發(fā)布時(shí)間：2018-05-09 10:16

  本文選題：肝細(xì)胞癌 + miR-26a��； 參考：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一部分EZH2介導(dǎo)啟動(dòng)子區(qū)域H3K27me3抑制miR-26a表達(dá)目的：從表觀遺傳角度探討肝細(xì)胞癌(Hepatocelluar carcinoma, HCC)中miR-26a的表達(dá)調(diào)控機(jī)制,闡述EZH2調(diào)控miR-26a表達(dá)的分子機(jī)理。方法：利用qRT-PCR和Western blot的方法驗(yàn)證HCC細(xì)胞系(HepG2、SMMC7721)中niR-26a和EZH2的表達(dá)水平：構(gòu)建并運(yùn)用EZH2過表達(dá)和沉默質(zhì)粒上調(diào)或下調(diào)HepG2、SMMC7721或正常永生化肝細(xì)胞系L02中EZH2表達(dá)水平,qRT-PCR方法檢測miR-26a表達(dá)變化；構(gòu)建miR-26a啟動(dòng)子報(bào)告基因質(zhì)粒,利用報(bào)告基因技術(shù)分析EZH2對(duì)]miR-26a啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響；利用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)驗(yàn)證EZH2是否通過介導(dǎo)啟動(dòng)子H3K27me3抑制miR-26a表達(dá)。結(jié)果：iR-26a在HepG2和SMMC7721中表達(dá)水平低于L02細(xì)胞,EZH2在HepG2和SMMC7721中表達(dá)水平高于L02細(xì)胞。下調(diào)HepG2和SMMC7721細(xì)胞中EZH2表達(dá)明顯上調(diào)miR-26a表達(dá)水平,上調(diào)L02中EZH2表達(dá)明顯降低miR-26a表達(dá)水平。沉默EZH2增強(qiáng)miR-26a啟動(dòng)子報(bào)告基因的熒光素酶活性。miR-26a啟動(dòng)子區(qū)域存在EZH2和H3K27me3的結(jié)合和富集,沉默EZH2后結(jié)合富集減弱。結(jié)論：HCC細(xì)胞系中miR-26a低表達(dá)而EZH2高表達(dá)。EZH2可通過介導(dǎo)啟動(dòng)子H3K27me3抑制miR-26a的表達(dá)。第二部分miR-26a靶向抑制EZH2的研究目的：驗(yàn)證HCC中miR-26a對(duì)EHZ2的靶向關(guān)系.方法：向HepG2或SMMC7721細(xì)胞中轉(zhuǎn)染不同濃度的miR-26a mimics,運(yùn)用qRT-PCR和Western blot的方法檢測EZH2的表達(dá)水平：構(gòu)建EZH23’UTR野生型及突變型報(bào)告基因質(zhì)粒,并與miR-26a mimics 或 Control mimics共轉(zhuǎn)染至HepG2或SMMC7721細(xì)胞,雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測熒光強(qiáng)度。結(jié)果：與C ontrol mimics相比,轉(zhuǎn)染niR-26a mimics的HCC細(xì)胞中EZH2的mRNA及蛋白水平明顯降低,且miR-26a濃度越高EZH2表達(dá)降低越明顯。成功構(gòu)建EZH23'UTR野生型及突變型報(bào)告基因質(zhì)粒。miR-26a mimics顯著降低了EZH2 3'UTR野生型報(bào)告基因的熒光素酶活性,而EZH2 3'UTR突變型報(bào)告基因則不受miR-26a影響。結(jié)論：HCC中EZH2是miR-26a的直接靶點(diǎn)。第三部分EZH2-miR-26a雙向負(fù)反饋環(huán)路調(diào)控肝癌細(xì)胞生長目的：驗(yàn)證EZH2-miR-26a雙向負(fù)反饋環(huán)路的存在,探討其對(duì)HCC細(xì)胞生長的影響。方法：在HepG2和SMMC7721細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-26a mimics,或同時(shí)過表達(dá)EZH2,運(yùn)用qRT-PCR方法檢測miR-26a宿主基因(CTDSPL/CTDSP2)和E-cadherin的表達(dá)水平。上調(diào)HepG2和SMMC7721細(xì)胞miR-26a表達(dá)水平或同時(shí)上調(diào)EZH2表達(dá)水平,或下調(diào)EZH2表達(dá)水平,運(yùn)用CCK-8和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖能力。結(jié)果：轉(zhuǎn)染外源性miR-26a mimics誘導(dǎo)內(nèi)源性CTDSPL.CTDSP2和E-cadherin的表達(dá),過表達(dá)EZH2消除了這種誘導(dǎo)作用。過表達(dá)miR-26a有效抑制HCC細(xì)胞增殖能力和克隆形成能力,而過表達(dá)EZH2消除了miR-26a對(duì)細(xì)胞增殖和克隆形成的抑制。