本文選題：胃癌 + 長(zhǎng)鏈非編碼RNA��； 參考：《江蘇大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:檢測(cè)長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)鋅指結(jié)構(gòu)反義轉(zhuǎn)錄本1(zinc finger antisense 1,ZFAS1)在胃癌患者腫瘤組織、血清及血清外泌體(exosome)中的表達(dá)水平,分析其與臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性,探討ZFAS1在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制,為胃癌提供新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。方法:1、結(jié)合生物信息學(xué)分析和文獻(xiàn)檢索選擇10種腫瘤相關(guān)lnc RNA(CCAT1、MALAT1、PVT1、HULC、GAS5、MYCLO-2、ZFAS1、lnc RNA-ATB、HOTTIP、linc RNA-p21),采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR篩選在胃癌細(xì)胞中表達(dá)顯著改變(倍數(shù)≥2)的lnc RNA。2、采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)ZFAS1在胃癌患者腫瘤組織、血清及血清外泌體中的表達(dá)水平,結(jié)合患者的臨床病理資料,統(tǒng)計(jì)分析ZFAS1表達(dá)水平與性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期等病理因素之間的相關(guān)性;分析ZFAS1在血清中的穩(wěn)定性,探討其潛在診斷價(jià)值。3、采用質(zhì)粒介導(dǎo)sh RNA干擾ZFAS1在胃癌細(xì)胞MGC-803和BGC-823中表達(dá),ZFAS1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MKN-28胃癌細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)sh RNA干擾和過(guò)表達(dá)效率;生長(zhǎng)曲線和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)干擾和過(guò)表達(dá)后細(xì)胞增殖能力;Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)干擾和過(guò)表達(dá)后細(xì)胞遷移能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)處理后細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡變化;實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和western blot檢測(cè)ZFAS1對(duì)細(xì)胞增殖和遷移相關(guān)基因及蛋白表達(dá)的影響。4、提取胃癌細(xì)胞BGC-823來(lái)源的外泌體,采用透射電鏡(transmission electron microscope,TEM)、納米顆粒跟蹤分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)、western blot鑒定外泌體;采用外泌體處理MKN-28細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)處理后ZFAS1表達(dá)水平;生長(zhǎng)曲線和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)外泌體處理后細(xì)胞的增殖能力;Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)處理后細(xì)胞的遷移能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化;實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和western blot檢測(cè)處理后細(xì)胞增殖、遷移相關(guān)基因及蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果:1、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明ZFAS1表達(dá)在胃癌患者腫瘤組織、血清以及血清外泌體中顯著增加,并且在血清中穩(wěn)定存在。2、病理相關(guān)性分析結(jié)果表明胃癌患者腫瘤組織、血清及血清外泌體中ZFAS1高表達(dá)均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期顯著相關(guān)(P(27)0.05)。3、sh RNA干擾后ZFAS1表達(dá)降低,過(guò)表達(dá)后ZFAS1表達(dá)增加;干擾和過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ZFAS1能促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程,抑制細(xì)胞凋亡,誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),從而增強(qiáng)胃癌細(xì)胞增殖和遷移能力。4、透射電鏡顯示外泌體呈橢圓形雙層膜囊泡結(jié)構(gòu),納米顆粒跟蹤分析顯示外泌體的大小為50-150nm,濃度為1.0×1011~2.5×1011微粒/毫升,western blot結(jié)果表明外泌體含有豐富的CD9和CD81,流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示MKN-28細(xì)胞具有較強(qiáng)的外泌體內(nèi)吞能力。5、外泌體處理后,ZFAS1在MKN-28細(xì)胞中表達(dá)顯著增加,MKN-28細(xì)胞增殖和遷移能力增強(qiáng),處于S期的細(xì)胞比例增加,MKN-28細(xì)胞中cyclin D1、Bcl-2、N-cadherin、Slug、Snail、Twist、ZEB1表達(dá)增加,Bax、E-cadherin表達(dá)降低,細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinas,ERK)無(wú)明顯改變,而磷酸化ERK(p-ERK)表達(dá)增加。結(jié)論:ZFAS1在胃癌患者腫瘤組織、血清和血清外泌體中高表達(dá),且表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期顯著相關(guān);ZFAS1能加快細(xì)胞周期進(jìn)程,抑制細(xì)胞凋亡,誘導(dǎo)EMT發(fā)生,促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖和遷移;外泌體能通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)ZFAS1促進(jìn)胃癌惡性進(jìn)展。因此,ZFAS1有望成為胃癌診斷和治療的新分子標(biāo)志物。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression level of antisense transcript of long noncoding RNA ( lnc RNA ) zinc finger structural antisense transcript 1 ( ZFAS1 ) in tumor tissues , serum and exosome of gastric cancer patients , and to investigate the correlation between the expression levels of ZFAS1 in gastric cancer patients and pathological factors such as sex , age , tumor size , lymph node metastasis and TNM stage . The expression of ZFAS1 in gastric cancer patients was detected by RT - PCR and Western blot . The results showed that the expression of ZFAS1 increased significantly in gastric cancer patients . Conclusion : ZFAS1 can accelerate cell cycle progression , inhibit cell apoptosis , induce EMT to occur , promote gastric cancer cell proliferation and migration , and ZFAS1 is expected to be a new molecular marker for the diagnosis and treatment of gastric cancer .

【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.2

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