本文選題：腦膠質(zhì)瘤 + 真核翻譯起始因子3亞基c��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：腦膠質(zhì)瘤是最常見(jiàn)、難以控制和最致命的人類顱內(nèi)腫瘤,占原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的40%以上。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的神經(jīng)病理學(xué)分類,腦膠質(zhì)瘤被分為星形細(xì)胞瘤、少突星形細(xì)胞瘤、室管膜細(xì)胞瘤、髓母細(xì)胞瘤、多形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤和脈絡(luò)叢乳頭狀瘤等。世界衛(wèi)生組織根據(jù)腦膠質(zhì)瘤的惡性程度將其分為I級(jí)、II級(jí)、III級(jí)和IV級(jí)四個(gè)級(jí)別。I級(jí)腦膠質(zhì)瘤在生物學(xué)上是良性腫瘤,完全切除能夠治愈;II級(jí)腦膠質(zhì)瘤屬于低度惡性,可能經(jīng)歷較長(zhǎng)的臨床過(guò)程,但早期彌漫浸潤(rùn)到臨近的腦組織中導(dǎo)致即使手術(shù)也會(huì)因術(shù)后復(fù)發(fā)而不能治愈;III級(jí)腦膠質(zhì)瘤比II級(jí)膠質(zhì)瘤呈現(xiàn)出更多的間變和惡性增殖的特征,常常進(jìn)展快而致命;IV級(jí)腦膠質(zhì)瘤性質(zhì)更加惡劣,他們對(duì)化療和放療都不敏感,往往生存時(shí)間更短。程度最高的星形細(xì)胞瘤被稱為多形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤或簡(jiǎn)稱為GMB,屬于腦膠質(zhì)瘤IV級(jí)。在成年人,惡腦腦膠質(zhì)瘤(III級(jí)和IV級(jí))占所有原發(fā)性腦腫瘤的比例接近60%。惡性腦膠質(zhì)瘤,尤其多形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤,對(duì)化療和放療反應(yīng)差、術(shù)后復(fù)發(fā)率高,是最難治療的腫瘤。盡管近年來(lái)顯微手術(shù)、放療和化療等治療措施獲得較大進(jìn)展,但惡性腦膠質(zhì)瘤患者平均生存時(shí)間仍然是9~12個(gè)月,很少病人能獲得治愈。據(jù)報(bào)道,除了屬于I級(jí)的毛細(xì)胞型星形細(xì)胞瘤之外,罹患其它類型腦膠質(zhì)瘤病人自診斷后5年生存率不足3%。腦膠質(zhì)瘤病人的預(yù)后仍然非常差,近些年也沒(méi)有明顯的變化。而且,有報(bào)道老年病人比年輕成年病人的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)高出3.18倍。無(wú)論是低級(jí)別還是高級(jí)別,腦膠質(zhì)瘤均呈現(xiàn)浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和富有血管的特性。腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)臨近的腦組織,常常導(dǎo)致常規(guī)治療手段的失敗。如今,許多化療藥物被發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生較為嚴(yán)重的副作用,因此也影響腫瘤治療的效果。大約有30%的病人由于現(xiàn)代藥物嚴(yán)重的副作用而放棄化療。為此,人們已經(jīng)進(jìn)行了很多努力和嘗試,通過(guò)開(kāi)展新的治療方法和發(fā)現(xiàn)新的藥物作用機(jī)制來(lái)提高藥物的治療效果,減少藥物的毒副作用。目前,盡管一些藥物用于腦膠質(zhì)瘤的臨床治療,但存在著我們?nèi)绾翁岣咧委熜Ч�、減少并發(fā)癥和降低復(fù)發(fā)率等許多挑戰(zhàn)。分子遺傳學(xué)研究人員已經(jīng)證實(shí)基因變化參與了惡性腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展,包括雜合子10(LOH10)、磷酸酶-張力蛋白基因(PTEN)、腫瘤蛋白p53(TP53)、表皮生長(zhǎng)因子(EGFR)和p16的丟失等等。人們認(rèn)為腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展同多種基因改變和基因表達(dá)模式改變的累積有關(guān)。掌握腦膠質(zhì)瘤發(fā)生和進(jìn)展基因改變的分子通路,將有希望在不遠(yuǎn)的將來(lái)獲得新的有效的治療靶點(diǎn),這將有助于提高腦膠質(zhì)瘤患者的生存狀況,并改善他們的醫(yī)療預(yù)后。蛋白質(zhì)翻譯異常在人類腫瘤中廣泛存在。