staging and more lymph node metastasis were significantly correlated. In addition, the low expression level of FOXD 3 was significantly associated with the shorter survival time of colorectal cancer patients. After transfection of FOXD3, it was found that FOXD3 could inhibit the growth and migration of tumor cells in vitro and in vivo, and promote the apoptosis of tumor cells by mediating the apoptosis of endogenous endoplasmic reticulum (ER). ConclusionTwo FOXD3 methylation is a frequent occurrence in colorectal neoplasms. The tumor-specific molecular event FOXD3 is silent or decreased in colorectal neoplasms through methylation. Overexpression of FOXD3 can significantly inhibit cell proliferation and migration. The apoptosis of tumor cells was promoted by mediating the apoptosis of endogenous endoplasmic reticulum (endoplasmic reticulum). This suggests that FOXD3, as a new tumor suppressor gene, may be a potential tumor marker for tumor prognosis and risk assessment.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34

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本文編號：1881284