和過表達(dá)miR-26a類似,沉默EZH2也可有效抑制HCC細(xì)胞增殖和克隆形成。結(jié)論：EZH2和miR-26a構(gòu)成了雙向負(fù)反饋環(huán)路調(diào)控HCC細(xì)胞生長。第四部分血清miR-26a作為肝細(xì)胞癌診斷標(biāo)志物的研究目的：評(píng)估血清miR-26a對(duì)肝細(xì)胞癌的診斷價(jià)值。方法：收集52例HCC患者、42例慢性肝炎患者和43例健康對(duì)照的血清標(biāo)本,運(yùn)用qRt-PCR方法檢測血清miR-21、miR-26a和miR-101的表達(dá)水平,運(yùn)用受試者工作特征曲線(ROC)分析評(píng)估其診斷價(jià)值。結(jié)果：HCC患者血清中miR-21表達(dá)水平明顯高于健康對(duì)照組,而miR-26a和miR-101表達(dá)水平明顯低于慢性肝炎(Chronic Hepatitis,CH)患者組以及健康對(duì)照組。ROC曲線分析顯示,血清miR-21、miR-26a和miR-101均可區(qū)分HCC患者和健康對(duì)照,ROC曲線下面積(AUC)分別為0.621(敏感性67.4%,特異性55.8%),0.754(敏感性51.9%,特異性95.2%)和0.631(敏感性47.1%,特異性81%),聯(lián)合miRNAs和AFP具有更高的診斷價(jià)值(AUC=0.917,敏感性87%,特異性78%)。miR-26a和miR-101可區(qū)分HCC患者和CH患者,AUC分別達(dá)到0.762(敏感性75%,特異性70%)和0.623(敏感性54.9%,特異性76.9%)。miR-26a、miR-101和甲胎蛋白(AFP)聯(lián)合診斷效果高于單獨(dú)使用AFP(AUC,0.854 vs 0.683)。血清miR-26a可以區(qū)分小體積HCC(3cm)和CH患者,其AUC為0.753,敏感性和特異性分別達(dá)到80%和62.5%。結(jié)論：(1)血清miR-21、miR-26a、miR-101均可作為HCC的潛在診斷標(biāo)志物。(2)聯(lián)合miR-21、miR-26a、miR-101和AFP對(duì)HCC的診斷價(jià)值高于單獨(dú)使用AFP。(3)血清miR-26a可作為HCC潛在的早期診斷標(biāo)志物。
[Abstract]:The expression of miR - 26a in HCC cell line ( HepG2 and SMMC7721 ) was investigated by qRT - PCR and Western blot .
constructing a miR - 26a promoter reporter plasmid , and analyzing the influence of EZH2 on the transcriptional activity of the miR - 26a promoter by using a reporter gene technique ;
The expression level of EZH2 in HepG2 and SMMC7721 cells was lower than that of L02 cells . The ROC curve analysis showed that serum miR - 21 , miR - 26a and miR - 101 can distinguish HCC patients and healthy controls . The area under ROC curve ( AUC ) is 0.621 ( sensitivity 67.4 % , specificity 55.8 % ) , 0.754 ( sensitivity 51.9 % , specificity 95.2 % ) and 0.623 ( sensitivity 54.9 % , specificity 76.9 % ) . The combined diagnosis effect of miR - 26a , miR - 101 and AFP ( AFP ) is higher than that of AFP ( AUC , 0.854 vs 0.683 ) alone . Conclusion : ( 1 ) Serum miR - 21 , miR - 26a , miR - 101 can be used as potential diagnostic markers for HCC . Conclusion : ( 1 ) Serum miR - 21 , miR - 26a , miR - 101 and AFP can be used as potential diagnostic markers for HCC . ( 2 ) The diagnostic value of miR - 21 , miR - 26a , miR - 101 and AFP to HCC is higher than that of AFP alone . ( 3 ) Serum miR - 26a can be used as an early diagnostic marker for HCC .