近年來(lái),人們發(fā)現(xiàn)真核翻譯起始因子(e IFs)在多種人類腫瘤發(fā)生和進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用。然而,真核翻譯起始因子在腦膠質(zhì)瘤中的作用和機(jī)制仍然不清楚,還需要進(jìn)一步研究闡明。本研究探討了真核翻譯起始因子3(e IF3)的核心亞基e IF3c在人腦膠質(zhì)瘤中的作用。首先,采用免疫組織化學(xué)SP技術(shù)和RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了e IF3c在人腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織中的表達(dá)。然后,利用慢病毒介導(dǎo)si RNA的方法,在體外實(shí)驗(yàn)中探討了e IF3c基因沉默對(duì)U87 MG細(xì)胞的增殖、凋亡、細(xì)胞周期和克隆形成等的影響。隨后,又建立了膠質(zhì)瘤裸鼠移植模型,在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中觀察了e IF3c基因沉默對(duì)腦膠質(zhì)瘤形成和增殖生長(zhǎng)的影響。根據(jù)以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,證實(shí)了e IF3c在腦膠質(zhì)瘤的形成和進(jìn)展中起著重要作用,以期在臨床實(shí)踐中為腦膠質(zhì)瘤的基因治療奠定極為重要的理論基礎(chǔ)。本課題研究?jī)?nèi)容包括以下三部分:第一部分EIF3C在人腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織中的表達(dá)研究目的:采用免疫組織化學(xué)SP方法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù),檢測(cè)e IF3c在人腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織標(biāo)本中的表達(dá)情況,探討e IF3c在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別、腫瘤大小、位置、病人年齡和性別等臨床特性的相關(guān)性。方法：1病人的臨床資料和腫瘤標(biāo)本的處置腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本來(lái)自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)外科2008年1月-2013年12月期間接收外科手術(shù)的83例腦膠質(zhì)瘤患者。另外對(duì)照組27例正常腦組織標(biāo)本來(lái)自同期27例顱腦損傷行內(nèi)減壓手術(shù)的患者。所有標(biāo)本均經(jīng)兩名以上神經(jīng)病理醫(yī)師明確診斷。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療和免疫治療。83例腦膠質(zhì)瘤患者中,男性44例,女性39例,平均年齡為44.54±12.53歲(年齡范圍16歲到73歲)。所有組織標(biāo)本取材后均分為兩部分:一部分標(biāo)本速凍并儲(chǔ)存在-80℃液氮中以備抽取目的基因e IF3c的m RNA;另一部分標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定,石蠟包埋,應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)e IF3c的表達(dá)。詳細(xì)記錄所有標(biāo)本的病人年齡、性別、腫瘤大小、生長(zhǎng)部位和病理級(jí)別等臨床資料。在液氮中保存的標(biāo)本中,取其中的31例腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本和5例正常腦組織標(biāo)本進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn),用于檢測(cè)內(nèi)源基因e IF3c的表達(dá)。2采用IHC方法檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織中e IF3c蛋白的表達(dá)腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織標(biāo)本中e IF3c蛋白的表達(dá)采用免疫組化染色進(jìn)行檢測(cè)。將石蠟塊切成4μm厚度放在玻璃載片上。二甲苯脫蠟,切片在乙醇梯度溶液下復(fù)水;將切片浸入0.01mmol/L檸檬酸鈉緩沖液中,抗原微波修復(fù)30分鐘,切片10%牛血清蛋白封閉,滴加兔抗人單克隆抗體e IF3c抗體孵化過(guò)夜,滴加抗山羊二抗60分鐘,之后切片DAB顯色,蘇木素復(fù)染。