本文選題：肺癌 + miR-34a�。� 參考：《中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文

【摘要】：背景肺癌為目前全球范圍內(nèi)死亡率排名第一位的惡性腫瘤。在最近的幾十年來(lái),我國(guó)肺癌的發(fā)病率以及死亡率居高不下,據(jù)世界衛(wèi)生組織(World Health Organization, WHO)評(píng)估,2025年我國(guó)肺癌患病人數(shù)將居全球之首。Ⅰ期肺癌患者若立即進(jìn)行手術(shù)切除,則其5年生存率可達(dá)92%,而未經(jīng)治療的Ⅰ期肺癌患者則將在5年內(nèi)死亡,而Ⅰ～Ⅳ期肺癌患者的總體5年生存率僅為15%左右。所以,早期診斷以及治療能夠有效提高肺癌患者的存活率。miRNA (microRNAs)為具有多種生物學(xué)功能的小分子RNA,在生物體生長(zhǎng)發(fā)育、生理功能特別是在惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中有重要作用,因此日益成為廣大生命科學(xué)研究工作者們探索的熱點(diǎn)內(nèi)容。miRNA與人類惡性腫瘤形成的多條信號(hào)傳導(dǎo)通路密切相關(guān),既可作為癌基因參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,亦可發(fā)揮抑癌基因的功能抑制腫瘤的生成和惡化。目前的研究已證實(shí),人體中約有三分之一以上的基因是由miRNA所調(diào)節(jié)的。miRNA經(jīng)由對(duì)其靶基因進(jìn)行調(diào)控,參與人體生理過(guò)程調(diào)節(jié),同時(shí)與人類多種惡性腫瘤,如胃癌、乳腺癌、肺癌等的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程有關(guān)。本文就近年來(lái)關(guān)于miRNA與肺癌關(guān)系的文章予以綜述并對(duì)miR-34a下調(diào)SIRT1影響肺癌細(xì)胞增殖及凋亡進(jìn)行實(shí)驗(yàn)證實(shí),旨在加深對(duì)肺癌發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制以及病理變化的認(rèn)識(shí),為增加肺癌治療手段、有效提高肺癌診療水平奠定理論基礎(chǔ)。目的本文通過(guò)研究miR-34a以及SIRTl在人非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)組織中的表達(dá)及意義,以及miR-34a在抑制NSCLC細(xì)胞增殖、促凋亡以及調(diào)控細(xì)胞周期的作用機(jī)制,旨在為開發(fā)新的治療NSCLC藥物以及制定NSCLC臨床治療新方案提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法(1)采集50例NSCLC患者的癌組織樣本以及10例相應(yīng)癌旁正常組織樣本,通過(guò)運(yùn)用熒光定量PCR方法檢測(cè)上述樣本中miR-34a和SIRT1 mRNA的轉(zhuǎn)錄,同時(shí)通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡(western blot)法明確SIRT1蛋白的表達(dá)情況,分析miR-34a和SIRT1表達(dá)與NSCLC患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。(2)將miR-34a模擬物(miR-34a mimic)轉(zhuǎn)染人NSCLC H1299細(xì)胞；熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞中miR-34a的轉(zhuǎn)錄；運(yùn)用MTT法檢測(cè)miR-34a對(duì)細(xì)胞增殖的影響；Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)miR-34a對(duì)細(xì)胞凋亡的影響；用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)miR-34a對(duì)細(xì)胞周期的影響；用Transwell小室法檢測(cè)miR-34a對(duì)細(xì)胞的侵襲能力的影響；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-34a對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響。(3)將H1299細(xì)胞隨機(jī)分為2大組：即①mimic陰性對(duì)照組：轉(zhuǎn)染相同濃度的miR-mimics-mock, miR-34a mimic組：轉(zhuǎn)染miR-34a mimic;②抑甲制劑陰性對(duì)照組：不加入miR-34a抑制劑,miR-34a抑制劑組：加入40nmol/LmiR-34a抑制劑。熒光定量PCR檢測(cè)各處理組中miR-34a的表達(dá)情況；運(yùn)用BrdU細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖情況；western blot法檢測(cè)各處理組中SIRT1蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果(1) NSCLC患者的癌組織樣本中miR-34a的表達(dá)較相應(yīng)癌旁正常組織明顯降低;NSCLC患者的癌組織樣本中SIRT1 mRNA及相應(yīng)蛋白的表達(dá)較相應(yīng)癌旁正常組織明顯增高；miR-34a的表達(dá)與NSCLC患者的性別、年齡、pTNM分期、病理類型以及組織病理學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān),而與患者是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。