【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;早期發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌可增加治療機(jī)會(huì)[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2000年02期

2 Schafer DF,潘朝法,李蘇云;肝細(xì)胞癌[J];第四軍醫(yī)大學(xué)吉林軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年01期

3 中沼安二,林淑蘭,姚楨;有關(guān)小肝細(xì)胞癌病理學(xué)的最新認(rèn)識(shí)[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2000年05期

4 靜雨;;美國肝細(xì)胞癌發(fā)病率增高[J];國外醫(yī)學(xué)情報(bào);2000年01期

5 張玉勛;;肝細(xì)胞癌的非手術(shù)治療[J];國外醫(yī)學(xué)情報(bào);2000年05期

6 徐宏勇,李開宗,付由池,竇科峰,李景夢(mèng),何揚(yáng)舉;bcl-x,bax基因表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年14期

7 蔡端;多中心源肝細(xì)胞癌的特征:與肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的比較[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2002年02期

8 張春平;與白介素-18水平升高有關(guān)的肝細(xì)胞癌自發(fā)性消退[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2003年03期

9 薛海鷗,岳莉;兒童肝細(xì)胞癌1例報(bào)告[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年04期

10 德力,白志剛,牧榮,賴玉書,金燦浩,夏醫(yī)君;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)和預(yù)后的關(guān)系[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2003年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 卞讀軍;;肝細(xì)胞癌經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞前后磁共振波譜研究[A];2009中華醫(yī)學(xué)會(huì)影像技術(shù)分會(huì)第十七次全國學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2009年

2 賈建偉;趙潔;;肝細(xì)胞癌領(lǐng)域研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[A];中醫(yī)藥防治感染病之研究（九）——第九次全國中醫(yī)藥防治感染病學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文集[C];2009年

3 陳孝平;;肝細(xì)胞癌外科治療進(jìn)展[A];湖北省第21屆腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2011年

4 張杰;劉軍建;韓云;張寧;芮靜安;金城;周柔麗;;用熒光差異顯示法篩選肝細(xì)胞癌相關(guān)新基因[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

5 馮仕庭;李子平;譚國勝;孫燦輝;彭振鵬;;中晚期肝細(xì)胞癌的多層螺旋CT血管造影表現(xiàn)及臨床應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國放射學(xué)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2006年

6 張法標(biāo);方哲平;王義;董輝;叢文銘;;上皮鈣粘素和β-連接素在兒童肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義[A];2007年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

7 陳鐘杰;;螺旋CT診斷原發(fā)型肝細(xì)胞癌28例[A];2008年浙江省放射學(xué)年會(huì)論文匯編[C];2008年

8 賈克東;;肝細(xì)胞癌的診斷進(jìn)展及治療現(xiàn)狀[A];全國中西醫(yī)結(jié)合肝病新進(jìn)展講習(xí)班、江西省第二次中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2010年

9 李秋萍;龍順欽;楊小兵;鄧宏;蔡姣芝;潘宗奇;河文峰;周宇姝;歐陽育樹;廖桂雅;吳萬垠;;癌服靈治療晚期肝細(xì)胞癌的臨床研究[A];2012·中國醫(yī)師協(xié)會(huì)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會(huì)第三次會(huì)議論文集[C];2012年