在顯微鏡下獲取數(shù)字圖像。3 e IF3c蛋白的表達(dá)同臨床特征之間的關(guān)系分析分析e IF3c蛋白的表達(dá)同腦膠質(zhì)瘤患者的年齡、性別以及腫瘤病理級(jí)別、大小、位置的關(guān)系。4 Real-time PCR檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤及正常腦組織中e IF3c的表達(dá)提取液氮保存的31例腦膠質(zhì)瘤組織及5例正常腦組織標(biāo)本中的總RNA,并反轉(zhuǎn)錄成c DNA,采用real-time PCR方法檢測(cè)內(nèi)源基因e IF3c的表達(dá)情況。數(shù)據(jù)應(yīng)用Graph Pad Prism 4.0軟件進(jìn)行分析,并應(yīng)用2-ΔΔCT法測(cè)定基因表達(dá)的相對(duì)量。結(jié)果：1 e IF3c蛋白在人腦膠質(zhì)瘤組織中過(guò)度表達(dá)e IF3c蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì),高倍鏡下在細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆�；驈浡S色者為陽(yáng)性細(xì)胞。83腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本中,e IF3c蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)有69例,呈陰性表達(dá)為14例,陽(yáng)性表達(dá)率為83.13%(69/83)。而在27例正常腦組織中e IF3c蛋白僅1例呈微弱表達(dá),其余26例呈陰性表達(dá),陽(yáng)性表達(dá)率僅為3.7%(1/27)。e IF3c蛋白在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于正常腦組織(χ2=57.02,P0.0001)。e IF3c蛋白在人腦膠質(zhì)瘤組織中存在過(guò)度表達(dá)。2 e IF3c蛋白在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)與臨床特征之間的關(guān)系e IF3c蛋白在高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤(WHO III級(jí)和WHO IV級(jí))中的表達(dá)陽(yáng)性率為91.07%(51/56),而低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤(WHO I級(jí)和WHO II級(jí))表達(dá)陽(yáng)性率為66.67%(18/27),兩者比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.0950,P=0.01360.05);而e IF3c蛋白在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)的陽(yáng)性率與患者的年齡、性別及腫瘤生長(zhǎng)的部位、大小均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。結(jié)果表明e IF3c陽(yáng)性表達(dá)率同腦膠質(zhì)瘤的級(jí)別相關(guān)。3 e IF3c基因m RNA在腦膠質(zhì)瘤中存在高表達(dá)采用real-time PCR方法,檢測(cè)液氮保存的31例腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本和5例正常腦組織標(biāo)本中e IF3c基因m RNA的表達(dá)水平。結(jié)果顯示e IF3c基因m RNA在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平明顯高于在正常腦組織中的表達(dá)水平(P0.01)。但是,e IF3c基因m RNA表達(dá)水平同腦膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別無(wú)關(guān)(P0.05)。4腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織中e IF3c基因調(diào)節(jié)的倍數(shù)變化31個(gè)腦膠質(zhì)瘤樣本中有30個(gè)樣本相比正常腦組織樣本中的e IF3c基因表達(dá)上調(diào),上調(diào)倍數(shù)平均值為2.6倍�？梢赃x擇該基因e IF3c開(kāi)展genecard實(shí)驗(yàn)。結(jié)論：1 e IF3c蛋白在人腦膠質(zhì)瘤中過(guò)度表達(dá)。