SIRT1的表達(dá)與NSCLC患者的性別、年齡以及病理類型無(wú)關(guān),而與患者的pTNM分期、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及組織病理學(xué)分級(jí)有關(guān)。(2)miR-34a能皂夠抑制H1299細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)其凋亡,且能夠?qū)SCLC H1299細(xì)胞周期阻滯在G1期,從而對(duì)其細(xì)胞周期產(chǎn)生影響；miR-34a能夠抑制H1299細(xì)胞侵襲；miR-34a對(duì)H1299細(xì)胞的遷移能力具有抑制作用。(3)轉(zhuǎn)染miR-34a mimic后H1299細(xì)胞增殖活性顯著降低,加入miR-34a抑制劑時(shí)其增殖活性明顯增高,表明miR-34a對(duì)人NSCLC H1299細(xì)胞的增殖活性具有抑制作用；轉(zhuǎn)染miR-34a mimic后H1299細(xì)胞中SIRT1蛋白的表達(dá)明顯降低,加入miR-34a抑制劑時(shí)其表達(dá)量顯著增高。結(jié)論miR-34a可能經(jīng)由抑制SIRT1的表達(dá)來(lái)發(fā)揮抑制NSCLC H1299細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。提示miR-34a可能為一種抑癌基因參與了NSCLC的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程,可將其作為腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用于NSCLC臨床檢測(cè)、預(yù)后判斷以及靶向治療中。
[Abstract]:This paper reviewed the expression of miR - 34a and SIRTl in human non - small cell lung cancer ( NSCLC ) .
detecting miR - 34a transcription in cells by fluorescence quantitative PCR ;
The effect of miR - 34a on cell proliferation was detected by MTT assay .
The effect of miR - 34a on apoptosis was detected by annexin V - FITC / PI double staining method .
The effect of miR - 34a on cell cycle was detected by flow cytometry .
The influence of miR - 34a on invasion ability of cells was detected by Transwell chamber method .
The expression of miR - 34a in each treatment group was detected by fluorescence quantitative PCR .
The proliferation of each group of cells was detected by means of the proliferation assay .
Results ( 1 ) The expression of miR - 34a in cancer tissue samples of NSCLC patients was significantly lower than that in normal tissues .
The expression of miR - 34a was not related to the sex , age , pTNM stage , pathological type and histopathological grade of NSCLC patients . The expression of miR - 34a was not related to lymph node metastasis in NSCLC .
miR - 34a is capable of inhibiting the invasion of H 12 99 cells ;
( 3 ) After transfected with miR - 34a , the proliferation activity is obviously reduced , and the proliferation activity of the miR - 34a inhibitor is obviously increased when a miR - 34a inhibitor is added , so that the miR - 34a has an inhibitory effect on the proliferation activity of human NSCLC ,
Conclusion miR - 34a may play an important role in inhibiting cell proliferation and inducing apoptosis in NSCLC . Conclusion miR - 34a may play an important role in inhibiting cell proliferation and inducing apoptosis in NSCLC . It is suggested that miR - 34a may be a tumor suppressor gene involved in the development and development of NSCLC , and can be used as tumor marker in NSCLC clinical detection , prognosis judgement and targeted therapy .

【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：1877290