10 朱明華;祝峙;劉曉紅;林靜;曲建慧;陳穎;曹曉哲;王力;倪燦榮;;乙型肝炎病毒感染與肝細(xì)胞癌發(fā)生關(guān)系的分子病理學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 中國抗癌協(xié)會(huì)臨床腫瘤學(xué)協(xié)作專業(yè)委員會(huì)主任委員 秦叔逵;治療肝細(xì)胞癌 別只盯著靶向藥[N];健康報(bào);2013年

2 記者 王丹 管九蘋;肝細(xì)胞癌標(biāo)志物研究獲新進(jìn)展[N];健康報(bào);2013年

3 吳一福;四軍醫(yī)大唐都醫(yī)院發(fā)現(xiàn)硒蛋白P與肝細(xì)胞癌發(fā)生有關(guān)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

4 黎彬;肝癌研究重要進(jìn)展——預(yù)測肝癌轉(zhuǎn)移成為可能[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

5 錢文彩;α2δ1陽性細(xì)胞為新的肝細(xì)胞癌干細(xì)胞[N];中國醫(yī)藥報(bào);2013年

6 新美;基礎(chǔ)研究進(jìn)展推動(dòng)肝臟病學(xué)進(jìn)步[N];中國醫(yī)藥報(bào);2008年

7 周金蓮;MIB-1和bcl-2表達(dá)預(yù)測肝癌發(fā)生[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

8 張金山;要靈活運(yùn)用影像學(xué)提供的方法和手段[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

9 李杰;不能手術(shù)切除肝細(xì)胞癌的治療[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

10 ;修復(fù)肝細(xì)胞 改善肝功能[N];人民日?qǐng)?bào)海外版;2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 白蘭;乙肝病毒捕獲細(xì)胞因子和信號(hào)級(jí)聯(lián)以逃避宿主免疫并維持持續(xù)感染[D];武漢大學(xué);2014年

2 何洪衛(wèi);肝細(xì)胞癌內(nèi)γδT細(xì)胞浸潤減少及功能缺陷的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 蔡曉燕;淋巴細(xì)胞在肝細(xì)胞癌和癌旁組織中的差異性表達(dá)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 向?qū)?細(xì)胞周期因子FoxM1促進(jìn)肝臟再殖的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 康富標(biāo);共刺激分子B7-H3在肝細(xì)胞癌的表達(dá)及相關(guān)機(jī)制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

6 楊純;Gankyrin正反饋調(diào)控Nrf2在肝細(xì)胞癌中發(fā)揮抗氧化作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 高霞;PNPLA3基因單核苷酸多態(tài)性及基因表達(dá)與乙肝病毒感染易感性及乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌的關(guān)聯(lián)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

8 彭晨星;microRNA結(jié)合位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性對(duì)肝細(xì)胞癌預(yù)后影響的相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

9 田偉;γδT細(xì)胞免疫治療肝細(xì)胞癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

10 葉甲舟;RBM8A與肝細(xì)胞癌的相關(guān)性及對(duì)肝細(xì)胞癌增殖及凋亡生物學(xué)特性的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王飛;CDH17調(diào)控肝細(xì)胞癌的生物學(xué)機(jī)制的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳中博;咖啡攝入與肝細(xì)胞癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的Meta分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張華鵬;核受體輔激活蛋白5在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];鄭州大學(xué);2015年

4 郭慧敏;血清sCD25測定在肝細(xì)胞癌診斷中的意義[D];鄭州大學(xué);2015年

5 凌青霞;雙氧化酶1（Duox1）在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)調(diào)控及作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

6 李會(huì)芬;血清Talin-1在肝細(xì)胞癌診斷中的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

7 蒙錦瑩;血管生長相關(guān)因子的血清濃度與肝細(xì)胞癌預(yù)后的相關(guān)性研究[D];蘭州大學(xué);2015年

8 戰(zhàn)勇;肝細(xì)胞癌術(shù)前造影參數(shù)與生物學(xué)表現(xiàn)相關(guān)性及術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)因素討論[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

9 姚樂;microRNA-32在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床預(yù)后意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 吳華;MACC1在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)與臨床意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1865638