2 e IF3c高表達(dá)和腦膠質(zhì)瘤的惡性表型有關(guān),而與患者年齡、性別和膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)部位和大小無(wú)關(guān)。3 e IF3c m RNA在腦膠質(zhì)瘤中存在過(guò)度表達(dá),但同腦膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別無(wú)關(guān)。4 e IF3c基因在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)上調(diào)。第二部分EIF3C對(duì)腦膠質(zhì)瘤U87 MG細(xì)胞增殖作用的體外研究目的:利用RNA干擾技術(shù)進(jìn)行一系列細(xì)胞學(xué)功能實(shí)驗(yàn),探討e IF3c基因?qū)θ四X膠質(zhì)瘤U87MG細(xì)胞的增殖、凋亡、細(xì)胞周期和克隆形成的影響,明確e IF3c在人腦膠質(zhì)瘤形成和進(jìn)展中的作用。方法：1腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株培養(yǎng)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株(U87、U251、A172、U373)購(gòu)自上海國(guó)家實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源共享平臺(tái),細(xì)胞在含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。DMEM培養(yǎng)液中含有2左旋谷氨酰胺、青霉素(100 units/ml)和鏈霉素(100μg/ml),所有細(xì)胞株均在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)。2半定量RT-PCR檢測(cè)e IF3c在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中的表達(dá)從四種腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株(U87、U251、A172、U373)中抽提總RNA,采用半定量RT-PCR方法檢測(cè)e IF3c基因m RNA表達(dá)水平,確認(rèn)e IF3c在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中存在表達(dá)。3 e IF3c RNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)染e IF3c-si RNA序列為5’-GACCATCCGTAATGCCATGAA-3’,scrambled si RNA序列為5’-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3’。這些核苷酸序列合成并通過(guò)表達(dá)si RNA的載體p GCSIL-GFP和包裝e IF3c-si RNA的慢病毒插入質(zhì)粒。建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染慢病毒的U87 MG和237T細(xì)胞系。4 q PCR檢測(cè)m RNA水平e IF3c敲減效率U87細(xì)胞按照組別感染慢病毒表達(dá)質(zhì)粒。感染3天后在熒光顯微鏡下觀察GFP的表達(dá)情況,感染5天后收集細(xì)胞。然后,采用RT-PCR方法檢測(cè)e IF3c的m RNA敲減效率。5蛋白質(zhì)印跡分析為離析蛋白質(zhì),細(xì)胞用RIPA緩沖液收集。應(yīng)用SDS-PAGE將蛋白分離,再將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,用一抗、二抗孵育,采用ECL試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。X線顯影獲得顯示條帶的膠片。6采用Brd U方法測(cè)定U87MG細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)增殖細(xì)胞的DNA合成用Brd U方法進(jìn)行測(cè)定。U87 MG細(xì)胞轉(zhuǎn)染表達(dá)e IF3c-si RNA或scr-si RNA的慢病毒,培養(yǎng)48小時(shí),懸浮并以合適的濃度在96孔板上接種,5%CO2、37?C的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)1-4天。加入稀釋的溴脫氧尿苷(Brd U)后的第1天和第4天收集細(xì)胞,用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度(OD),Brd U信號(hào)和細(xì)胞增殖根據(jù)吸光值進(jìn)行分析。