本文選題：人BREB基因 + 克隆��； 參考：《眼科新進展》2017年12期

【摘要】：目的構(gòu)建人BRE1B基因真核表達載體,并初步探討該基因?qū)ρ跙16黑色素瘤細胞生長的影響。方法將傳代培養(yǎng)的眼B16黑色素瘤細胞隨機分為實驗組(轉(zhuǎn)染p CMV-Tag-2B-BRE1B重組質(zhì)粒)和對照組(轉(zhuǎn)染p CMV質(zhì)粒)。以乳腺癌文庫為模板應(yīng)用PCR技術(shù)擴增出人BRE1B基因的CDS編碼區(qū)序列,構(gòu)建p CMV-Tag-2B-BRE1B重組質(zhì)粒,將p CMV-Tag-2B-BRE1B重組質(zhì)粒和p CMV質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染眼B16黑色素瘤細胞后,應(yīng)用Western blot法檢測BRE1B蛋白的表達,應(yīng)用CCK8法和克隆形成法檢測該重組質(zhì)粒對眼B16黑色素瘤細胞生長的影響。結(jié)果 PCR技術(shù)擴增出人BRE1B基因CDS編碼區(qū)序列,且條帶與預(yù)期大小一致;與對照組相比,菌液PCR鑒定結(jié)果為陽性,雙酶切的條帶長度分別為大約4000 bp和3050 bp,測序鑒定人BRE1B基因的編碼序列與插入的DNA序列完全一致;Western blot結(jié)果表明p CMV-Tag-2B-BRE1B重組質(zhì)粒在實驗組眼B16黑色素瘤細胞成功表達,對照組則未檢測到特異條帶;CCK8法和克隆形成法結(jié)果表明p CMV-Tag-2B-BRE1B重組質(zhì)粒能夠抑制眼B16黑色素瘤細胞的生長。結(jié)論本研究成功構(gòu)建了帶有p CMV-Tag-2B標簽的人BRE1B基因真核表達載體,并發(fā)現(xiàn)該基因抑制眼B16黑色素瘤細胞的生長。
[Abstract]:Objective to construct the eukaryotic expression vector of human BRE1B gene and to investigate the effect of human BRE1B gene on the growth of B16 melanoma cells. Methods B16 melanoma cells were randomly divided into two groups: the experimental group (transfected with p CMV-Tag-2B-BRE1B recombinant plasmid) and the control group (transfected with p CMV plasmid). Using breast cancer library as template, the CDS coding region of human BRE1B gene was amplified by PCR technique, and the recombinant plasmid of p CMV-Tag-2B-BRE1B was constructed. After transient transfection of p CMV-Tag-2B-BRE1B recombinant plasmid and p CMV plasmid into B16 melanoma cells, The expression of BRE1B protein was detected by Western blot assay, and the effect of the recombinant plasmid on the growth of B16 melanoma cells was detected by CCK8 assay and clone formation method. Results the sequence of CDS coding region of human BRE1B gene was amplified by PCR, and the band was the same size as expected. Compared with the control group, the results of PCR identification were positive. The length of the double enzyme digested bands was about 4000 BP and 3050 BP, respectively. The coding sequence of human BRE1B gene was identical with the inserted DNA sequence. The results of Western blot showed that the recombinant plasmid of p CMV-Tag-2B-BRE1B was successfully expressed in B16 melanoma cells of experimental group. In the control group, no specific band CCK8 assay and clone forming method were detected. The results showed that the recombinant plasmid of p CMV-Tag-2B-BRE1B could inhibit the growth of B16 melanoma cells. Conclusion the eukaryotic expression vector of human BRE1B gene with p CMV-Tag-2B tag was successfully constructed, and it was found that the gene inhibited the growth of B16 melanoma cells.
【作者單位】： 錦州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學基金資助(編號:81472589、81672602、81402345、81502264)~~
【分類號】：R739.7

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本文編號：1868951