7細(xì)胞周期檢測(cè)U87MG細(xì)胞轉(zhuǎn)染表達(dá)e IF3c-si RNA或scr-si RNA的慢病毒,在37℃條件下培養(yǎng)96小時(shí)。細(xì)胞重懸,接種在6cm的培養(yǎng)盤中。細(xì)胞長(zhǎng)到80%方法:融合率時(shí)被收集固定,PBS洗滌,含有PI、RNase、PBS進(jìn)行染色。最后,應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定細(xì)胞周期。8細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)U87MG細(xì)胞轉(zhuǎn)染表達(dá)e IF3c-si RNA或scr-si RNA的慢病毒,培養(yǎng)5天后收集、懸浮并種植在6孔培養(yǎng)皿中。培養(yǎng)2周后,細(xì)胞用4%多聚甲醛固定,稀釋的Giemsa染料染色20分鐘,蒸餾水漂洗干凈,在熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)超過(guò)50個(gè)細(xì)胞的克隆。9細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)使用Annexin V-APC染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。U87MG細(xì)胞轉(zhuǎn)染表達(dá)e IF3c-si RNA或scr-si RNA的慢病毒,培養(yǎng)5天,收集并用PBS洗滌,用含有5μl Annexin V-APC的緩沖液重懸細(xì)胞沉淀,室溫避光10-15分鐘。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞。結(jié)果：1 e IF3c在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中的表達(dá)半定量RT-PCR檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、U251、A172、U373結(jié)果顯示,e IF3c基因的m RNA在4種腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中均存在表達(dá)。2構(gòu)建表達(dá)e IF3c-si RNA或scrambled si RNA的慢病毒載體成功構(gòu)建了表達(dá)e IF3c-si RNA或scrambled si RNA的慢病毒載體,并實(shí)現(xiàn)其在U87MG細(xì)胞的穩(wěn)定高表達(dá)。3慢病毒介導(dǎo)的si RNA能有效抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞系e IF3c基因的表達(dá)應(yīng)用熒光定量PCR方法檢測(cè)e IF3c m RNA水平。沉默e IF3c基因?qū)е耬 IF3c m RNA表達(dá)下降95%。結(jié)果表明利用慢病毒介導(dǎo)的RNAi技術(shù)能夠高效敲減e IF3c基因在m RNA水平的表達(dá)。4沉默e IF3c基因后293T細(xì)胞e IF3c蛋白水平明顯降低蛋白水平用免疫印跡方法檢測(cè)。同陰性對(duì)照組相比,應(yīng)用RNA干擾技術(shù)e IF3c基因沉默后,293T細(xì)胞的e IF3c蛋白明顯下降。GAPDH作為內(nèi)參對(duì)照。5敲減e IF3c能有效抑制U87MG細(xì)胞的增殖細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示感染24小時(shí)后,e IF3c-si RNA組U87MG細(xì)胞增殖明顯受到抑制,之后4天e IF3c敲減對(duì)U87MG細(xì)胞增殖的抑制作用更加明顯。Brd U法檢測(cè)結(jié)果顯示e IF3c-RNAi組U87MG細(xì)胞Brd U值明顯減少,e IF3c-RNAi組和Scr-RNAi組比較具有顯著性差異(P0.05)。結(jié)果表明敲減e IF3c基因表達(dá)能顯著抑制U87MG細(xì)胞的增殖。6敲減e IF3c基因表達(dá)抑制U87MG細(xì)胞克隆形成克隆形成試驗(yàn)顯示Scr-si RNA對(duì)照組U87MG細(xì)胞形成克隆數(shù)目平均為23個(gè),而e IF3c-si RNA實(shí)驗(yàn)組僅為15個(gè),相比減少34.8%,他們之間有顯著性差異(P0.05)。結(jié)果提示e IF3c基因與U87MG細(xì)胞的克隆形成能力密切相關(guān)。7 e IF3c敲減導(dǎo)致U87MG細(xì)胞周期停止細(xì)胞周期分布顯示,e IF3c敲減顯著導(dǎo)致U87MG細(xì)胞在G0/G1期停止,在S期細(xì)胞比例相應(yīng)減少。e IF3c-si RNA組在G0/G1期的細(xì)胞比例增加了71.42%和79.05%,而在S期的比例下降了17.09%和7.83%。e IF3c-si RNA組和Scr-si RNA組比較有顯著性差異(P0.05)。因此,敲減e IF3c基因表達(dá)抑制了從G1期到S期的過(guò)渡。8 e IF3c敲減促進(jìn)U87MG細(xì)胞凋亡利用Annexin V-APC檢測(cè)細(xì)胞凋亡顯示實(shí)驗(yàn)組e IF3c-si RNA U87MG細(xì)胞凋亡率為5.83%,而對(duì)照組Scr-si RNA U87MG細(xì)胞凋亡率只有2.78%,兩者比較有顯著性差異(P0.01)。結(jié)果表明e IF3c基因敲減可能誘導(dǎo)U87MG細(xì)胞凋亡。結(jié)論：1采用半定量PCR技術(shù),e IF3c基因在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株(U87、U251、A172、U373)中存在表達(dá)。2通過(guò)RNAi技術(shù),下調(diào)慢病毒介導(dǎo)的U87MG細(xì)胞中的e IF3c基因表達(dá)水平,能顯著抑制U87MG細(xì)胞的增殖,促進(jìn)他們的凋亡。3 e IF3c基因表達(dá)敲減誘導(dǎo)U87MG細(xì)胞G0/G1期阻止,抑制G1到S期的轉(zhuǎn)換。e IF3c基因調(diào)控細(xì)胞周期分布的作用可能是影響U87MG細(xì)胞增殖和凋亡的機(jī)制之一。4下調(diào)e IF3c基因的表達(dá)可以明顯抑制U87MG細(xì)胞的增殖,e IF3c基因可以作為腦膠質(zhì)瘤治療新的靶點(diǎn)。第三部分EIF3C對(duì)腦膠質(zhì)瘤U87MG細(xì)胞增殖作用的體內(nèi)研究目的:建立人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87MG裸小鼠皮下荷瘤模型,并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行研究,進(jìn)一步驗(yàn)證體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的結(jié)果。方法：1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組無(wú)胸腺裸鼠共24只,隨機(jī)分為Negative control、Scrambled和e IF3c-si RNA三組,并分別處理。2人腦膠質(zhì)瘤U87MG細(xì)胞培養(yǎng)U87MG細(xì)胞體外培養(yǎng)并制備細(xì)胞懸液。3腦膠質(zhì)瘤裸鼠荷瘤移植模型的建立無(wú)胸腺裸鼠皮下注射處理過(guò)或沒(méi)有處理過(guò)的U87MG細(xì)胞。Negative control組小鼠皮下注射沒(méi)有感染的U87MG細(xì)胞;Scramble組小鼠注scrambled si RNA U87MG細(xì)胞;e IF3c-si RNA組小鼠注射e IF3c-si RNA U87MG細(xì)胞。4腫瘤體積和重量的測(cè)定從裸鼠注射U87MG細(xì)胞第10天開(kāi)始,腫瘤的直徑每隔一天記錄一次,共18天。裸鼠喂養(yǎng)28天觀察期結(jié)束,將其處死,切除皮下腫瘤制作標(biāo)本,分別稱重。結(jié)果：1腦膠質(zhì)瘤裸鼠移植模型建立腦膠質(zhì)瘤U87MG裸鼠移植模型成功建立,并進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。2體內(nèi)實(shí)驗(yàn)e IF3c敲減能抑制腫瘤的生長(zhǎng)在最初的11天里,三組之間腫瘤體積測(cè)量無(wú)顯著差異。然而在第13天后,e IF3c-si RNA組腫瘤生長(zhǎng)明顯受到抑制。觀察期結(jié)束,e IF3c-si RNA組腫瘤平均體積比Scr-si RNA組和Control組明顯減少(P0.01)。3體內(nèi)實(shí)驗(yàn)e IF3c敲減能減少腫瘤的重量觀察期結(jié)束,裸鼠處死,瘤體從裸鼠皮下切除并稱重,e IF3c-si RNA組瘤體的重量比Scr-si RNA組和Control組也顯著降低(P0.01)。結(jié)論：1在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)e IF3c敲減能顯著抑制U87 MG細(xì)胞增殖和腫瘤增長(zhǎng)。2 e IF3c基因可以作為人類腦膠質(zhì)瘤新的治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.4

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本文編號(hào)：1869337